围产期甲减对大鼠脑内甲状腺激素受体基因表达的影响

一、围生期甲减对大鼠脑甲状腺激素受体基因表达的影响（论文文献综述）

白尹豪^[1]（2020）在《隔药灸脐法治疗桥本甲状腺炎的临床研究》文中指出目的:1.基于现阶段临床证据,探索采用灸法治疗桥本甲状腺炎的可行性;2.观察隔药灸脐法对桥本甲状腺炎患者中医临床症状评分、甲状腺功能、形态及健康状况的影响。方法:1.Meta分析:采用计算机检索中国知网数据库、中国生物医学文献、万方数据库、Pubmed、Embase和Cochrane Library,全面检索所有关于灸法治疗桥本甲状腺炎的临床随机对照试验,采用人工筛选的方法收集灸法治疗桥本甲状腺炎的临床证据,使用Cochrane Handbook推荐偏倚风险评估工具Risk of bias tool对纳入试验进行质量评价,采用Review Manager5.3软件进行统计分析并绘图。2.临床研究:采用随机单盲法将纳入的60例患者分为隔药灸脐组30例、隔淀粉灸脐组30例,治疗3个疗程后,观察两组患者治疗前后的中医临床症状、甲状腺激素水平（FT3、FT4、TSH）、甲状腺激素滴度（TPOAb、TGAb）、甲状腺形态、健康状况调查简表评分（SF-36）的变化。结果:1.Meta分析结果:（1）与单纯使用西药相比,灸法在升高FT3值方面疗效优于西药;在降低桥本甲状腺炎患者TGAb值、MCA值、TSH值方面疗效与西药相当且有优于西药的趋势,在升高桥本甲状腺炎患者FT4值方面疗效与西药相当。（2）与单纯使用西药相比,灸法联合西药在降低桥本中状腺炎患者TGAb值、MCA值、TPOAb值方面疗效优于西药,在升高桥本甲状腺炎患者FT3值方面疗效优于西药,在提高临床疗效方面效果优于西药;在降低桥本甲状腺炎患者TSH值方面疗效与西药相当且有优于西药的趋势,在升高桥本甲状腺炎患者FT4值方面疗效与西药相当且有优于西药的趋势。2.临床研究结果:（1）中医临床症状改善情况:隔药灸脐组患者颈前肿大、畏寒怕冷、胃脘或胁肋痛、情绪抑郁、便溏不爽的临床症状改善明显（P<0.01）,隔淀粉灸脐组患者情绪抑郁、便溏不爽的临床改善明显（P<0.01）;隔药灸脐组总有效率为80.95%,隔淀粉灸脐组总有效率为42.11%,比较两组差异有明显统计学意义（P<0.01）。（2）甲状腺激素水平改善情况:隔药灸脐组在治疗后FT3、FT4、TSH较治疗前存在显着统计学差异（P<0.01）;隔淀粉灸脐组在治疗后仅FT3水平比较有显着统计学意义（P<0.01）;在甲状腺激素水平改善程度上,两组比较有统计学差异（P<0.05）。（3）甲状腺抗体滴度改善情况:隔药灸脐组治疗前后TPOAb、TGAb组内比较有显着统计学意义（P<0.01）,隔淀粉灸脐组患者治疗前后TPOAb、TGAb组内比有统计学意义（0.01<P<0.05）,两组患者治疗后TPOAb、TGAb组间比较无统计学意义（P>0.05）。（4）甲状腺形态方面:隔药灸脐组治疗前后甲状腺结节最大直径、甲状腺峡部厚度、左叶厚度、右叶厚度比较有显着统计学意义（P<0.01）,隔淀粉灸脐组各项指标治疗前后无统计学意义（P>0.05）;两组组间比较有统计学意义（P<0.05）。（5）健康状况评分方面:隔药灸脐组患者治疗后在一般健康状况、躯体疼痛、生理职能、社会功能、情感职能方面均有改善（P<0.05）;隔淀粉灸脐组患者仅在在一般健康状况方面有改善（P<0.05）。组间比较:在一般健康状况、健康变化方面两组差值比较有显着统计学意义（P<0.01）;在生理机能方面两组差值比较有统计学意义（P<0.05）。结论:1.现阶段临床证据表明,与常规西药相比,灸法在治疗桥本甲状腺炎方面可能存在优势。2.隔药灸脐法可以明显改善桥本甲状腺炎患者中医临床症状,改善甲状腺激素水平（FT3、FT4、TSH）以及甲状腺抗体滴度水平（TPOAb、TGAb）,提高患者生活质量,部分改善甲状腺肿大程度,且疗效优于隔淀粉灸脐法。

徐永霞^[2]（2019）在《基底前脑胆碱能神经系统调节甲状腺功能减退症小鼠的认知行为的作用机制》文中认为目的:甲状腺功能减退症（Hypothyroidism,简称甲减）是临床常见的一种内分泌系统疾病,由多种原因引起的甲状腺激素（thyroid hormones,TH）合成、分泌或生物效应不足导致的临床综合征。甲减的病因复杂,常以原发性甲减多见。成年期甲减除低代谢症候群、黏液性水肿等症状外,还伴有神经精神症状、肌肉与关节病变等。临床上甲减需使用甲状腺激素替代治疗（thyroid hormone replacement therapy）,但部分患者替代至甲状腺激素水平正常时,其神经精神症状仍未完全缓解,其原因未明。本项目拟借助转基因小鼠建立甲减动物模型,研究甲减小鼠的认知行为变化,并以四碘甲腺原氨酸（levothyroxine,LT4）替代治疗,化学遗传学方法或药理学方法特异性调节胆碱能神经元活性,阐明基底前脑胆碱能神经元对甲减相关的认知功能的改善作用及调节机制。方法:雄性无特定病原体（Specific Pathogen Free,SPF）级ChAT-Cre小鼠（该转基因小鼠在胆碱乙酰移位酶,choline acetyltransferase,ChAT基因下游插入Cre重组酶基因,Cre重组酶基因受到ChAT基因启动子的调控,所以Cre重组酶特异性地表达于胆碱能神经元。）实验开始时体重约22-25 g,年龄8-10周。立体定位微注射法将AVV-DIO-hM3Dq-mCherry微量（20 nl/侧）注射至ChAT-Cre小鼠的基底前脑。术后将小鼠饲养在温度22oC±1oC,湿度55%-65%,明暗周期（12 h/12 h,开灯时间7:00）的实验室环境下,小鼠自由摄食、饮水。甲减模型小鼠以丙基硫氧嘧啶（Propylthiouracil,PTU）浓度为1 mg/ml溶于饮用水内,每周更换一次PTU溶液,同时更换动物垫料、称量体重,从第4周开始,LT4替代治疗小鼠在饮用PTU溶液的基础上,再给予LT4 10 mg/kg;共持续6-7周后开始进行电生理学及行为学等实验。脑片膜片钳技术检测正常小鼠及甲减小鼠基底前脑胆碱能神经元电生理学特性;化学遗传学方法结合被动回避实验或新物体识别实验研究基底前脑胆碱能神经元特异性激活后甲减小鼠学习记忆能力变化,所有实验结束后,通过心脏取血,测量血清T3、T4及TSH水平评价不同小鼠的甲状腺功能。C57BL/6j小鼠分为5组,分别为对照组、甲减组、LT4治疗组、LT4+多奈哌齐（5 mg/kg）治疗组和LT4+多奈哌齐（10 mg/kg）治疗组。甲减模型小鼠PTU（1mg/ml）饮水,每周更换一次PTU溶液,同时更换动物垫料、称量体重,从第4周开始,LT4替代治疗小鼠在饮用PTU溶液的基础上,再给予LT4 10 mg/kg;LT4联合多奈哌齐治疗的小鼠则是在PTU基础上,给予LT4 10 mg/kg和多奈哌齐5、10 mg/kg。药理学方法特异性调节小鼠脑内胆碱能神经元活性,同时借助被动回避试验和新物体识别试验测定不同小鼠的学习记忆能力,行为学实验结束,动物麻醉后,通过心脏取血,测量血清T3、LT4及TSH水平评价不同小鼠的甲状腺功能。并探讨基底前脑胆碱能神经元对甲减相关脑认知能力的影响及机制。结果:对于ChAT-Cre小鼠,与正常对照组相比,甲减小鼠在第1、2周体重明显低于正常对照组小鼠,第3、4、5、6周各组小鼠的体重无显着性差异。甲状腺激素水平测定发现甲减小鼠的血清T3、T4水平均低于对照组小鼠和LT4替代治疗小鼠,而甲减小鼠的血清TSH水平显着升高。甲减小鼠胆碱能神经元动作电位幅度降低、静息膜电位水平升高等,LT4替代治疗后未完全恢复。脑立体定位微注射法将化学遗传学载体蛋白hM3Dq特异性表达在胆碱能神经元,免疫荧光染色确认hM3Dq表达在胆碱能神经元。氧化氯氮平（clozapine O oxide,CNO）可特异性激活神经元上的hM3Dq从而启动Gq信号通路,兴奋基底前脑胆碱能神经元。全细胞脑片膜片钳记录发现CNO可诱导胆碱能神经元放电持续增加,兴奋神经元。被动回避试验发现相对于正常对照组小鼠,甲减小鼠潜伏期显着缩短,而LT4替代治疗不能使其完全恢复到正常对照组水平,给予CNO后特异性激活基底前脑胆碱能神经元可显着增加甲减和LT4治疗后小鼠的潜伏期,提高其学习记忆能力。对C56BL/6j小鼠,与正常对照组相比,甲减小鼠在第1、2周体重明显低于正常对照组小鼠,第3、4、5、6周各组小鼠的体重无显着性差异。甲状腺激素水平测定发现甲减小鼠血清T3、T4水平均低于对照组小鼠、LT4替代治疗或LT4联合多奈哌齐治疗小鼠,而甲减小鼠的血清TSH水平显着升高。LT4联合不同剂量的多奈哌齐（5、10 mg/kg）治疗后,多奈哌齐可呈剂量依赖的缩短小鼠的潜伏期,增强小鼠的学习记忆能力。同样地,新物体识别试验结果也提示甲减或LT4替代治疗小鼠的新物体识别分数较低。研究表明,多奈哌齐是一种中枢神经系统内乙酰胆碱酯酶（AChE）抑制剂,对外周组织的AChE作用很小。多奈哌齐能抑制AChE活性,减慢突触间隙内乙酰胆碱（ACh）的分解,提高突触间隙内ACh含量,提高胆碱能神经活性,从而改善认知功能,可有效提高小鼠的学习记忆能力。结论:1.甲减小鼠基底前脑胆碱能神经元电生理特性受损、LT4替代治疗之后胆碱能神经元活性未恢复到正常对照组水平,提示甲减小鼠基底前脑胆碱能神经元活性受损,而LT4替代治疗不能完全恢复胆碱能神经元活动。2.化学遗传学方法可有效诱导基底前脑胆碱能神经元放电增加,特异性激活基底前脑胆碱能神经元,可显着提高甲减小鼠的学习记忆能力。3.LT4联合多奈哌齐治疗后,通过药理学手段提高脑内胆碱能神经系统活性,也可有效提高甲减小鼠的认知能力。

刘洲君^[3]（2019）在《母鼠甲状腺机能减退对子代糖代谢的影响及其机制》文中研究指明背景:自1990年英国学者提出“成人疾病的胎儿起源”学说后,母体甲状腺机能减退对子代成年后退行性疾病和代谢性疾病的影响受到越来越多的关注。母体甲状腺来源的甲状腺激素对子代生长发育和代谢发挥重要的作用,母体甲减可导致胎儿宫内发育迟缓,影响神经系统、皮肤、肺脏和骨骼系统的发育。而孕期甲状腺机能减退对子代糖代谢的影响也得到了证实,但是其具体机制尚不明确。甲状腺激素受体（Thyroid hormone receptor,THR）是甲状腺激素发挥生物学效应的重要途径,目前已知活性甲状腺激素可通过甲状腺激素受体β（Thyroid hormone receptor β,TRβ）对胰岛素分泌及β细胞增殖产生影响,但宫内甲状腺激素缺乏是否通过TRβ受体途径对子代胰岛细胞功能产生影响尚无研究报道。目的:本研究以抗甲状腺药物丙硫氧嘧啶（PTU）诱导甲状腺机能减退大鼠模型,观察产后及仔鼠各观察阶段甲状腺激素水平,评估母体甲状腺机能减退对子代胰岛发育的影响及血糖代谢的作用,观察母鼠甲减对胰腺增殖功能和胰岛素分泌能力的影响,并观察胰腺TRβ表达的变化。通过细胞实验观察甲状腺激素对胰岛β细胞增殖、胰岛素分泌功能影响,并探讨TRβ对甲状腺激素的调控作用。从而为青年起病的糖尿病的预防治疗及新药研发提供科学理论依据和实验依据。方法:动物实验部分:将生长至180-220 g的雌性Sprague-Dawley（SD）大鼠分为母鼠甲减组（maternal hypothyroidism,MH）和对照组（control）,利用抗甲状腺药物PTU加入自然饮水的方法制备SD大鼠甲状腺机能减退模型。MH组雌鼠与雄鼠交配后的SD孕鼠母体模拟胎儿宫内甲减状态,而对照组摄入普通饮水,孕期持续监测甲状腺激素T4和TSH,以评价造模是否成功,此外监测母鼠分娩后甲功,以评估模型是否具有持久稳定性。观察孕鼠妊娠率、孕期体重增加情况、仔鼠出生后体重和甲状腺功能,以评估母鼠甲减围生期结局。通过口服葡萄糖耐量试验观察雄性仔鼠各观察时期糖代谢情况,取两组实验大鼠的胰腺组织,通过实时荧光定量PCR（Real-time quantitative PCR,RT-PCR）及组织免疫染色方法观察子代各观察时期胰岛中增殖标志蛋白Ki67 mRNA、insulinl mRNA、insulin2 mRNA、TRβ31 mRNA和TRβ2 mRNA及蛋白的表达,以了解母体甲状腺机能减退对子代成年后血糖代谢的影响、胰岛细胞增殖功能和胰岛素合成和分泌功能的影响及机制。细胞部分:常规方法培养小鼠胰岛细胞株MIN6细胞,分别用不同浓度甲状腺激素T3（10-8、10-7、10-6、10-5、104、10-3、10-2 mM）干预MIN6细胞24、48、72小时,用CCK-8（cell counting kit-8,CCK-8）测定不同时间段、不同浓度T3对MIN6细胞活力的影响,确定T3最佳作用浓度为10-4 mM,最佳作用时间为72小时,选择该浓度为干预浓度。构建稳定表达TRβ的小鼠胰岛素MIN6细胞稳转细胞株。将培养的细胞分为4组:空质粒对照组（NC）,空质粒对照+T3干预组（NC+T3）,TRβ过表达细胞组（TRβ）,TRβ过表达细胞+T3干预组（TRβ+T3）,观察72小时,利用葡萄糖刺激胰岛素分泌试验（Glucose-stimulated insulin secretion test,GSIS）检测每组细胞胰岛素分泌功能,利用RT-PCR检测细胞Ki67 mRNA、Insulinl mRNA、Insulin2 mRNA表达水平,以确认甲状腺激素T3是否通过TRβ发挥促胰岛素分泌作用和细胞增殖功能。结果:动物实验中,母鼠甲减组妊娠率为36.36%,低于正常对照组的70%（p<0.05）,甲减组孕期体重增长较正常组下降（118.5±9.5 vs 154.8±9.7g,p<0.05）。且母鼠甲减组的雄性仔鼠出生体重明显低于正常对照组（5.43±0.10 vs 7.30±0.12g,尸<0.001）,连续观察体重至8周龄母鼠甲减组雄性仔鼠的体重均低于对照组仔鼠,4周、8周龄时母鼠甲减组和对照组体重分别为（74.01±1.75 vs 86.78±2.80g,pp<0.01）,（130.4±11.48 vs 202.4±9.28g,p<0.001）。两组雄性仔鼠出生时甲状腺激素T4水平差异无统计学意义（0.37±0.06 vs 0.33±0.02μg/dL,p>0.05）,而母鼠甲减组仔鼠TSH水平显着高于对照组仔鼠（3.08±0.05 vs 2.37±0.28 ng/mL,p<0.05）,但出生4周后两组仔鼠TSH、T4水平差异均无统计学意义。母鼠甲减组仔鼠出生当天的随机血糖为7.05±0.21 mmol/L,高于对照组6.47±0.10 mmol/L（p<0.05）,进一步对各观察时期仔鼠行口服葡萄糖耐量试验（oral glucose tolerance test,OGTT）显示母鼠甲减组仔鼠4周龄时各检测点血糖水平与对照组均无统计学差异,而在8周龄时空腹血糖明显高于对照组仔鼠（8.13±0.38 mmol/L vs 6.63±0.19 mmol/L,p<0.05）,糖负荷后血糖变化趋势与对照组相似,均出现于15min,但母鼠甲减组血糖值高于对照组（17.84±0.81 mmol/L vs 14.34±1.21 mmol/L,p<0.05）。胰腺组织H&E染色显示,4周龄、8周龄时甲减组仔鼠胰岛形态结构和正常组无明显差异,然而RT-PCR结果和胰腺组织免疫组化结果显示,胰岛细胞胰岛素合成和细胞增殖标志物的mRNA和蛋白表达水平均低于对照组。体外实验中,CCK-8结果显示甲状腺激素T3能明显促进MIN6细胞的增殖,并呈浓度和时间依赖性,T3最佳作用浓度为10-4mM。通过RT-PCR发现,NC组MIN6细胞加入含T3的培养液后,Ki67 mRNA、Insulin1 mRNA、Insulin2 mRNA表达增加,同时TRβmRNA表达上调。TRβ+T3组细胞增殖标志物Ki67 mRNA的水平较对照组显着增加（p<0.05）。GSIS显示,TRβ+T3组的MIN6细胞经高糖刺激后,胰岛素释放量显着高于NC组细胞（p<0.05）。结论:母体甲状腺机能减退可导致母鼠妊娠率下降,体重增加减少;并导致雄性仔鼠出生后0-8周生长发育迟缓,由此认为孕期甲状腺机能减退与围生期不良结局相关。甲状腺激素T3有明确的促进MIN6细胞增殖和胰岛素分泌的能力,宫内甲减可能通过子代胰腺中TRβ基因适应性下调,导致胰腺细胞增殖、胰岛β细胞分泌胰岛素的能力下降,最终导致子代青年期开始出现空腹血糖升高及糖耐量异常,故母体甲状腺激素可能通过TRβ受体对子代胰腺细胞增殖和胰岛素分泌发挥重要的作用,TRβ受体表达的下调可能是早发糖尿病的关键调节因子。

党萍萍^[4]（2020）在《甲状腺激素核受体α1-E403X基因突变对小鼠海马形态发育和功能影响的研究》文中研究指明目的:甲状腺激素对中枢神经系统的发育和功能至关重要。发育期或/和成年期发生的甲状腺激素缺乏均能导致海马结构和相应学习记忆功能的损伤。甲状腺激素主要通过结合其核受体来调控靶基因的表达,进一步发挥相应的生物学效应。本研究课题组成功构建了甲状腺激素核受体亚型1（TRα1-E403X）基因突变的小鼠模型,先前的研究观察到该模型突变小鼠离体海马学习记忆功能受损。本研究将进一步探讨TRα1-E403X突变对小鼠海马形态发育和功能的影响,并其作用机制将进行初步探讨。本研究也将采用高敏感性和特异性的RNAscope?分析原位杂交（ISH）方法来检测甲状腺激素核受体亚型1（TRα1）在小鼠不同发育时期海马组织中的表达情况。方法:采用本课题组已经制备的TRα1-E403X突变模型小鼠,繁育实验用的各种基因型雄性小鼠。实验时点分为出生后0天、7天、3周龄、6周龄和16周龄。实验项目:1.应用RNAscope?原位杂交（ISH）技术来观察小鼠不同发育时期海马组织中TRα1的表达情况。2.对P0、P7、3、6和16周龄小鼠进行脑组织尼氏染色观察海马形态发育;3.对16周小鼠进行零迷宫、旷场、新异物体识别实验、悬尾实验评估小鼠相应的学习记忆功能和恐惧焦虑、抑郁水平;4.对3和16周小鼠进行海马组织表达谱测序,筛选与海马结构发育及功能相关的差异表达基因,并进一步在3和16周小鼠海马组织中应用实时定量聚合酶链式反应（RT-PCR）对筛选出的差异表达基因进行验证。结果:1.RNAscope?分析原位杂交（ISH）结果:小鼠的不同发育时期,观察到从小鼠胚胎早期原始神经管发育到海马形态发育成熟的整个过程中,原始神经上皮细胞和海马各亚区均有TRα1表达,且在海马形态发育高峰时期,TRα1表达也处于高峰。2.形态学实验结果:P0时点:TRα1-E403X纯合突变小鼠与野生型小鼠海马组织尼氏染色相比,纯合突变小鼠海马体积较小,在海马槽区神经上皮层仍较厚;此时,向海马CA1区进行迁移的锥体细胞占据海马CA1区全层,海马CA1区始发层尚未出现,锥体细胞尚未迁移定居在锥体细胞层而在中间层逗留,分散于海马CA1区;杂合突变型小鼠与野生型小鼠海马形态类似,但其锥体细胞大多数仍旧逗留在中间层,只有小部分锥体细胞迁移至CA1区的锥体细胞层,而已完成迁移定居的锥体细胞数量少,细胞排列分散,不集中。P7时点:纯合突变小鼠海马组织尼氏染色,与野生型小鼠海马形态相比,海马槽区域仍旧有部分神经上皮细胞尚未完成向海马CA1区的迁移,海马CA1区锥体细胞部分完成了迁移定居,仍有许多细胞仍在迁移中,逗留在中间层,此时海马CA1区三层结构也逐渐清晰;已完成迁移定居的海马CA1区的锥体细胞体积小,数目少,不如野生型小鼠锥体细胞排列致密整齐。杂合突变小鼠海马组织尼氏染色结果介于野生型小鼠和纯合突变小鼠之间。3周龄时点:杂合突变型小鼠和纯合突变型小鼠与野生型小鼠海马形态相比,海马CA1区的锥体细胞完成了迁移定居,且海马CA1区三层结构清晰,但完成迁移定居的海马CA1区锥体细胞层的锥体细胞数量少,细胞排列分散,不集中,不如野生型小鼠锥体细胞排列整齐。6周龄时点:杂合突变小鼠与野生型小鼠海马形态相比,海马CA1区三层结构清晰,但海马CA1区锥体细胞层的锥体细胞排列分散,不集中,不如野生型小鼠锥体细胞排列整齐。16周龄时点:杂合突变型小鼠与野生型小鼠海马CA1区形态相比,海马CA1区三层结构清晰,海马CA1区锥体细胞层的锥体细胞形态及排列情况无明显差异。3.行为学实验结果:16周龄杂合突变小鼠在零迷宫实验中,小鼠总运动距离缩短,僵直不动时间比例增加,进入开臂次数及探头次数均减少,排出大便个数增加,且差异均有统计学意义。在悬尾实验中,16周龄杂合突变小鼠僵直不动时间延长,但差异无统计学意义。其它实验项目中未发现杂合突变小鼠有明显异常的表现。4.海马组织表达谱测序及验证结果:3周龄纯合突变小鼠海马组织中Calml4和RC3表达降低,NGF和c-Fos表达无差异。3周龄杂合突变小鼠海马组织中Calml4和c-Fos表达降低;16周龄杂合突变小鼠海马组织中c-Fos表达降低。结论:1.从小鼠胚胎早期神经管形成到海马发育成熟的各个时期,TRα1在神经管原始神经上皮细胞和海马组织各亚区均有表达,并且在海马CA1区发育高峰时期TRα1的表达量升高。2.TRα1-E403X基因突变引起突变小鼠海马CA1区神经细胞迁移延迟,细胞数目减少,排列分散,不规整。3.TRα1-E403X突变小鼠存在学习记忆能力的损害,且当外界存在应激环境时,更易于出现恐惧焦虑的情绪,也有一定程度的抑郁倾向;4.TRα1-E403X突变会下调突变小鼠海马组织中与突触可塑性相关的分子表达,提示该受体的突变可能参与对这些分子在海马组织中的表达调控,从而导致突变小鼠出现海马相关的功能损害。

何雪^[5]（2018）在《Wistar大鼠脑发育早期母体甲状腺激素缺乏对后代脑发育影响及机制研究》文中认为目的:母体甲状腺功能减退影响后代脑发育过程中神经元的迁移、分化、树突和轴突的生长,以及突触形成和髓鞘形成。后代表现为智力发育不良,语言记忆能力下降,严重者出现呆小症。上世纪六十年代,人们普遍认为甲状腺激素（TH）不能够通过胎盘,对甲状腺激素影响脑发育的相关研究主要集中在出生后阶段。随着优生优育需求的提高,医学筛查手段,生物分子技术的进展,发现胎儿在宫内甲状腺未发育完全且甲功未建立之前,脑组织中已经有甲状腺激素受体的表达且体内能够检测到一定量的甲状腺激素。这说明妊娠期间母体甲状腺激素能够通过胎盘屏障到达胎儿体内。胎儿甲状腺功能建立之前,母体甲状腺激素的缺乏也能够导致胎儿出生后智力下降。哺乳动物脑发育按照一定的时间和空间次序进行,且甲状腺激素的调节作用具有时间和空间特异性。即甲状腺激素对不同组织和不同细胞存在不同的作用,而且对于同一组织或细胞在不同阶段的调节作用也不尽相同。脑发育不同阶段母体甲状腺激素缺乏对后代神经精神发育的影响是否存在差异仍不清楚。围产期甲状腺激素过量能够导致后代的神经元分化加速。妊娠期间特异的应激状态,容易发生妊娠一过性甲状腺毒症,研究发现妊娠一过性毒症对妊娠结局有影响。其对后代神经发育是否有影响暂无相关报道。甲状腺激素通过核受体途径调节靶基因转录,影响神经元发育相关因子表达。其能够与多种核受体形成异源二聚体,招募转录激活或转录抑制因子发挥不同的转录调节作用。研究者针对甲状腺激素靶基因进行了多次筛选,研究多集中在后代出生后。但脑发育早期母体甲状腺激素缺乏所导致的后代脑组织基因表达谱改变相关研究现在仍存在空白。本研究建立脑发育不同阶段母体甲状腺激素缺乏模型,探究脑发育不同阶段甲状腺激素缺乏对后代神经精神发育影响的差异。探究脑发育早期母体甲状腺激素过量和缺乏对后代的精神神经发育影响,并进行相关机制研究。对脑发育早期甲状腺激素靶基因进行筛选,为甲状腺激素影响后代早期脑发育的机制提供新线索。研究方法:第一部分:采用0.025%甲巯咪唑（MMI）饮水和1.5μg/100g体重每天左旋甲状腺素（L-T4）连续三天皮下注射建立妊娠第10（GD10）-第17天（GD17）（相当于人类脑发育第一阶段）、GD17-仔鼠出生当天（PND0）（相当于人类脑发育第二阶段）、和PND0-出生后10天（PND10）（相当于人类脑发育第三阶段）母体甲状腺激素缺乏孕鼠模型,正常对照组给予正常饮水,等体积生理盐水皮下注射,每组15只。分别在各组预期的模型建立时间和激素补充的第二天进行眶后静脉采血,ELISA法测定孕鼠血清中总甲状腺素（TT4）和促甲状腺激素（TSH）含量,验证模型建立情况。仔鼠PND10进行心尖取血,ELISA法检测仔鼠血清总甲状腺素（TT4）和促甲状腺激素（TSH）含量。分离大脑皮层,匀浆后ELISA法检测脑组织中TT4含量。仔鼠PND10进行翻正反射和触须引发的前肢放置实验,检测后代躯体感觉和运动皮层功能。进行长时程增强实验,检测后代海马CA1-CA3区突触可塑性和突触传递性。仔鼠成年PND40开始依次进行旷场实验,高架十字迷宫,零迷宫,旋转加速实验,水迷宫,强迫游泳实验,检测后代活动度、焦虑抑郁倾向、运动能力和学习记忆能力。第二部分:1.采用0.025%甲巯咪唑（MMI）饮水和1.5μg/100g体重每天左旋甲状腺素（L-T4）皮下注射建立妊娠第10（GD10）-第17天（GD17）（相当于人类脑发育第一阶段）母体甲状腺激素缺乏孕鼠模型和1μg/100g体重每天左旋甲状腺素（L-T4）皮下注射建立脑发育早期母体甲状腺激素过量模型,正常组给予正常饮水,等体积生理盐水皮下注射,每组15只。2.在母体甲状腺激素缺乏组模型预期建立和激素补充的第二天和母体甲状腺激素过量组模型预期建立相应时间点进行眶后静脉采血,ELISA法检测孕鼠血清TT4和TSH含量,验证模型建立情况。3.仔鼠PND10进行心尖取血,罗氏电化学发光法检测仔鼠血清TT4含量。分离大脑皮层,匀浆后ELISA法检测脑组织中TT4含量。4.仔鼠成年PND40开始依次进行水迷宫,条件恐惧实验,检测后代海马和皮层相关学习记忆能力。仔鼠成年PND40进行长时程增强实验,检测后代海马CA1-CA3区突触可塑性和突触传递性。仔鼠成年PND40脑组织石蜡切片镀银染色观察神经元轴突发育情况。RT—PCR分别检测仔鼠成年PND40大脑皮层和海马组织甲状腺激素反应基因、神经营养因子和轴突导向因子表达情况。第三部分:1.采用Illumina HiSeqTM4000平台进行脑发育早期母体甲状腺激素缺乏胎鼠和正常胎鼠GD17天大脑皮层mRNA转录组测序,分析脑发育早期母体甲状腺激素缺乏导致的差异表达基因,并进行基因本体论注释和富集通路筛选。2.尼氏染色观察脑发育早期母体甲状腺激素缺乏和正常孕鼠后代胚胎期GD17和后代出生后PND10大脑皮层形态结构发育。结果:第一部分:1.各组孕鼠0.025%MMI给药后于成模时点检测血清中TT4、TSH,各组与正常对照组比较TT4显着下降（p<0.05）,TSH显着升高（p<0.05）。在各组激素补充后检测血清中TT4和TSH水平,TT4和TSH水平与对照组比较无差异（p>0.05）。2.H1组孕鼠分娩后代只数较正常组减少（p<0.05）。H1、H2组仔鼠在PND5体重较正常对照组降低（p<0.001）,H3组与正常组比较,仔鼠体重在PND5和PND10 降低（p<0.001）。3.三组实验组仔鼠PND10血清中TT4与正常组比较无差异,p>0.05;血清中TSH与正常组比较无差异,p>0.05。仔鼠PND10脑组织内TT4的含量各组之间无明显差异,p=0.07。4.H1组后代在出生后5、10天触须反射准确率较正常组降低（p<0.05）,H2和H3组在PND10天触须反射准确率较正常组降低（p<0.05）。H1、H3组PND5翻正反射时间较正常组延长（p<0.05）。5.H1、H2和H3组仔鼠PND10在高频强直刺激后场兴奋性突触后电位幅度增加百分百低于正常对照组,场兴奋性突触后电位斜率增加百分比低于正常对照组,p<0.001。6.旷场试验结果显示:与正常对照组比较,30min内H3组仔鼠站立次数减少（p=0.04）,H2组仔鼠穿越格子数增多（p=0.04）。高架十字迷宫结果显示,H1组后代理毛次数,探索行为减少（p<0.05）。H3组后代站立次数和在开臂停留时间减少,p=0.0368。零迷宫结果显示,H1组仔鼠理毛次数以及进入开臂次数减少（p<0.05）,H3组仔鼠进入开臂次数减少p=0.0478。7.水迷宫定位航行实验显示,在DAY2,H1、H2和H3组逃避潜伏期延长（p<0.05）。第二部分:1.各实验组给药4天后甲功结果显示:Hypo组血清TT4较正常组明显降低,TSH较正常组明显升高（p<0.05）。Hyper组血清TT4较正常组明显升高,TSH水平较正常组明显下降（p<0.05）。Hypo组孕鼠LT4补充后血清中TT4,TSH恢复到正常水平（p>0.05）。2.各组后代仔鼠PND10血清中TT4含量无明显差别（p>0.05）。各组后代脑内TT4含量无明显差别（p>0.05）。3.各组仔鼠定位航行实验中,Hypo和Hyper组在训练第二天和第三天寻找平台时间长于对照组（p<0.05）。4.条件恐惧记忆实验结果显示,在关联测试的第二天,Hypo组仔鼠在测试的5min内总的freezing时长高于其余两组（p<0.05）。5.长时程增强结果显示,给予高频强直刺激后,Hypo组和Hyper组后代场兴奋性突触后电位幅度增加百分比和斜率增加百分比均小于正常对照组,p<0.05。6.各组后代PND40神经元轴突镀银染色结果显示:Hypo组和Hyper组神经轴突内神经原纤维变少,轴突形态发育以及分布异常。7.PND40天仔鼠,甲状腺激素反应基因:海马组织中Hyper组srg1 mRNA表达较正常组减少（p<0.05）。皮层组织中 Hyper 组 Tbr1,srg1,MBP,Dio2,hairless mRNA表达较正常对照组升高,皮层组织中Hypo组srg1 mRNA与正常组比较表达减少（p<0.05）。神经生长因子:海马组织VEGF在Hypo组和Hyper组中的表达均高于正常对照组。GAP-43 mRNA在Hypo组仔鼠海马中表达低于正常对照组。皮层组织GDNF、NGF mRNA在Hypo组中的表达低于正常对照组。VEGF mRNA在Hypo组表达高于正常。GAP-43 mRNA在Hyper组仔鼠皮层中表达高于正常对照组。轴突导向因子:海马组织Sema3A在Hyper组中的表达高于正常对照组。皮层组织netrin1在Hyper组中的表达高于正常对照组。EphrinA1和Robo2 mRNA在Hyper组表达低于正常对照组。Slit1、Slit2、Slit3和Robo1mRNA在Hypo组表达低于正常对照组。GTase家族相关因子:海马组织中,RhoAmRNA、蛋白表达在Hypo组和Hyper组均高于正常对照组。皮层组织中,Cdc42 mRNA、蛋白表达在Hypo组和Hyper组表达较正常对照组升高。第三部分:1.胚胎17天时的甲减孕鼠后代大脑皮层发育滞后,神经元排列紊乱,发育中皮层的各层结构不明显。孕早期甲减组仔鼠大脑皮层和皮质板层厚度较正常仔鼠明显降低。新生儿时期的甲减孕鼠后代大脑皮层细胞构筑异常,海马CA3区尼氏体减少。2.经IlluminaHiSeqTM4000平台测序后数据分析,甲减组胚胎胎脑17天大脑皮层组织与正常对照组比较表达存在显着差异的基因共260个,其中表达上调的基因共165个,表达下调的基因共95个。表达差异基因主要分子功能涉及结合、催化活性、结构分子活性以及转运蛋白活性等功能;相关基因主要分布在细胞,细胞器、细胞外部分;参与的生物学过程包括细胞内过程、发育过程、代谢过程、对刺激反应、定位等。差异表达基因所在的主要细胞通路包括硫胺素代谢、集合管分泌、维生素消化吸收、脂肪消化吸收、血小板激活以及细胞外基质受体相互作用以及固定粘附等3.Hypo组P10天子鼠海马组织,MBP,CamKIVmRNA表达与正常组比较表达降低。结论:脑发育不同阶段母体甲状腺激素缺乏不同程度地影响后代神经精神发育。脑发育早期母体甲状腺激素缺乏和过量影响仔鼠成年时期海马和皮层相关的学习记忆能力、导致仔鼠成年时期轴突发育异常。脑发育早期母体甲状腺激素可能通过影响GTPase家族相关因子以及相关神经营养因子和神经导向因子表达,影响后代脑发育过程中的神经迁移和轴突发育过程。脑发育早期母体甲状腺激素缺乏导致了仔鼠GD17大脑皮层基因差异表达和形态发育延缓。

刘云翔^[6]（2014）在《含反药组合的海藻玉壶汤不同条件下加减海藻甘草对甲状腺肿大大鼠效—毒影响的实验研究》文中认为背景:“十八反”是中医理论体系中配伍禁忌的重要内容,海藻甘草配伍作为其中的一对反药组合,古今医者对其能否应用于临床观点不一,部分医者认为海藻甘草被纳入配伍禁忌范畴,这是古人临床经验的总结,二者同用可能会对机体产生毒副作用;而一些医家则使用含有海藻甘草反药组合的方药治疗沉疴痼疾,且收获了良好的效果。为了解释二者能否同用这一问题,诸多研究者从临床应用、化学成分、药理毒理等方面进行分析探讨,其中实验部分绝大多数是单纯反药组合配伍应用在生理条件下进行的研究,然而探讨二者配伍禁忌的实质还需结合病理模型,本课题前期已经以海藻玉壶汤作为切入点,以甲状腺肿大病理模型为载体,研究海藻与甘草反药组合不同给药剂量、不同配伍比例、不同炮制品种对大鼠甲状腺肿大模型生物效应的影响,并得到了初步结果,本次实验将在前期研究的基础上继续进行探索。目的:本课题在前期实验研究的基础上,优选出治疗效果较好且没有明显毒性、含海藻甘草配伍的特定比例、特定剂量和不同炮制品种的海藻玉壶汤,进行下一步实验研究。实验中除设立海藻玉壶汤全方组外,还会在全方中去掉单味海藻、甘草或同时去掉海藻甘草反药组合,以期考察海藻玉壶汤所产生的“效”是否与反药组合有关,为揭示海藻与甘草配伍使用的科学本质提供依据。方法:①本课题在前期研究中已经对单味海藻、甘草,海藻甘草配伍以及海藻甘草在海藻玉壶汤中配伍应用进行了急性毒性实验研究,结果表明,海藻组、海藻炙甘草组LD50表现出一定毒性,属于小毒范畴。生甘草组、炙甘草组、海藻生甘草组、海藻玉壶汤（生甘草）和海藻玉壶汤（炙甘草）的LD50（n）的结果均未表现出毒性,应用较为安全。本次实验在选取海藻玉壶汤全方组的基础上,去掉其中一味或两味反药,进行急性毒性实验研究,一方面验证海藻玉壶汤（生甘草）和海藻玉壶汤（炙甘草）的前期实验结果,另一方面判断表现出的“毒”或“效”是否为反药配伍应用所致,或与其中的一味反药有关。预实验结果不满足于LD50计算条件时,选择LD50（n）进行实验。②在课题前期实验研究中,我们已经对海藻玉壶汤中海藻甘草反药组合不同比例、不同剂量、不同炮制品种的配伍宜忌条件进行了研究。在不同配比的实验中,配比四组即生甘草与海藻比例为4.84:2.08时,对甲状腺肿大的治疗效果较好,指标有向正常转归的趋势,对大鼠的肝脏、肾脏、心脏等功能没有明显的毒性反应,且4.84:2.08转换为人的剂量最接近药典的剂量范围,因此选择该比例进行后续实验研究;③在不同剂量的实验中,我们根据配比结果结合软件计算得到甘草与海藻在9:5.5时,应具有显着的生物学效应,所以根据该比例从高到低设定了四个剂量组,即剂量一27:16.5,剂量二9:5.5,剂量三3:1.8,剂量四1:0.61,经过实验研究,在甘草与海藻的比例为1:0.61时,治疗效果较好且没有明显的毒性,该剂量换算为人的用量是在《中国药典》规定范围之内,所以在后续的剂量实验中选择1:0.61进行研究;④在炮制品种的实验中,我们前期以甘草与海藻为9:5.5的比例对甘草的不同炮制品种在海藻玉壶汤全方中的应用进行研究,结果显示甘草的不同炮制品种应用于海藻玉壶汤对甲状腺肿大均有较好的治疗效果,指标有向正常转归的趋势,本次实验将在全方的基础上加减海藻甘草反药组合,继续进行研究。根据上述实验结果,我们将在选定的三个条件下,对海藻玉壶汤全方以及全方去掉其中一味或两味反药的配伍进行实验研究,在验证前期实验结果的同时,可以进一步确定实验结果所表现出的“效”或“毒”是否与反药组合有关。结果:1.急性毒性实验结果海藻玉壶汤（生甘草）组、海藻玉壶汤（炙甘草）组、海藻玉壶汤去甘草组、海藻玉壶汤去海藻（生甘草）组和去海藻甘草组分别在给药后第16、3、12、22、21天单组死亡数量达到半数,LD50（n）数值依次为71.08、68.28、55.78、72.27、79.62g生药/kg,海藻玉壶汤去海藻（炙甘草）组小鼠连续给药28d仍达不到半数致死量,以最大给药量作为最大耐受量,为80g生药/kg。实验结束后对小鼠的肝肾功能相关指标进行检测,均未表现出明显毒性。2.优选配比条件下海藻玉壶汤加减海藻甘草反药组合对甲状腺肿大大鼠模型效-毒关系的生物学效应及机制探讨（1）药效评价:海藻玉壶汤全方组、全方去海藻组、全方去甘草组以及全方去海藻甘草组的甲状腺系数较模型组明显降低,具有显着性差异（P<0.05）;全方组、全方去海藻组和全方去海藻甘草组的T3水平较模型组有升高的趋势,但无统计学差异,全方去甘草组的T3水平较全方组明显降低,具有显着性差异（P<0.05）;全方组的T4水平较模型组有升高的趋势,但无统计学差异,全方去海藻甘草组的T4水平较全方组明显降低,具有显着性差异（P<0.05）;给药各组的TSH和TRH水平较模型组明显降低,具有显着性差异（P<0.05）;给药各组的尿Ⅰ水平较模型组有升高的趋势,但无统计学差异。（2）毒性表征:肝脏功能:全方组、全方去海藻组、全方去甘草组以及全方去海藻甘草组对于大鼠肝脏系数较模型组有升高的趋势,但无统计学差异;全方组ALT的水平明显低于模型组,具有显着性差异（P<0.05）,AST水平也较模型组明显降低,与全方去海藻组、全方去甘草组以及全方去海藻甘草组相比全方组的AST、ALT水平也有降低的趋势;全方组的ALB水平较模型组均明显降低,全方去海藻甘草组明显升高,均具有显着性差异（P<0.05）,全方去海藻组和全方去甘草组的ALB水平较模型组有降低的趋势,但无统计学差异;全方组和全方去甘草组的TP水平较模型组明显升高,具有显着性差异（P<0.05）。肾脏功能:全方组的肾脏系数较模型组有升高的趋势,全方去海藻组、全方去甘草组和全方去海藻甘草组有降低的趋势,但均无统计学差异。全方去海藻组和全方去海藻甘草组的BUN水平较模型组和配比全方组明显升高,具有显着性差异（P<0.05）;全方去甘草组的UA水平较模型组明显降低,具有显着性差异（P<0.05）;全方去海藻组、全方去甘草组和全方去海藻甘草组的血Na+水平明显高于模型组,具有显着性差异（P<0.05）,全方组有升高的趋势,但无统计学差异;全方去海藻甘草组的尿Na+水平较模型组明显降低,全方去海藻组的尿K+较模型组水平明显降低,具有显着性差异（P<0.05）。心脏功能:全方去甘草组和全方去海藻甘草组的心脏系数较模型组有升高的趋势,全方组和全方去海藻组有降低的趋势,但无统计学差异,全方去海藻甘草组与全方组比较心脏系数明显升高,具有显着性差异（P<0.05）;全方去海藻甘草组的CK水平明显高于模型组以及全方组,具有显着性差异（P<0.05）。氧化应激:全方去海藻组的SOD水平较模型组明显升高,全方去海藻甘草组明显降低,具有显着性差异（P<0.05）;给药各组的MDA和GSH-PX水平较模型组均有降低的趋势,但无统计学差异。（3）机制探讨:甲状腺方面:海藻玉壶汤全方组、全方去海藻组、全方去甘草组以及全方去海藻甘草组的TPOmRNA表达水平较模型组明显降低,具有统计学差异（P<0.05）;给药各组的TgmRNA表达水平较模型组明显升高,具有显着性差异（P<0.05）;全方组血清中Tg水平较模型组明显降低,具有统计学差异（P<0.05）,全方去海藻组、全方去甘草组以及全方去海藻甘草组的水平有降低的趋势,但无统计学差异。肝脏方面:海藻玉壶汤全方组、全方去海藻组、全方去甘草组以及全方去海藻甘草组的CYP2E1mRNA表达水平较模型组明显降低,具有统计学差异（P<0.05）;全方组、全方去海藻组和全方去甘草组的CYP3A1 mRNA水平较模型组明显升高,具有显着性差异（P<0.05）;给药各组的CYP3A2mRNA的水平较模型组有升高的趋势,但无统计学差异。全方去海藻组、全方去甘草组的CYP2E1蛋白水平较模型组明显降低,具有统计学差异（P<0.05）,全方组和全方去海藻甘草组也有降低的趋势,但无统计学差异。3.优选剂量条件下海藻玉壶汤加减海藻甘草反药组合对甲状腺肿大大鼠模型效-毒关系的生物学效应及机制探讨（1）药效评价:海藻玉壶汤全方组、全方去海藻组、全方去甘草组以及全方去海藻甘草组的甲状腺系数较模型组明显降低,具有统计学差异（P<0.05）;给药各组T3、T4水平较模型组有升高的趋势,但无统计学差异;给药各组对TSH的水平有明显降低,具有统计学差异（P<0.05）;全方去甘草组和全方去海藻甘草组的TBG水平较模型组明显升高,具有统计学差异（P<0.05）;全方组的TRH水平较模型组明显降低,具有统计学差异（P<0.05）,全方去海藻组、全方去甘草组和全方去海藻甘草组有降低的趋势,但无统计学差异。海藻玉壶汤全方组、全方去海藻组和全方去甘草组的尿Ⅰ水平较模型组明显升高,具有统计学差异（P<0.05）。（2）毒性表征:肝脏功能:全方去海藻组、全方去甘草组以及全方去海藻甘草组的ALT和AST水平较模型组明显降低,具有统计学差异（P<0.05）,全方组的ALT和AST水平有降低的趋势,但无统计学差异;全方去甘草组的ALP水平较模型组明显降低,具有统计学差异（P<0.05）;全方去海藻组的TP水平较模型组明显升高,具有统计学差异（P<0.05）;全方去海藻组的ALB水平较模型组明显升高,全方去海藻甘草组明显降低,具有统计学差异（P<0.05）;全方去甘草组和全方去海藻甘草组的GLB水平较模型组的水平明显降低,具有统计学差异（P<0.05）。肾脏功能:给药各组的肾脏系数较模型组有降低的趋势,但无统计学差异。海藻玉壶汤全方组的BUN水平较模型组明显升高,具有统计学差异（P<0.05）,全方去甘草组和全方去海藻甘草组的UA水平较模型组明显降低,具有统计学差异（P<0.05）,全方组和全方去海藻组有降低的趋势,但无统计学差异。给药各组的血Na+水平较模型组明显升高,具有统计学差异（P<0.05）;全方去海藻组、全方去甘草组和全方去海藻甘草组的尿Na+水平较模型组有升高的趋势,但无统计学差异;全方组、全方去甘草组的尿K+水平较模型组明显降低,具有统计学差异（P<0.05）,全方去海藻组和全方去海藻甘草组有降低的趋势,但无统计学差异。心脏功能:海藻玉壶汤全方组和全方去甘草组的心脏系数较模型组明显降低,具有统计学差异（P<0.05）,全方去海藻组和全方去海藻甘草组有降低的趋势,但无统计学差异;全方组、全方去甘草组和全方去海藻甘草组的CK水平较模型组有降低的趋势,但无统计学差异;给药各组的LDH水平均有降低的趋势,但无统计学差异。氧化应激:海藻玉壶汤全方组、全方去海藻组和全方去海藻甘草组的SOD水平较模型组明显降低,具有统计学差异（P<0.05）;全方组、全方去海藻组和全方去甘草组的MDA水平较模型组有升高的趋势,但无统计学差异。（3）机制探讨:甲状腺方面:海藻玉壶汤全方组、全方去海藻组、全方去甘草组以及全方去海藻甘草组的TPO mRNA水平较模型组明显降低,具有统计学差异（P<0.05）;给药各组Tg mRNA水平较模型组明显升高,具有统计学差异（P<0.05）;全方组、全方去海藻组血液中Tg水平较模型组明显降低,具有统计学差异（P<0.05）,全方去甘草组和全方去海藻甘草组有降低的趋势,但无统计学差异;给药各组的TPOAb水平较模型组有降低的趋势,但无统计学差异。肝脏方面:海藻玉壶汤全方组的CYP2E1 mRNA水平较模型组明显降低,具有统计学差异（P<0.05）,且较全方去海藻组、全方去甘草组和全方去海藻甘草组也明显降低,具有统计学差异（P<0.05）。给药各组的CYP3A1和CYP3A2mRNA水平较模型组有降低的趋势,但无统计学差异。全方组、全方去海藻组以及全方去甘草组的CYP2E1蛋白水平较模型组明显降低,具有统计学差异（P<0.05）,全方去海藻甘草组有降低的趋势,但无统计学差异。4.含甘草不同炮制品种的海藻玉壶汤加减海藻甘草反药组合对甲状腺肿大大鼠模型效-毒关系的生物学效应及机制探讨（1）药效评价:全方组（生）、全方去海藻组（生）、全方组（炙）、全方去海藻组（炙）以及全方去甘草组的甲状腺系数较模型组明显降低,具有统计学差异（P<0.05）;给药各组的T3水平均较模型组有升高的趋势,但无统计学差异;全方去海藻组（生）、全方组（炙）、全方去海藻组（炙）的T4水平较模型组有升高的趋势,但无统计学差异;全方去海藻组（生）、全方组（炙）、全方去海藻组（炙）以及全方去甘草组的FT3水平明显高于模型组,具有统计学差异（P<0.05）,全方组（生）有升高的趋势,但无统计学差异;全方组（生）、全方去海藻组（生）、全方组（炙）以及全方去甘草组的TSH水平较模型组明显降低,具有统计学差异（P<0.05）,全方去海藻组（炙）也有降低的趋势,但无统计学差异;全方去海藻组（生）、全方组（炙）、全方去海藻组（炙）以及全方去甘草组的TBG水平明显升高,具有统计学差异（P<0.05）;全方组（生）和全方去甘草组的TRH水平较模型组明显降低,具有统计学差异（P<0.05）,其他给药组有降低的趋势,但无统计学差异。（2）毒性表征:肝脏功能:全方组（生）、全方去海藻组（生）、全方组（炙）、全方去海藻组（炙）以及全方去甘草组的肝脏系数较模型组有升高的趋势,但无统计学差异;全方去海藻组（生）和全方去海藻组（炙）的ALT水平明显低于模型组,具有统计学差异（P<0.05）全方组（生）和全方组（炙）的水平有降低的趋势,全方去甘草组有升高的趋势,但无统计学差异;全方组（生）、全方去海藻组（生）、全方组（炙）、全方去海藻组（炙）的AST水平明显低于模型组,具有统计学差异（P<0.05）;给药各组的ALP水平较模型组有降低的趋势,但无统计学差异;全方组（生）、全方去海藻组（生）、全方组（炙）的ALB水平明显低于模型组,具有统计学差异（P<0.05）,全方去海藻组（炙）以及全方去甘草组有降低的趋势,但无统计学差异。全方去海藻组（生）的GLB水平较模型组明显降低,具有统计学差异（P<0.05）。肾脏功能:全方去海藻组（生）的肾脏系数较模型组有降低的趋势,全方组（生）、全方去海藻组（炙）以及全方去甘草组有升高的趋势,但均无统计学差异;给药各组的UA水平均明显低于模型组,具有统计学差异（P<0.05）;给药各组的Cre水平较模型组有降低的趋势,但无统计学差异。给药各组的血Na+水平明显高于模型组,具有统计学差异（P<0.05）,全方组（生）、全方去海藻组（生）、全方组（炙）和全方去海藻组（炙）的尿Na+水平较模型组有降低的趋势,全方去甘草组有升高的趋势,但无统计学差异;全方去甘草组的尿K+水平明显低于模型组,具有统计学差异（P<0.05）。心脏功能:全方组（生）、全方去海藻组（生）、全方去海藻组（炙）以及全方去甘草组的心脏系数较模型组有降低的趋势,全方组（炙）有升高的趋势,但无统计学差异;全方去海藻组（生）的CK水平较模型组明显降低,具有统计学差异（P<0.05）,全方组（生）、全方组（炙）、全方去海藻组（炙）和全方去甘草组的CK水平有降低的趋势,但无统计学差异;全方去海藻组（炙）的LDH水平明显低于模型组,具有统计学差异（P<0.05）,全方组（生）、全方组（炙）、全方去海藻组（炙）和全方去甘草组的LDH水平有降低的趋势,但无统计学差异。氧化应激:全方去海藻组（炙）和全方去甘草组的SOD水平明显低于模型组,具有统计学差异（P<0.05）;给药各组的MDA水平较模型组有降低的趋势,但无统计学差异。给药各组的GSH-PX水平较模型组均有升高的趋势,但无统计学差异。（3）机制探讨:甲状腺方面:给药各组的TPO mRNA水平较模型组明显降低,具有统计学差异（P<0.05）;给药各组的TgmRNA水平较模型组明显升高,具有统计学差异（P<0.05）;全方去海藻组（生）和全方去海藻组（炙）的TPOAb水平较模型组明显降低,具有统计学差异（P<0.05）,全方组（生）、全方去海藻组（炙）以及全方去甘草组有降低的趋势,但无显着性差异;全方组（生）和全方去甘草组血清中Tg的水平明显低于模型组,具有统计学差异（P<0.05）;给药各组的TSHR水平较模型组均有升高的趋势,但无统计学差异。肝脏方面:全方组（生）、全方去海藻组（炙）和全方去甘草组的CYP2E1 mRNA水平明显低于模型组,具有统计学差异（P<0.05）,全方去海藻组（生）和全方组（炙）有降低的趋势,但无统计学差异;全方组（生）、全方去海藻组（生）和全方组（炙）的CYP3A1mRNA水平较模型组明显升高,具有统计学差异（P<0.05）,全方去甘草组有降低的趋势,但无统计学差异。全方组（生）、全方去海藻组（生）和全方去甘草组CYP2E1蛋白水平较模型组明显降低,具有统计学差异（P<0.05）,全方组（炙）和全方去海藻组（炙）有降低的趋势,但无统计学差异。结论:①优选配比条件下,含反药配伍的海藻玉壶汤全方组对甲状腺肿大的恢复作用以及甲状腺各项指标回调效果优于全方去单味海藻、甘草或同时去掉海藻甘草的配伍组合,给药各组对大鼠肝脏、肾脏、心脏等方面均未表现出明显毒性。全方组所得的检测结果与前期实验基本相同。②优选剂量条件下,含反药配伍的海藻玉壶汤全方组对甲状腺肿大的恢复作用以及甲状腺各项指标回调效果优于全方去单味海藻、甘草或同时去掉海藻甘草的配伍组合,给药各组对大鼠肝脏、肾脏、心脏等方面均未表现出明显毒性。全方组所得的检测结果与前期实验基本相同。③含有甘草不同炮制品种的条件下,全方去海藻组（生）对于甲状腺肿的治疗作用以及相关指标的回调效果要好于全方组（生）,全方组（炙）对于甲状腺肿的治疗作用以及相关指标的回调效果要优于全方去海藻组（炙）。全方组（生）和全方组（炙）所得的检测结果与前期实验基本相同。

杨丽娜^[7]（2012）在《不同孕期低碘孕鼠补充甲状腺激素对仔鼠脑组织生长相关蛋白和突触素表达的影响》文中进行了进一步梳理目的研究在不同孕期低碘孕鼠给予甲状腺激素补充对子代大鼠脑组织生长相关蛋白GAP-43和突触素（SYP）表达的影响,进而发现低碘孕鼠补充甲状腺激素对于纠正子代鼠因甲状腺激素不足造成的脑发育落后现象的可能机制,以及寻找最佳的调节时期及调节剂量。方法1月龄Wistar大鼠160只,雌雄各半。雌性大鼠随机分为8组：正常组和7个低碘组,每组10只。各组均饲以低碘饲料,正常组引用碘浓度为200μg/L的碘酸钾溶液,总碘摄入量相当于大鼠生理碘需要量,低碘组饮用去离子水。3个月后,与正常Wistar雄鼠进行交配。1个低碘组不补充甲状腺激素作为阴性对照,其余6组在妊娠早期（孕1d～17d）补充甲状腺激素高、中、低剂量,妊娠中晚期（孕18d～出生20d）补充甲状腺激素高、中、低剂量,高、中、低甲状腺激素的剂量为：3.5、2、0.5μg/100g体重。8组分别取新生当天,生后7d、14d、21d、28d的子鼠脑组织,应用实时荧光定量（RT-PCR）法定量检测GAP-43SYP基因表达水平；SABC法和Western blot法检测GAP-43SYP在神经细胞中的表达,图像分析方法定量检测蛋白的含量；结果生长相关蛋白GAP-43在正常组的表达水平随日龄增长而逐渐下降（p<0.05）,正常组SYP随日龄递增而逐渐增加（p<0.05）,低碘组各时期普遍低于同时期正常组的表达水平（p<0.05）,只有在28天时GAP-43的表达水平大于正常组（p<0.05）。各治疗组各时期的表达水平均高于低碘组（p<0.05）,对低碘孕鼠给予中、高等剂量的甲状腺激素,可以使子代达到接近正常的生长相关蛋白GAP-43和SYP的蛋白水平,尤其是在孕早期给予补充（p<0.05）。结论甲状腺激素可以促进因低碘造成的脑发育落后的大鼠脑组织中生长相关蛋白GAP-43和突触素（SYP）表达,并可能具有促进突触再建和增强、完善再建突触效能的作用。

宁丹^[8]（2012）在《成年期甲状腺功能减退症大鼠背侧海马内突触复合体蛋白的表达》文中认为目的观察成年期甲状腺功能减退症（简称甲减）大鼠背侧海马内突触复合体可溶性N-乙基马来酰胺敏感因子附着蛋白受体（solubleN-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptor，SNARE）蛋白SNAP-25（synaptosomal-associated protein of25kDa）、syntaxin-1、VAMP-2（vesicular-associated membrance protein-2）的表达变化及左旋甲状腺素（Levothyroxine，L-T4）替代治疗后改变的蛋白水平的恢复状况。方法健康3月龄成年雄性Sprague-Dawley大鼠45只，体重250～300g，适应性喂养1周后随机分为4组：（1）甲减组（Hypo组，n=12）大鼠每日腹腔注射PTU1mg/100g体重（WB）共6周；（2）常规剂量组（T4-5组，n=11）大鼠每日腹腔注射PTU1mg/100gWB共6周，第5周起每日同时给予L-T45g/100g WB；（3）大剂量组（T4-20组，n=11）大鼠每日腹腔注射PTU1mg/100gWB共6周，第5周起每日同时给予L-T420g/100g WB；（4）正常对照组（C组，n=11）大鼠每日腹腔注射同体积生理盐水共6周。所有大鼠每周称重一次，根据体重调整给药剂量。造模结束后24小时，经腹主动脉采血后迅速取脑，应用放射免疫法检测大鼠血清T3、T4水平，Western blot方法测定背侧海马内SNARE突触复合体蛋白SNAP-25、syntaxin-1及VAMP-2表达水平，对条带进行相对光密度分析，通过突触复合体蛋白与内参GAPDH的条带的光密度值的比值来间接反映突触复合体蛋白的表达量。所有数据以x±s表示，应用SPSS13.0for Windows统计软件进行单因素方差分析（oneway-ANOVA）。进一步Post hoc分析用LSD法进行多重比较。Ps <0.05为差异有显着性。结果1.各组大鼠体重变化造模前各组大鼠体重无统计学差异（F（3,42）=0.21, P=0.93）。造模结束后，正常对照组大鼠体重较造模前增加49.0%；甲减组、T4-5组、T4-20组体重较前分别增加21.5%、32.5%和26.1%，各组体重与正常对照组相比均明显下降（与正常对照组比较，Ps <0.05）。2.血清T3、T4水平与正常对照组相比，甲减组大鼠血清T3、T4水平均显着降低（Ps <0.02），分别为正常对照组的53.6%、77.5%；T4-5组大鼠血清T3、T4恢复至正常对照组水平（Ps>0.05），分别为正常对照组的96.9%、99.7%；T4-20组大鼠血清T3、T4显着高于正常对照组（Ps <0.001），分别为正常对照组的171.8%、175.1%。3.各组大鼠海马内SNAP-25、syntaxin-1、VAMP-2蛋白表达情况（1）与正常对照组比较，甲减组大鼠背侧海马突触小体内SNAP-25蛋白表达显着增多（Ps <0.05），为正常对照组的135.8%；T4-5组、T4-20组大鼠背侧海马突触小体内SNAP-25表达分别为正常对照组的120.1%、110.3%，差别均无统计学意义（Ps>0.05）；与甲减组比较，T4-5组SNAP-25表达减低15.7%，差别无统计学意义（Ps>0.05），T4-20组减低25.5%，差别有明显统计学意义（Ps <0.05）。（2）甲减组大鼠背侧海马突触小体内syntaxin-1蛋白表达与正常对照组比较显着增加多（Ps <0.05），为正常对照组的139.4%；T4-5组、T4-20组大鼠背侧海马突触小体内syntaxin-1表达与正常对照比较均无统计学意义差异（Ps>0.05），分别为正常对照的127.9%，121.4%；与甲减组比较，T4-5组syntaxin-1表达减低11.5%，T4-20组表达减低18%，差别均无统计学意义（Ps>0.05）。（3）VAMP-2蛋白表达在各组间无统计学意义差异（Ps>0.05）。结论1.甲减可致成年期大鼠背侧海马内SNAP-25和syntaxin-1表达增加，VAMP-2表达无统计学意义改变。2.给予常规剂量甲状腺素替代治疗至血清甲状腺激素水平正常时，能够使增加的SNAP-25和syntaxin-1蛋白表达水平恢复，与正常对照相比无统计学意义差别；3.给予大剂量甲状腺素后，血清甲状腺激素水平明显高于正常水平，SNAP-25和syntaxin-1蛋白表达水平有进一步恢复趋势，更接近对照组水平。

刘芳^[9]（2012）在《六溴环十二烷脑发育期暴露对TR信号传导的影响及神经毒性效应研究》文中提出六溴环十二烷（Hexabromocyclododecane, HBCD）作为一种添加型阻燃剂,目前已经成为环境中无处不在的污染物,并且在人体血液甚至儿童体内都可以被检测到。现有的一些研究已证实HBCD具有内分泌干扰作用及神经毒性作用,它可以损害大脑中少突神经胶质细胞的发育,损伤大脑的学习和记忆功能,还会引发异常的自发性行为。尤其是处于脑发育期的儿童更是成为了HBCD暴露和毒性作用的主要人群。为了研究HBCD脑发育期暴露对甲状腺激素受体信号传导的影响及神经毒性效应,本论文根据发育期儿童为HBCD暴露的高风险人群的特点,实验选取新生3天的SD大鼠（PND3）；依据环境真实暴露水平设计HBCD的暴露剂量,设置对照组和10、50、100、300μg/kg的HBCD染毒组等5个组别；根据大鼠脑发育的特点,将暴露时间划分为21天、42天、90天等3个不同的脑发育期时间节点；通过对动物神经行为、甲状腺激素水平、甲状腺激素核受体（TR）信号传导过程的相关基因表达、神经递质及相关酶活性等几个方面指标的测试,尝试从动物个体、生化指标及基因水平揭示HBCD甲状腺激素干扰的机制与神经毒性效应的内在关联,实验结果显示：1、利用Morris水迷宫和旷场实验分别对21d和90d两个暴露时间节点下大鼠的神经行为进行了检测。Morris实验结果显示,21d的短期暴露后,对于逃避潜伏期、穿越平台次数两个指标,10μg/kg的低剂量染毒组和300μg/kg的高剂量染毒组能够促进大鼠学习记忆能力,并且影响显着（P<0.05）。而平台所在象限活动以及调换平台后的逃避潜伏期两个指标显示300μg/kg的高剂量染毒组能够促进大鼠记忆和再学习能力,并且呈现显着性（P<0.05）。经过90d的暴露后,实验结果与21d较为一致,不同的是50μg/kg染毒组却表现出损害大鼠记忆和再学习的能力并且呈现显着性（P<0.05）。旷场实验结果显示,21d的短期暴露后,活动总路程的指标显示出50～300μg/kg染毒组大鼠运动活性显着增强（P<0.05）；中央活动路程指标显示出10μg/kg染毒组大鼠有显着性的心理焦虑（P<0.05）,但是,这种影响随着大鼠的生长发育逐渐减弱,暴露90d后,已经无统计学意义（P>0.05）。2、利用125I-甲状腺激素与抗血清放射免疫分析法测定血清中甲状腺激素相关指标的变化,包括：TT3、TT4、FT3、FT3、TSH等。实验结果显示,经过21d短期暴露,各染毒组大鼠血清中TT3、TT4、FT3、FT4的浓度均显着升高（P<0.05）, TSH浓度降低但无统计学意义（P>0.05）。经过42d暴露,10μg/kg的染毒组大鼠血清中TT3、TT4、FT3、FT4的浓度均升高,并且FT3、FT4的浓度显着升高（P<0.05）；染毒组血清中TSH的浓度下降,10、50、300μg/kg染毒组呈现显着降低（P<0.05）。经过90d暴露,染毒组大鼠出现了血清中TT3、TT4、FT3、FT4的浓度均上升的趋势,其中各染毒组的TT4浓度显着升高（P<0.05）,50μg/kg染毒组的FT4浓度显着升高（P<0.05）,50和100μg/kg染毒组的TT3、FT3浓度显着升高（P<0.05）; 10μg/kg染毒组的TSH浓度显着降低（P<0.05）,其他各染毒组中的TSH浓度均显着升高（P<0.05）。3、利用real-time PCR法定量测定大鼠海马TR传导过程相关基因表达水平的变化,包括3种不同构型的TR基因TRα1、TRα2、TRβ1;参与甲状腺激素与TR结合的复合物与甲状腺激素应答元件（TRE）的转录基因BTEB; TR信号调控的下游神经功能基因RC3、NGF;以及神经递质代谢酶相关的功能基因MAO-A、MAO-B、ChAT等。TR基因检测结果显示,各暴露时间染毒组大鼠海马TRα1 mRNA的表达水平都有上升趋势,其中暴露42d,50μg/kg染毒组和暴露90d,300μg/kg染毒组TRα1表达水平显着升高（P<0.05）；暴露21d和90d,各染毒组大鼠海马TRα2 mRNA的表达水平上升,暴露42d,各染毒组表达水平下降,10、50和300ug/kg染毒组呈现显着降低（P<0.05）；暴露21d, 10ug/kg染毒组大鼠海马TRβ1 mRNA表达水平显着升高（P<0.05）,暴露42d和90d,各染毒组大鼠海马TRβ1 mRNA表达水平呈现上升趋势,其中暴露42d,100～300ug/kg染毒组和暴露90d,50～300ug/kg染毒组呈现显着升高（P<0.05）。BTEB基因的检测结果显示,暴露21d,各染毒组大鼠海马BTEB mRNA的表达水平均显着降低（P<0.05）；暴露42d染毒组BTEB mRNA的表达有降低趋势,暴露90d染毒组BTEB mRNA的表达有升高的趋势,两个时间暴露均未有统计学意义（P>0.05）。NGF、RC3基因检测结果显示,暴露42d染毒组大鼠海马NGF mRNA表达显着升高（P<0.05）,暴露21d和90d的影响没有统计学意义；暴露21d和90d染毒组大鼠海马RC3 mRNA表达有下降趋势,暴露42d有升高趋势,其中21d、10ug/kg染毒组表达显着降低（P<0.05）。MAO-A、MAO-B、ChAT等基因的检测结果显示,暴露21d染毒组MAO-A mRNA表达有下降趋势,暴露90d,染毒组MAO-A mRNA表达有升高趋势,但均无统计学意义（P>0.05）；染毒组MAO-B mRNA表达在暴露21d和90d有升高趋势,暴露42d有降低趋势,并有100ug/kg染毒组表达显着降低（P<0.05）。暴露21d, 100ug/kg染毒组ChAT mRNA表达显着降低（P<0.05）；暴露42d,染毒组ChAT mRNA表达升高,并且50～100μg/kg染毒组的表达显着升高（P<0.05）；暴露90d,10染毒组表达显着升高（P<0.05）。4、利用分光光度法、荧光定量法和ELISA试剂盒法测定大鼠脑中单胺、胆碱类神经递质含量及其相关代谢酶活性,单胺类包括DA、NE、5-HT （?）神经递质及MAO酶；胆碱类包括Ach神经递质及AchE、ChAT等代谢酶。实验结果显示,在单胺能系统中,暴露21d,100～300ug/kg染毒组DA含量显着降低（P<0.05）,50～100ug/kg染毒组NE含量显着降低（P<0.05）,300ug/kg染毒组5-HT含量显着降低（P<0.05）,50～300ug/kg染毒组MAO活性升高；暴露42d,染毒组DA含量升高,其中10和100ug/kg染毒组DA含量显着升高（P<0.05）,染毒组NE含量显变化不明显,50～100 ug/k染毒组5-HT含量显着升高（P<0.05）, MAO活性变化无统计学意义（P>0.05）；暴露90d,300ug/kg染毒组DA含量显着降低（P<0.05）, 100ug/kg染毒组NE含量显着降低（P<0.05）,300ug/kg染毒组5-HT含量显着升高（P<0.05）, MAO含量变化无统计学意义（P>0.05）。在胆碱能系统中,经HBCD不同暴露时间,染毒组Ach含量水平均有下降趋势,其中21d、100～300μg/kg染毒组Ach的含量显着降低（P<0.05）；暴露21d和42d,染毒组AchE活性有升高趋势,并且300μg/kg染毒组AchE活性显着升高（P<0.05）,暴露90d, AchE活性变化无统计学意义（P>0.05）；暴露21d,染毒组ChAT活性变化无统计学意义（P>0.05）,暴露42d, 10ug/kg染毒组ChAT活性显着升高（P<0.05）,暴露90d,100～300μg/kg染毒组ChAT活性显着降低（P<0.05）。根据以上实验结果可以得出结论：1、动物神经行为实验表明21d和90d的HBCD暴露可以引起大鼠的神经兴奋,对大鼠的学习记忆以及再学习能力有一定促进作用,极低剂量（10μg/kg）和高剂量（300μg/kg）更能促进这种作用的发挥。21 d HBCD的短期暴露还可以引起大鼠的活动性能增加,极低剂量（10μg/kg）的暴露还可能引起大鼠的焦虑和紧张心理,但是这些作用随着大鼠的生长发育逐渐减弱。21d的HBCD暴露对大鼠神经行为影响显着。2、甲状腺激素水平的变化表明HBCD暴露可以促进大鼠血清中甲状腺激素水平。虽然甲状腺激素在不同暴露时间、不同暴露剂量有差异,但是总的趋势较为一致,TT3、TT4、FT3、FT4的含量升高,TSH的含量降低。其中,FT3、FT4的变化更为敏感,表明HBCD更容易通过影响FT3、FT4的水平对机体生理过程的产生影响。实验结果同样显示出暴露21d的甲状腺激素变化较42d、90d更为显着。甲状腺激素水平的上升表明HBCD暴露引起了甲状腺功能亢进,可以解释神经行为结果中HBCD暴露后大鼠神经兴奋、活动性能增加等现象。3、TR信号传导过程相关基因表达水平的变化表明甲状腺激素干扰效应及TR信号传导过程可能是HBCD的神经毒性效应的内在作用机制之一。3种不同构型的TR基因表达主要是受甲状腺激素T3控制的,HBCD暴露能够引起TRα1和mRNA的表达上升,42d的TRα2表达水平下降,说明HBCD可以通过改变TR基因表达干扰甲状腺激素。21d的HBCD暴露可引起BTEB基因表达显着下降,BTEB是参与甲状腺激素与TR结合的复合物与TRE的转录基因,受甲状腺激素的调控,BTEB mRNA表达的变化也是甲状腺激素受到HBCD干扰的结果。TR信号调控的下游神经功能基因NGF在42d表达上升,作为神经修复的重要因子,NGF表达上升可以提示神经已经受到损害。RC3在变更Ca2+/钙调蛋白信号途径、突触可塑性的区域特异性损害和认知功能衰减中起作用,42d RC3 mRNA表达降低,表明HBCD对脑具有神经毒性效应。神经递质代谢酶相关的功能基因MAO-A受HBCD影响变化较小,而MAO-B的变化较为显着,表明HBCD更能够影响MAO-B的表达。而ChAT mRNA的表达在21d暴露中表达下降而42d表达有升高趋势。MAO和ChAT基因都与大脑认知、学习记忆和神经功能有关。HBCD对于甲状腺激素及TR信号传导过程的干扰效应,可以产生神经毒性效应,可能具有脑损害甚至可能导致中枢神经系统发育严重受损,产生学习记忆能力损伤、认知障碍,引发一些与神经相关的疾病等。21和42d的HBCD暴露对于基因表达的影响更加突出。4、神经递质含量与酶活性等生化指标的变化表明HBCD暴露不仅在分子水平改变了神经递质相关酶的表达,并在生化水平上也表现出神经毒性效应。单胺能系统中,暴露21d, HBCD主要通过促进MAO活性抑制DA、NE、5-HT的含量对单胺能体系产生影响；而42d和90d, HBCD对MAO活性的影响较小,直接作用于神经递质。单胺类神经递质是中枢神经内重要的信息传递物质,参与镇痛、躯体运动、精神情绪活动、睡眠、觉醒、应激等多种生理过程,特别是对中枢神经系统的兴奋或抑制起着协调作用。DA、NE、5-HT的含量变化可以解释大鼠神经行为中学习记忆能力提高、活动性能增加、焦虑心理产生等现象。胆碱能系统中,HBCD主要通过降低ChAT活性并且促进AchE活性控制Ach的含量,造成乙酰胆碱系统功能不足。Ach含量降低会引起学习记忆的障碍,同时也是阿尔茨海默病（AD）的重要成因。ChAT催化合成Ach控制胆碱能神经元突触间的信息传递,调节大脑功能,影响机体学习和记忆能力,ChAT活性降低能够直接影响Ach的合成和胆碱能系统的功能。AchE在脑发育的关键时期作为神经营养因子,也是脑内与学习记忆相关的重要酶之一,AchE活性增加会导致脑内学习记忆活动障碍。

孙春萍^[10]（2011）在《甲状腺素对成年期甲状腺功能减退症大鼠前额叶Syntaxin-1表达的影响》文中提出目的用丙基硫氧嘧啶（6-n-propyl-2-thiouracil, PTU）1 mg/100g体重连续向成年雄性Sprague-Dawley大鼠腹腔注射,建立成年期甲状腺功能减退症（简称甲减）动物模型,观察成年期甲减大鼠前额叶皮质内突触前膜蛋白Syntaxin-1的表达水平及甲状腺素替代治疗后的恢复状况,探讨甲减脑损伤及恢复的分子机制。方法普通级健康3月龄成年SD雄性大鼠随机分为:（1）甲减组（PTU组）大鼠每日腹腔注射PTU 1mg/100g体重（BW）;（2）常规剂量T4替代治疗组（PTU+5-T4组）大鼠每日腹腔注射PTU 1mg/100g体重（BW）,四周后每日给予左旋T4 5μg/100g体重（BW）,连续两周;（3）大剂量T4替代治疗组（PTU+20-T4组）大鼠每日腹腔注射PTU 1mg/100g体重（BW）,四周后每日给予左旋T4 20μg/100g体重（BW）,连续两周;（4）正常对照组（Control组）大鼠每日腹腔注射等体积生理盐水。每周测体重一次,并根据体重调整给药剂量。造模六周结束后,腹主动脉采血,取脑,应用放射免疫法检测大鼠血清T3、T4水平,超敏S-P法行免疫组织化学检测,80i正置研究型生物光学显微镜拍摄前额叶Ⅰ层（分子层）、Ⅱ层（外颗粒层）、Ⅲ层（外椎体细胞层）、Ⅳ层（内颗粒层）、Ⅴ层（内椎体细胞层）,JD- 801形态学生物图像分析系统对前额叶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ层的Syntaxin-1的免疫反应产物进行光密度值分析,以平均光密度（average optical density, AOD）作为观察指标。实验资料采用均数±标准误（ x±s）表示。采用单因素方差分析（ANOVA）,进一步用LSD法进行多重比较（least-significant difference for post hoc analysis）。所有数据运用SPSS 13.0统计软件分析。P < 0.05为差异有显着性。结果1.体重变化造模前各组大鼠体重无统计学差异（282.08±36.47,288.55±39.67,288.55±39.67,288.78±31.74）。造模结束后,正常对照组大鼠的体重较造模前增长49%（284.09±40.11,423.73±57.82）,甲减组大鼠增长21.5%（282.08±36.47,342.75±35.34）,小剂量T4替代治疗组和大剂量T4替代治疗组大鼠体重分别增长32.5%（288.55±39.67,382.75±32.72）、26.1%（288.78±31.74,364.11±37.14）（与正常对照组比较,P< 0.05）。2.血清T3、T4水平与正常对照组相比,甲减组大鼠血清T3、T4水平明显降低（P< 0.05）;常规剂量T4替代治疗组大鼠血清T3、T4恢复至正常水平;大剂量T4替代治疗组大鼠血清T3、T4水平显着高于小剂量T4替代治疗组和正常对照组（P< 0.01）。3. Syntaxin-1蛋白在各组大鼠额叶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ层各层内表达量的变化免疫组化检测:Syntaxin-1免疫反应产物在四组大鼠前额叶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ层中分布是相似的,阳性颗粒（棕黄色颗粒）在各层中均广泛表达,但密度不同。量化分析结果显示:Syntaxin-1在甲减组大鼠前额叶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ层内较正常对照组均显着减少（P< 0.05）;小剂量T4替代治疗组,Syntaxin-1与正常对照组无统计学差异（Ps> 0.01）;大剂量T4替代治疗组,Syntaxin-1在大鼠前额叶五层内均与正常对照组无统计学差异（Ps> 0.01）。结论（1）甲减可致成年期大鼠前额叶内Syntaxin-1蛋白表达减少。（2）甲状腺素替代治疗能使减少的Syntaxin-1蛋白水平恢复,且小剂量甲状腺激素既能完全恢复。

二、围生期甲减对大鼠脑甲状腺激素受体基因表达的影响（论文开题报告）

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、围生期甲减对大鼠脑甲状腺激素受体基因表达的影响（论文提纲范文）

（1）隔药灸脐法治疗桥本甲状腺炎的临床研究（论文提纲范文）

（2）基底前脑胆碱能神经系统调节甲状腺功能减退症小鼠的认知行为的作用机制（论文提纲范文）

（3）母鼠甲状腺机能减退对子代糖代谢的影响及其机制（论文提纲范文）

（4）甲状腺激素核受体α1-E403X基因突变对小鼠海马形态发育和功能影响的研究（论文提纲范文）

（5）Wistar大鼠脑发育早期母体甲状腺激素缺乏对后代脑发育影响及机制研究（论文提纲范文）

（6）含反药组合的海藻玉壶汤不同条件下加减海藻甘草对甲状腺肿大大鼠效—毒影响的实验研究（论文提纲范文）

（7）不同孕期低碘孕鼠补充甲状腺激素对仔鼠脑组织生长相关蛋白和突触素表达的影响（论文提纲范文）

（8）成年期甲状腺功能减退症大鼠背侧海马内突触复合体蛋白的表达（论文提纲范文）

（9）六溴环十二烷脑发育期暴露对TR信号传导的影响及神经毒性效应研究（论文提纲范文）

（10）甲状腺素对成年期甲状腺功能减退症大鼠前额叶Syntaxin-1表达的影响（论文提纲范文）

四、围生期甲减对大鼠脑甲状腺激素受体基因表达的影响（论文参考文献）

• [1]隔药灸脐法治疗桥本甲状腺炎的临床研究[D]. 白尹豪. 山东中医药大学, 2020(01)
• [2]基底前脑胆碱能神经系统调节甲状腺功能减退症小鼠的认知行为的作用机制[D]. 徐永霞. 安徽医科大学, 2019(07)
• [3]母鼠甲状腺机能减退对子代糖代谢的影响及其机制[D]. 刘洲君. 南京中医药大学, 2019(08)
• [4]甲状腺激素核受体α1-E403X基因突变对小鼠海马形态发育和功能影响的研究[D]. 党萍萍. 中国医科大学, 2020(01)
• [5]Wistar大鼠脑发育早期母体甲状腺激素缺乏对后代脑发育影响及机制研究[D]. 何雪. 中国医科大学, 2018(01)
• [6]含反药组合的海藻玉壶汤不同条件下加减海藻甘草对甲状腺肿大大鼠效—毒影响的实验研究[D]. 刘云翔. 北京中医药大学, 2014(04)
• [7]不同孕期低碘孕鼠补充甲状腺激素对仔鼠脑组织生长相关蛋白和突触素表达的影响[D]. 杨丽娜. 天津医科大学, 2012(03)
• [8]成年期甲状腺功能减退症大鼠背侧海马内突触复合体蛋白的表达[D]. 宁丹. 安徽医科大学, 2012(01)
• [9]六溴环十二烷脑发育期暴露对TR信号传导的影响及神经毒性效应研究[D]. 刘芳. 东华大学, 2012(07)
• [10]甲状腺素对成年期甲状腺功能减退症大鼠前额叶Syntaxin-1表达的影响[D]. 孙春萍. 安徽医科大学, 2011(11)

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