一、雌激素对氧化低密度脂蛋白诱导单核细胞趋化因子受体CXCR2的影响（论文文献综述）
王兆博[1]（2021）在《温阳益心法对动脉粥样硬化miRNA调控作用及机制研究》文中进行了进一步梳理目的:1.筛选动脉粥样硬化（AS）差异表达的miRNA,研究温阳益心法对动脉粥样硬化差异miRNA的调节作用;2.探索“温阳益心法”改善动脉粥样硬化作用通路,并进行实验验证,探讨温阳益心法对动脉粥样硬化的治疗作用机制,为温阳益心法的深入研究提供实验支撑。方法:1.模型建立:将C57BL/6J雄性小鼠作为实验对象,采用维生素D3腹腔注射、猪油、高脂喂养的方法构建动脉粥样硬化（AS）模型,空白组予普食喂养及纯水灌胃。9周时进行模型评价,10周时取造模组体重前1/2小鼠,按体重随机分为5组（模型组、温心方低剂量组、温心方中剂量组、温心方高剂量组、西药组）,分别予纯水、温心方（低、中、高）、西药（阿司匹林联合立普妥）灌胃,空白组则继续予纯水灌胃。干预给药6周后麻醉全部小鼠进行眼球取血并剥离主动脉,检测血脂水平,对主动脉瓣处进行切片及HE染色;2.miRNA基因测序及表达量验证:通过基因芯片高通量测序筛选差异表达及药物有效调控的miRNA、mRNA,运用QT-PCR技术对关键基因的表达量进行验证,将miRNA录入Targetscan及Miranda基因数据库进行靶基因预测,通过KEGG富集分析预测“温阳益心法”治疗AS作用通路,根据Log Q对通路的重要性进行排序;3.网络药理学分析:检索TCMSP数据库检索各中药化合物（OB≥30%、DL≥0.18）,并将化合物的靶蛋白信息导入Uniprot网站进行基因名转换。将整合的数据导入Cytoscape 3.5.1软件,构建“中药-化合物-靶点”可视化网络图。登录Dis Ge NET、Genecard、Drug Bank、OMIM、GAD、TTD数据库对动脉硬化靶点进行检索,并将疾病与药物的交集靶点录入String网站及Cytoscape 3.5.1构建PPI网络,将靶点基因导入Metascape网站进行GO及KEGG富集分析并对通路进行预测;4.通过Western Blot实验对关键通路PI3K-AKT上的蛋白（IGF1R、ERK2、PIK3CA、PRKCA、VEGFA）进行验证。结果:1.空白组小鼠一般情况良好,血管光滑无病变形成。模型组动脉褶皱硬化明显,并有散在斑块形成,HE染色显示AS病变明显,温心方低剂量组改善并不明显,其他组别病变程度均有较明显的减轻。各组血脂差异并不显着（P>0.05）。2.研究通过高通量测序共筛选出30个“病变”miRNA基因,而“温阳益心法”有效调控了其中18个,3个基因（miR-6984-5p、miR-497-5p、miR-187-3p）通过QT-PCR证实与测序结果一致;3.网络药理学研究共筛选出疾病靶点基因3127个,温心方作用靶点196个,药物与疾病重叠靶点123个。β-谷甾醇、豆甾醇、小檗碱、槲皮素是温心方中度值排名最高的几种化合物。其可能通过PI3K-Akt、NF-κB、HIF-1等通路进行调控,而PI3K-Akt可能是温阳益心法（温心方）治疗AS的核心通路;4.Western Blot实验显示温心方对PI3K-Akt通路上IGF1R、ERK2、PIK3CA、PRKCA蛋白的表达起到了不同程度的调控作用,其中对IGF1R、PRKCA蛋白下调具有统计学意义（P<0.05）。结论:1、温阳益心法可有效改善AS小鼠动脉病变状况;2、温阳益心法能够改善部分AS“病变”miRNA的表达;3、温心方中β-谷甾醇、豆甾醇、小檗碱等化合物可能起到关键作用,并可通过多条通路对AS起到治疗作用,而PI3K-AKT可能是关键通路;4、温阳益心法能够调节PI3K-AKT通路上IGF1R、PRKCA等多个蛋白的表达。
刘冰[2]（2021）在《Wnt1/β-catenin通路在瘦素介导的慢性肾脏病内皮功能障碍中的作用机制研究》文中认为背景/目的慢性肾脏病（Chronic kidney disease,CKD）是由各种原因引起的肾损害。由于CKD死亡率排行逐年攀升,目前是世界范围内严重的公共卫生问题。研究表明CKD首要的并发症是心血管疾病（Cardiovascular disease,CVD）,是半数以上CKD患者的死因。CKD患者CVD主要病理改变为动脉粥样硬化,动脉粥样硬化始发于内皮细胞（Endothelial cells,ECs）。内皮功能障碍（Endothelial dysfunction,ED）是动脉粥样硬化的基础。研究表明,ED在CKD患者的早期阶段就很明显,随着疾病向终末期肾病（End stage kidney disease,ESKD）发展,ED程度逐渐加重,CVD死亡的风险也越来越高。目前CKD中ED的机制尚不明确,多种因素包括炎症、氧化应激、低维生素D、高磷血症、以及一氧化氮合成酶上游内源性抑制剂的积聚均参与其中。瘦素（Leptin）是脂肪组织合成和分泌的一种16 kDa蛋白。近年来研究表明,瘦素不仅参与能量代谢,还可促进氧化应激、炎症和脂质紊乱,而这些亦是ED发生的关键因素,因此,瘦素与CVD的风险增高密切有关。瘦素已成为心血管健康状况不佳的生物标志物,也是冠心病/急性冠脉综合征风险的生物标志物。瘦素通过肾小球滤过和肾小管代谢降解被肾脏清除,且有研究证实,CKD患者存在血清瘦素水平的升高,然而瘦素是否参与了 CKD患者ED的发生尚缺乏深入研究。Wnt通路通过控制细胞分化相关基因的表达来调节细胞的增殖和存活。到目前为止,已经发现了三条Wnt途径:一条β-catenin依赖的途径和两条不依赖于β-catenin的途径。Wnt/β-catenin信号通路是细胞粘附、胚胎发育、损伤修复和维持组织器官稳态的进化保守的信号级联。转移相关蛋白1（Metastasis-associated protein 1,MTA1）是核小体重塑和组蛋白去乙酰化复合物的一个组成部分,在人类多种细胞系和癌组织中广泛表达,并在细胞生存、扩散、迁移和入侵中起重要作用。大量研究提示,MTA1是Wnt通路重要的调控分子,在对非小细胞肺癌细胞的研究发现,MTA1表达下调可抑制Wnt/β-catenin通路,MTA1表达上调可激活Wnt/β-catenin通路。近年来研究证实,Wnt/β-catenin通路在ECs损伤中发挥重要作用,在氧化应激条件下辛伐他汀可通过激活Wnt/β-catenin通路诱发ED。而瘦素部分生理作用依赖于Wnt/β-catenin通路,如瘦素通过上调Wnt/β-catenin通路促进乳腺癌细胞的生长。由此,我们推测MTA1/Wnt/β-catenin通路可能在瘦素参与的CKD患者ED中具有重要的作用。因此,本研究收集比较CKD患者与健康对照者（Healthy controls,HCs）临床资料和血清学标本,检测瘦素、ED相关血清学标志物水平,评价瘦素与ED相关血清标志物的相关性;并进一步检测血流介导的血管舒张（Flow-mediated dilatation,FMD）评估血管内皮功能,评价瘦素与内皮功能的关系;并通过体外培养人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）,深入探讨瘦素在ED中的作用及具体机制。我们的研究将为CKD患者预防和治疗ED提供新的思路和治疗靶点。研究方法本研究分为两部分,第一部分为临床研究,确定CKD患者中瘦素水平的改变,以及瘦素与CKD患者ED的关系。第二部分为体外实验,探索瘦素对ED的作用以及其可能的机制。1.临床研究1.1研究对象:选取2014年1月-2019年12月在山东大学附属省立医院肾内科就诊符合入排标准的160例CKD患者。自山东大学附属省立医院查体中心选取性别、年龄匹配的160例健康成年人作为HCs,其年龄、性别较CKD组无差异。1.2临床资料收集以问卷方式详细记录患者的年龄、性别、吸烟史、发病时间及既往病史,并按标准测量方式完成人体测量,包括血压、身高和体重测量。并计算体重指数（Bodymass index,BMI）。1.3血标本采集和检测1.3.1常规实验室检测检测血肌酐、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、空腹血糖、血清胰岛素、超敏C反应蛋白。1.3.2 酶联免疫吸附测定（Enzyme-linked immunosorbent assays,ELISA）:检测血清瘦素、白介素-6（Interleukin-6,IL-6）、单核细胞趋化蛋白1（Monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1）及内皮素（Endothelin-1,ET-1）的水平。1.3.3计算稳态模型评估的胰岛素抵抗指数1.4 FMD检测评估血管内皮功能2.体外实验本部分采用HUVECs进行研究。2.1瘦素刺激对HUVECs炎症因子产生的影响根据预实验HUVECs的细胞活力变化,我们将100 ng/ml的瘦素作为最适浓度,并用其在不同时间（0h,6h,12 h,24h）刺激体外培养的HUVECs。采用ELISA检测HUVECs上清液中不同时间点IL-6、MCP-1及ET-1的水平;采用实时定量聚合酶链式反应（Real time polymerase chain reaction,RT-PCR）及蛋白印迹法（Western blot,WB）测定 HUVECs 的 IL-6、MCP-1、ET-1 在基因和蛋白水平的变化。2.2瘦素对HUVECs迁移的作用2.2.1划痕愈合试验HUVECs贴壁长满后划痕,初始划痕宽度记为A;干预组与对照组12 h后划痕宽度记为B;划痕愈合率=（A-B）/A×100%。2.2.2 Transwell细胞迁移实验取100μl对照组与干预组HUVECs单细胞悬液加入Transwell小室上腔中,培养7 h使细胞迁移。2.3瘦素对HUVECs单层通透性的作用利用Transwell上室（滤膜孔径:0.4 μm）培养HUVECs,使其形成内皮细胞单层,进一步检测内皮单层对异硫氰酸荧光素葡聚糖（fluorescein isothiocyanate dextran,FITC-dextran）的通透性,评估瘦素对HUVECs单层通透性的作用。2.4瘦素对HUVECs骨架重排的作用FITC-鬼笔环肽对不同干预条件下的HUVECs的F-actin进行染色,探讨瘦素是否可诱导细胞骨架重组。采用激光共聚焦显微镜免疫荧光检测连接蛋白（vinculin）的变化。2.5瘦素诱导ED的分子机制瘦素处理HUVECs 24h后,应用WB测定MTA1、Wnt1、β-catenin和磷酸化β-catenin（Y654）的蛋白水平变化。为进一步验证MTA1及Wnt1/β-catenin通路在瘦素诱导的ED中的作用,我们构建了 MTA1 短发夹核糖核酸（short hairpin ribonucleic acid,shRNA）及 Wnt1 shRNA慢病毒,并分别转染HUVECs,检测MTA1或Wnt1基因敲除后,瘦素刺激下炎症因子IL-6、MCP-1、ET-1的表达,HUVECs细胞迁移、通透性、细胞骨架重排及β-catenin的变化。结果1.临床研究1.1 CKD患者血清瘦素水平升高CKD患者血清瘦素水平较HCs组明显升高（7.89（3.79-9.33）ng/mlvs 5.49（5.49-7.73）ng/ml;P=0.039）。1.2 CKD患者ED相关炎症标志物水平升高与HCs相比,CKD患者血清IL-6、MCP-1、ET-1水平升高（IL-6:6.18（4.21-7.25）pg/ml vs 4.89（3.89-5.91）pg/ml,P=0.002;MCP-1:213.48（158.33-269.34）pg/ml vs 168.72（117.30-214.62）pg/ml,P<0.001;ET-1:2.27（1.41-3.06）pg/ml vs 1.34（0.97-1.77）pg/ml,P<0.001）。1.3 CKD患者FMD减低CKD 患者 FMD 水平较 HCs 组明显减低（4.49（2.83-5.74）vs 8.29（5.52-9.07）,P<0.05）。1.4 CKD患者血清瘦素水平与其他指标相关性分析CKD患者血清瘦素水平与肾小球滤过率呈负相关（r=-0.122,P=0.030）;与IL-6、MCP-1、ET-1 水平呈正相关（IL-6:r=0.119,P=0.034;MCP-1:r=0.115,P=0.039;ET-1:r=0.144,P=0.010）;与 FMD 呈显负相关（r=-0.294,P=0.006）。2.体外实验2.1瘦素刺激后,HUVECs分泌炎症因子增加应用100 ng/ml瘦素刺激HUVECs发现,瘦素刺激12 h后,ELISA结果显示,IL-6、ET-1和MCP-1水平显着升高,24 h后浓度最高,差异有统计学意义（P<0.01）;RT-PCR与WB结果显示,与对照组相比,瘦素刺激24 h后,HUVECs中IL-6、ET-1和MCP-1的mRNA及蛋白水平显着升高,差异有统计学意义（P<0.01）。2.2瘦素可促进HUVECs迁移与正常对照组相比,瘦素刺激组划痕愈合速度显着增快（P<0.01）,迁移穿过Transwell膜的细胞显着数多（P<0.01）。2.3瘦素可增加HUVECs的单层通透性与正常对照组相比,瘦素刺激组Transwell下室FITC-dextran的荧光强度显着增加（P<0.01）。2.4瘦素可诱导HUVECs的细胞骨架重排瘦素刺激后HUVECs的F-actin重排,分布在细胞边缘的肌动蛋白纤维减少,横跨细胞体的应力纤维明显增多、变粗,且排列紊乱,同时vinculin募集明显增加。2.5瘦素诱导ED的分子机制2.5.1瘦素通过活化MTA1-Wnt1通路诱导EDWB证实,瘦素处理HUVECs 24 h后,Wnt1和MTA1显着升高（P<0.01）;为了进一步确定MTA1及Wnt1是否参与了瘦素诱导的ED,我们分别使用慢病毒转染MTA1 shRNA及Wnt1 shRNA以降低其表达,并验证了敲除效率（P<0.01）。此外,用MTA1 shRNA转染HUVECs后,由瘦素刺激诱导的HUVECs的Wnt1表达增高被显着抑制,差异有统计学意义（P<0.05）;而Wntl shRNA转染HUVECs后,不影响瘦素诱导的MTA1的表达（P>0.05）。WB及RT-PCR结果显示,MTA1基因敲低及Wnt1基因敲低后,可显着降低由瘦素刺激所导致的炎症因子IL-6、MCP-1、ET-1 mRNA与蛋白的表达增高（P<0.05）;划痕愈合试验及Transwell细胞迁移实验发现,MTA1基因敲低及Wnt1基因敲低后,可显着改善由瘦素刺激所导致HUVECs的迁移力增加（P<0.05）;同时,FITC-鬼笔环肽染色显示,MTA1和Wnt1基因敲低可减轻由瘦素所引起的细胞骨架的破坏。2.5.2瘦素通过诱导β-catenin核转位和磷酸化参与EDWB显示,瘦素刺激后HUVECs的β-catenin总蛋白量较对照组无显着变化（P>0.05）,而核 β-catenin 和磷酸化 β-catenin（Y654）水平显着升高（P<0.01）。瘦素刺激MTA1或Wnt1敲低后的HUVECs,其β-catenin总蛋白的表达与瘦素刺激的野生型HUVECs无统计学意义（P>0.05）,核β-catenin和磷酸化β-catenin（Y654）水平较后者显着降低,差异有统计学意义（P<0.05）。结论1.CKD患者血清瘦素水平升高,且与内皮功能障碍密切相关。2.瘦素可通过诱导内皮细胞炎症因子合成、导致F-actin骨架重排以及细胞迁移性和单层通透性增强,介导内皮功能障碍的发生。3.瘦素通过激活MTA1/Wnt1,导致β-catenin发生核迁移和Y654磷酸化,进而介导内皮功能障碍。
李倩琴[3]（2021）在《IL-37通过Notch1和NF-κB途径抑制M1巨噬细胞极化而延缓主动脉瓣钙化》文中指出第一部分IL-37通过抑制Notch1和核因子κ B途径抑制M1巨噬细胞极化研究背景巨噬细胞Ml和M2极化失衡在主动脉瓣钙化中起重要作用,M1极化在主动脉瓣钙化（Calcific aortic valve desease,CAVD）过程中起重要作用。研究表明重组白细胞介素37（Interleukin 37,IL-37）可能参与调节免疫细胞分化和减轻炎症的功能,本研究旨在明确IL-37对M1极化的特异性调节作用,并探讨其可能的机制。方法常规方法培养人急性单核白血病细胞（THP-1细胞）,把干预药物加入细胞培养液,收集细胞培养上清液,用ELISA试剂盒（R&D系统）检测IL-6、IL-10和MCP-1的表达。正常主动脉瓣叶取自6例接受心脏移植的男性患者,狭窄瓣膜取自6例接受主动脉瓣置换术的男性患者,标本切成5μm厚的切片染色后进行组织学分析。免疫印迹法检测iNOS,CD11c,CD206,IL-6,MCP-1,NICD1,磷酸化和总NF-κ B表达。结果与正常瓣膜相比,钙化主动脉瓣中M1巨噬细胞积聚较多,而IL-37表达较少,提示IL-37与M1极化呈负相关。我们证明了较低的IL-37水平能引起更多的M1巨噬细胞浸润到钙化的主动脉瓣中。佛波酯可诱导THP-1细胞分化为静息巨噬细胞经,脂多糖和干扰素γ处理后THP-1细胞可分化为M1巨噬细胞。重组人IL-37可降低M1中iNOS、CD11c、IL-6和MCP-1的表达,增强M2巨噬细胞中CD206和IL-10的表达。IL-37抑制M1巨噬细胞极化与抑制核因子κB（NF-κB）和Notch1信号通路有关。这些结果表明,IL-37通过抑制Notch1和核因子κB途径,抑制巨噬细胞极化为M1型。结论IL-37可以通过调节M1巨噬细胞极化及其协调的炎症,成为治疗进行性CAVD的潜在候选药物。第二部分 心脏手术患者术后白介素37水平与围术期各因素相关性分析研究背景血浆中IL-37在心脏外科术后患者中的水平尚未有相关的研究。本研究的目的是监测心脏外科术后患者血浆IL-37水平,并评价其与临床相关因素和生化实验室指标的相互关系。方法收集心脏的术后IL-37水平以及术前、围术期各个临床指标及生化检验结果,分析心脏术后IL-37水平与各个因素的相关性。结果纳入患者193例,与IL-37有相关性的连续性变量包括患者体表面积（p=0.000,r值=0.980）,术后血小板计数（p=0.034,r值=0.152）,术前血肌酐（p=0.000,r值=0.294）,术后第一天、第二天、第三天血肌酐,分别为（p=0.000,r 值=0.390）、（p=0.000,r 值=0.327）、（p=0.000,r 值=0.305）,BMI（p=0.002,r值=-0.225）,心胸比（p=0.003,r 值=0.215）,术后 EF（p=0.008,r 值=-0.191）,术后 WBC（p=0.015,r 值=0.175）,术前 CysC（p=0.000,r 值 0.257）,术后前三天 CysC（p=0.000,r值=0.503）、CysC（p=0.000,r值=0.478）、CysC（p=0.000,r值=0.221）。对于离散资料等级数据,有显着性差异的结果与IL-37相关性包括患者的BMI（F=3.11,p=0.028）,BMI与IL-37水平呈负相关。术前合并慢性肾功能不全的患者IL-37水平升高（F=16.36,p=0.000）;术后使用新活素的患者IL-37水平升高（p=0.008）;术后的EF值与IL-37水平呈负相关（p=0.040）;术中或术后的输注红细胞的患者IL-37水平升高（p=0.008）;术后第一天WBC与IL-37水平呈正相关（F=3.494,p=0.032）;机械通气时间与IL-37水平呈正相关（p=0.015）,住院天数与IL-37水平呈正相关（p=0.014）;术后肌酐清除率与IL-37水平呈负相关（F=33.56,p=0.028）。结论IL-37的水平与心脏患者心功能情况、心脏术后机械通气时间及住院天数的、心脏患者术后肾功能不全的具有相关性。
张瑞平[4]（2021）在《巨噬细胞迁移抑制因子对脑缺血再灌注大鼠神经损伤的作用》文中进行了进一步梳理背景:缺血性脑卒中是各种原因引起脑部血液供应中断致使动脉灌注区域脑组织永久性坏死。近年来,发现巨噬细胞迁移抑制因子（MIF）可能参与脑卒中的发生发展。但尚未阐明MIF在缺血性脑卒中中的作用机制。目的:探讨MIF对大鼠脑缺血再灌注损伤（I/R）后神经损伤及可能涉及机制。方法:将42只雄性SD大鼠随机分为假手术组（Sham）、缺血再灌注组（I/R）和MIF抑制剂ISO-1处理组（ISO-1）。利用大脑中动脉阻塞（MCAO）制备大鼠I/R模型。ISO-1组大鼠于再灌注同时腹腔注射ISO-1。采用Garcia评分和平衡木实验评定各组大鼠的神经功能损伤情况。通过2,3,5-三苯四唑氯化（TTC）染色检测大鼠脑梗死体积,Nissl染色观察大鼠神经元形态,TUNEL染色检测神经细胞凋亡情况,并使用免疫荧光染色情况观察大脑皮层中MIF在胶质细胞纤维酸蛋白（GFAP）、离子钙接头蛋白1（Iba-1）和神经元核抗原（Neu N）的表达变化,通过Western Blot检测MIF、腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、乳酸脱氢酶A（LDHA）、丙酮酸激酶M2（PKM2）、葡萄糖转运蛋白-1（GLUT-1）蛋白在脑组织中表达情况。结果:与Sham组相比,MIF在I/R大鼠脑组织梗死周边区明显增加,在梗死核心区明显减少。梗死周围区MIF主要位于神经元中,部分位于星形胶质细胞中,极少部分位于小胶质细胞中。与Sham组相比,I/R组和ISO-1组大鼠梗死面积增加（P<0.05）,Garcia评分减少（P<0.05）,平衡木增加（P<0.05）;与I/R组相比,ISO-1组梗死体积减小（P<0.05）,garcia评分增加（P<0.05）,平衡木步行试验6分减少（P<0.05）。Sham组中尼氏体呈圆形及类圆形、胞质疏松、分布均匀;I/R组尼氏体染色加深、体积缩小、数量减少、呈长梭形,散在分布;与I/R组相比,ISO-1组尼氏体部分恢复。与Sham组相比,I/R组大鼠总凋亡率、神经元凋亡率及凋亡蛋白Bax和Caspase-3增加（P<0.05）。与I/R组相比,ISO-1组大鼠总凋亡率、神经元凋亡率及凋亡蛋白Bax和Caspase-3减少（P<0.05）。抗凋亡蛋白Bcl-2在3组中无明显差异,表明MIF抑制剂ISO-1减少神经元凋亡。免疫荧光及Western blot发现,与Sham组相比,I/R组和ISO-1组大鼠星形胶质细胞增殖活化增加（P<0.05）;与I/R组相比,ISO-1组大鼠星形胶质细胞增殖活化减少（P<0.05）。Western blot表明,与Sham组相比,I/R组和ISO-1组大鼠P-AMPK/AMPK,LDHA,PKM-2,GLUT-1蛋白表达上调（P<0.05）;与I/R组相比,ISO-1组大鼠P-AMPK/AMPK,LDHA,PKM-2,GLUT-1蛋白表达降低（P<0.05）。结论:MIF抑制剂ISO-1对MCAO大鼠缺血再灌注后神经功能的恢复发挥重要的正向调控作用,可能与糖代谢相关的分子有关。
张艳达[5]（2021）在《冠脉慢血流微循环障碍的机制和干预研究》文中研究说明冠脉微循环障碍（Coronary microvascular dysfunction,CMD）在非阻塞性冠心病发病中起重要作用,也是其起病的重要机制,CMD引起的心血管事件严重影响患者的生活质量,疾病负担严重,已成为当前临床迫切需要解决的问题。作为临床上诊断相对容易的原发性CMD类型之一,冠脉慢血流现象（Coronary slow flow phenomenon,CSFP）是本课题的重点关注对象,纳入相关患者进行临床研究;脂肪乳输注诱导的小鼠CMD模型和棕榈酸（Palmitic acid,PA）干预的小鼠心脏微血管内皮细胞将被用于探究冠脉慢血流微循环障碍发病的深层机制。本课题将从临床到基础多层面探讨冠脉慢血流微循环障碍的可能发病机制和有效干预手段,为CMD的临床干预提供理论支撑。实验目的:对冠脉慢血流患者和对照组患者的外周血白细胞,进行全转录组测序和单细胞测序分析;比较两组患者的血浆生化指标,发现CSFP患者发病特点与规律。通过模拟CSFP患者临床特点诱导小鼠CMD模型、干预小鼠心脏微血管内皮细胞,探究脂肪乳输注诱导冠脉微血管功能障碍的深层机制。研究方法:1、冠脉慢血流患者白细胞全转录组及单细胞测序分析:对照组患者（n=28）和慢血流组患者（n=28）均来源于上海长征医院心内科2017年7月至2019年7月入院且行冠脉造影的患者。留取对照组和慢血流组患者血浆和白细胞,并收集患者低密度脂蛋白、甘油三酯、高密度脂蛋白和血压等临床化验检查结果。对冠脉慢血流组和对照组病人的外周血白细胞进行全转录组测序和单细胞测序分析。最后通过ELISA测定两组患者血浆中e NOS和s LOX-1水平,借助酶标仪测定血浆游离脂肪酸（Free fatty acids,FFAs）浓度。2、静脉输注脂肪乳诱导小鼠CMD模型及尼可地尔对CMD小鼠的改善作用:选取6周至8周C57雄性小鼠（20±2g）30只,随机分为假手术对照组（Control组）、CMD模型组（静脉输注脂肪乳诱导）（Model组）和模型联合尼可地尔干预组（Model+Nico组）。予以Control组小鼠输注生理盐水（0.1 m L/h）,路径为颈静脉,时间为6小时;予以Model组和Model+Nico组小鼠输注脂肪乳(20%Intralipid○R)和肝素（20 U/m L）混合溶剂（0.1 m L/h）,路径及输注时间同Control组。通过无创超声多普勒血流仪测定小鼠冠脉血流储备评估小鼠冠脉微循环功能和状态;通过Transdermal GFR Monitor检测小鼠肾小球滤过率改变;通过BX51显微镜评估小鼠提睾肌微循环血流状态,分析并记录提睾肌微血管的血流速度、白细胞粘附数量、白细胞滚动速度等微循环血流动力学指标。通过电镜分析小鼠心肌组织、肾脏组织超微结构,评估脂肪乳输注对小鼠心肌细胞、肾脏足细胞、心肌微血管和缝隙连接的影响。留取小鼠血浆,测定FFAs、IFN-γ、IL-1β、IL-6、NO、SOD和TNF-α浓度;留取小鼠外周血白细胞,进行定量PCR分析、ROS检测和流式分析等;留取小鼠心肌组织进行定量PCR、免疫组化和Western Blot明确AMPK-KLF2-e NOS信号通路的表达改变情况。3、脂肪乳输注诱导小鼠CMD的可能机制:通过密度梯度离心法分离获取小鼠外周血中性粒细胞,探究脂肪乳输注诱导中性粒细胞外网状陷阱释放。最后,在体验证中性粒细胞外网状陷阱消除对小鼠提睾肌白细胞粘附的影响。体外培养小鼠心脏微血管内皮细胞,建立PA干预细胞的浓度和时间梯度,通过CCK-8试剂盒和ROS检测试剂盒评估PA不同干预浓度和时间下小鼠微血管内皮细胞活力和心脏微血管内皮细胞氧化应激水平。通过Western Blot测定PA不同干预浓度或干预时间下小鼠心脏微血管内皮细胞AMPK-KLF2-e NOS信号通路表达改变。分别用AICAR、KLF2过表达质粒和尼可地尔干预心脏微血管内皮细胞,测定AMPK-KLF2-e NOS信号通路改变,探究AMPK激活、KLF2过表达或NO浓度升高时微血管内皮细胞活力和氧化应激水平,并验证AMPK激活对模型小鼠冠脉微循环障碍的影响。实验结果:1、人外周血白细胞全转录组测序分析发现,慢血流组共92个m RNA表达升高,共有129个m RNA表达降低,这些基因与脂类代谢、细胞粘附等生物过程密切相关。慢血流组上调lnc RNA共计738个,下调的共计472个。慢血流组上调circ RNA共计117个,下调的共计29个。单细胞转录组测序分析发现慢血流组调控生物粘附、抗氧化、免疫反应和代谢等生物过程的基因表达均发生了改变。与对照组相比,冠脉慢血流组血浆e NOS浓度降低,血浆FFAs、s LOX-1浓度升高（P<0.05）。冠脉慢血流组患者脂类代谢异常、血浆游离脂肪酸浓度升高和血管内皮功能障碍可能与冠脉微循环障碍的发生、发展相关。2、与Control组相比,Model组小鼠冠脉血流储备、肾小球滤过率显着降低,同时伴有提睾肌微小血管管壁白细胞粘附数量增加、滚动速度降低,外周血白细胞表面CD11b表达升高,白细胞KLF2 m RNA表达水平降低,ROS含量增高（P<0.05）。电镜分析提示Model组小鼠微血管内皮肿胀、心肌细胞缝隙连接断裂、足细胞足突融合。脂肪乳输注引起小鼠血浆FFAs、TNF-α和IL-6浓度升高。尼可地尔可显着改善脂肪乳静脉输注引起的小鼠冠脉血流储备和肾小球滤过率降低、提睾肌微血管内白细胞滚动速度降低、ROS和炎症因子产生增多,降低粘附于提睾肌微小血管管壁上的白细胞数量,下调外周血白细胞表面粘附分子CD11b的表达（P<0.05）。与Control组相比,Model组小鼠心肌组织AMPK-KLF2-e NOS通路抑制,而尼可地尔干预则可上调心肌组织e NOS的表达,升高NO浓度（P<0.05）。静脉输注脂肪乳可诱导小鼠CMD,其机制可能涉及AMPK-KLF2-e NOS信号通路抑制,而尼可地尔可能通过升高NO浓度来发挥改善CMD的作用。3、中性粒细胞外网状陷阱产生在脂肪乳诱导的微循环障碍中起着重要作用,中性粒细胞外网状陷阱清除可以降低提睾肌小血管壁白细胞粘附数量（P<0.05）。PA诱导的小鼠心脏微血管内皮细胞活力降低、氧化应激水平升高和AMPK-KLF2-e NOS信号通路抑制存在明显浓度和时间依赖。AMPK激活、KLF2过表达和e NOS激活都可以减轻棕榈酸引起的AMPK-KLF2-e NOS信号通路的抑制,改善细胞活力和氧化应激水平（P<0.05）。AMPK激活还可以改善CMD模型小鼠冠脉血流储备,减少提睾肌微小血管内白细胞粘附数量（P<0.05）。研究结论:全转录组和单细胞转录组测序分析发现慢血流患者外周血白细胞中与脂类代谢、抗氧化和粘附等相关的基因表达发生显着改变,且其血浆FFAs、s LOX-1浓度升高,血浆e NOS含量降低,提示脂肪酸代谢异常、白细胞粘附、内皮功能障碍可能与冠脉慢血流微循环障碍发病密切相关。升高FFAs浓度可以诱发小鼠CMD,其机制可能为AMPK-KLF2-e NOS信号通路抑制。升高NO浓度可通过减少炎症因子释放、降低细胞内ROS产生和抑制中性粒细胞外网状陷阱形成等来发挥其改善CMD作用。
张丽[6]（2021）在《小鼠胸腺和脾脏增龄性变化的转录组和蛋白组学研究》文中研究说明研究背景免疫衰老指随着年龄的增长,因免疫器官结构破坏和免疫反应功能障碍,造成先天性和适应性免疫受损,导致老年人免疫功能的改变,伴随以慢性炎症为特征的全身炎症状态,与感染、自身免疫性疾病以及肿瘤等的发生发展密切相关。目前免疫衰老的确切机制尚未完全明确。初级和次级淋巴器官结构和功能的破坏可导致免疫功能减退,因此免疫器官增龄性变化可能与免疫衰老的发生有关。胸腺和脾脏作为机体最大的中枢和外周免疫器官,随着年龄增加,结构和功能发生改变,正常微环境的破坏以及T淋巴细胞数目的减少引起机体免疫功能的减退,影响外周免疫的稳态,可能促进与年龄有关的机体炎症状态以及免疫衰老的发生。衰老引起的胸腺及脾脏结构和功能的变化可能与免疫衰老存在关联。目的胸腺和脾脏增龄性分子变化以及机制目前尚未明确。本实验通过基于整合转录组和蛋白质组学方法,揭示不同年龄组小鼠胸腺和脾脏组织在转录组和蛋白组水平上的增龄性分子变化,探讨胸腺、脾脏的增龄性变化在免疫衰老中潜在作用,为免疫衰老导致的相关疾病的诊治提供可能的候选靶标。方法本实验首先通过HE染色、免疫组化以及透射电镜超微观察等方法研究不同年龄组（6周龄,6月龄,20月龄）小鼠胸腺和脾脏免疫器官组织学变化。随后通过整合RNA-seq转录组学方法以及串联质谱标签（TMT）相对定量蛋白质组学技术,研究不同年龄组小鼠胸腺和脾脏组织在转录组和蛋白组水平上的表达差异变化,结合生物信息学方法分析其所富集的通路,筛选出增龄相关的差异基因和蛋白,并进一步验证筛选出的差异基因与蛋白。结果1.小鼠增龄性免疫器官重量及指数变化小鼠鼠体重随着年龄增长而增加。小鼠胸腺重量随年龄增加而减少,20月龄组和6月龄组小鼠胸腺重量均显着低于6周龄组,且具有统计学意义。小鼠脾脏重量随着年龄增加变化不显着,20月龄和6月龄组小鼠脾脏重量高于6周龄组,均无统计学差异。小鼠胸腺指数和脾脏指数均随年龄增加而显着减少。2.免疫器官组织学变化（1）胸腺HE染色:6周龄组小鼠胸腺皮髓质界限清晰,皮质着色深,淋巴细胞致密、染色较深;髓质着色较浅,结构稍疏松,淋巴细胞数目较皮质少,有大量TECs。6月龄组小鼠胸腺组织皮质成分变薄,皮髓质内胸腺细胞间隙增大,皮/髓比显着降低;髓质内TECs数目较少。20月龄组小鼠胸腺组织较6周龄、6月龄组明显萎缩、面积显着减少,周围可见结缔组织包绕、替代,皮髓质界限不清;胸腺细胞、TECs数量均较少,胸腺细胞深染、不规则,成纤维细胞数目增加。免疫组化:随着年龄增加,小鼠胸腺皮、髓质中CD3阳性T淋巴细胞、Ep CAM阳性TECs数目显着减少。20月龄组皮质TECs较6周龄与6月龄组显着减少,20月龄与6月龄组髓质TECs较6周龄组显着减少;20月龄与6月龄组皮质淋巴细胞较6周龄组显着减少,20月龄组髓质淋巴细胞较6周龄与6月龄组显着减少;20月龄与6月龄组巨噬细胞较6周龄组显着增加。超微结构:小鼠胸腺随年龄增长,细胞数目减少、结构疏松,淋巴细胞核趋于不规则,核质比小;可见坏死胸腺的上皮细胞。20月龄组可见凋亡现象增加,上皮细胞线粒体呈空泡变。（2）脾脏HE染色:6周龄组小鼠脾脏红、白髓、边缘区结构清晰,脾脏小体结构规则,淋巴滤泡深染,淋巴细胞致密。6月龄组小鼠脾脏红、白髓界限模糊,边缘区较6周龄组显着增宽,生发中心面积增大,淋巴细胞较6周龄组稍疏松。20月龄组小鼠皮髓质界限模糊,脾脏小体结构不规则,白髓萎缩、面积减少,红髓面积相应增大,红/白髓比显着升高;边缘区较6月龄组与6周龄组显着增宽,生发中心面积增大,实质内成纤维细胞、纤维结缔组织增生。免疫组化:随着年龄增加,小鼠脾脏白髓内淋巴细胞数目显着下降,白髓边缘区与生发中心内B淋巴细胞数目增加,边缘区巨噬细胞数目增龄性显着增加。超微结构:6周龄小鼠脾脏内淋巴细胞较致密,核规则呈圆形,核质比大,异染色质较多,胞浆线粒体、内质网、有力的核糖体较丰富;局部散在中性粒细胞、浆细胞、巨噬细胞等。6月龄小鼠脾脏内淋巴细胞部分核稍不规则,异染色质边聚,部分胞浆内可见线粒体空泡变;凋亡细胞增加。20月龄小鼠脾脏内淋巴细胞疏松,数目明显减少,核不规则,异染色质边聚,呈块状,凋亡细胞明显增加。3.ELISA检测细胞因子结果显示,小鼠血清中细胞因子IFN-γ、IL-10、TNF-α和IL-6等有增龄性升高趋势,20月龄组中IL-10、TNF-α和IL-6水平高于6周龄组、6月龄组,20月龄、6月龄组中IFN-γ水平高于6周龄组,均无显着性统计学差异。4.胸腺转录组和蛋白组学结果分析RNA-Seq方法筛选出524个胸腺增龄相关差异表达基因,主要参与信号转导过程（PI3K-Akt信号通路、Rap1信号通路、Ras信号通路）、信号分子和相互作用过程（ECM-受体相互作用）、免疫系统（B细胞受体信号通路、补体和凝血级联、趋化因子信号通路）等信号通路;TMT技术确定113个胸腺增龄相关差异表达蛋白,主要参与能量代谢过程如柠檬酸盐循环（TCA循环）、细胞生长与死亡过程（细胞周期、凋亡过程）、遗传信息处理过程（剪接体）、内分泌系统（脂肪细胞因子信号通路）、免疫系统等通路。通过蛋白网络互作分析,筛选出与胸腺增龄相关的Fgf2、Flt1、BMP4、v WF、Lamc1、CD19、Cxcr5等重要差异基因以及CKS1、SRSF2、CASP-3、FGF2、CPT1B、PTMA、NASP等重要差异蛋白。5.脾脏转录组和蛋白组学结果分析基于RNA-Seq方法筛选出28个脾脏增龄相关差异表达基因,主要参与炎症反应、免疫相关通路,包括趋化因子信号转导途径,MAPK信号通路、Rap1信号通路等信号通路。TMT技术确定133个组织脾脏增龄相关差异表达蛋白,参与细胞生长与死亡过程（细胞周期）、遗传信息处理过程（翻译、核糖体）、细胞运动性过程（肌动蛋白细胞骨架调节）、免疫系统等通路。通过蛋白网络互作分析,筛选出与脾脏增龄相关的、vsig4、cfh、c7、cx3cl1、penk、ccl8、prkcz等重要差异基因以及CCNA2、ATOX1、CCR6、CXCL5、EIF3L、GZMA、RABL3、SLAMF1、RSL24D1等重要差异蛋白。结论随着年龄增长,小鼠免疫器官胸腺和脾脏在组织结构和免疫细胞分布上发生了变化,主要表现为微环境破坏、T淋巴细胞减少。衰老个体中炎症因子水平高于幼年组。不同年龄段小鼠胸腺和脾脏组织在基因和蛋白水平上表达存在明显差异性。增龄过程中,胸腺在基因水平上的变化表现为胸腺微环境受影响,脂肪生成活动增强,胸腺上皮细胞分化、生成以及胸腺细胞迁移、增殖或分化受影响,促炎作用增强等;在蛋白水平上表现为能量代谢增加,细胞生长、遗传物质传递相关过程受损,细胞凋亡活动增强、凋亡抑制作用减弱,脂质代谢增强,胸腺微环境受影响、促炎细胞因子分泌增加等。增龄过程中,脾脏在基因水平上的变化表现为T细胞增殖的抑制活动增强,促进细胞死亡活动增加,细胞凋亡的信号转导途径激活,促炎活动增强等。在蛋白水平上表现为细胞周期、蛋白质合成受损,细胞增殖活性减退、迁移过程受影响,抗氧化作用增强,T、B细胞激活作用增强、促炎反应增强等。衰老对胸腺和脾脏的影响主要包括影响其组织正常结构及其正常的生长、发育过程,此外促炎反应的增强可能与免疫衰老的炎症状态相关。本研究结果为阐明胸腺、脾脏增龄性分子变化以及探讨其在免疫衰老中可能存在的作用提供理论依据。
孟庆海[7]（2021）在《泽泻醇B乙酸酯通过调节肠道菌群和肠道雌激素受体抗绝经后动脉粥样硬化的机制研究》文中研究表明目的:探究绝经后女性雌激素受体下调、肠道菌群变化及绝经后血管损伤之间的相关性,探究泽泻醇B乙酸酯能否通过调节肠道菌群和肠道雌激素受体抗绝经后动脉粥样硬化并探索其可能机制。方法:第一章:收集接受主动脉置换术的绝经前（<45岁）和绝经后（>55岁）女性主动脉血管及绝经前（<45岁）正常女性和绝经后（>55岁）冠心病女性患者粪便。16SrRNA基因高通量测序分析女性粪便中的肠道菌群,HE染色观察女性主动脉血管的病理变化,透射电镜观察女性血管中的超微结构变化,免疫组化染色检测女性血管中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、ERα、ERβ、GPER、SRC、PI3K 和 p-AKT 的表达。分析绝经前后女性主动脉炎症、雌激素受体表达及肠道菌群组成的相关性。第二章:使用LDLR-/-小鼠合并高脂饮食复制动脉粥样硬化模型,对动脉粥样硬化模型小鼠进行双侧卵巢切除复制绝经后动脉粥样硬化模型（模型组）,同时设置C57BL/6正常饮食和高脂饮食组以及LDLR-/-小鼠正常饮食组。对绝经后动脉粥样硬化模型小鼠分别进行AB23A治疗实验、粪菌移植实验及AB23A与抗生素联合应用实验。实验周期结束后,使用生化试剂盒检测小鼠血清中TC、TG、LDL-c及HDL-c 水平以评价血脂,ELISA试剂盒检测小鼠血清中IL-1β、IL-6及TNF-α水平以评价血清炎症,油红O染色检测小鼠主动脉及主动脉根部切片中阳性面积以评价动脉粥样硬化损伤,Masson染色检测小鼠主动脉根部切片中胶原以评价纤维帽面积,免疫组织化学染色检测小鼠主动脉根部切片及结肠中NLRP3和IL-1β的表达水平以评价组织炎症,HE染色检测小鼠结肠组织形态以评价组织病理损伤,免疫组织荧光染色检测小鼠结肠中Claudin-1、Occludin和ZO-1的表达水平以评价紧密连接的状态,蛋白印迹法检测小鼠结肠组织中NLRP3、IL-1β、Claudin-1、Occludin和ZO-1的蛋白表达水平以进一步确认结肠中炎症和紧密连接状态。16SrRNA基因高通量测序分析小鼠粪便中肠道菌群。分析AB23A模型小鼠治疗实验中小鼠动脉粥样硬化相关症状、肠道菌群及紧密连接之间相关性。第三章:对绝经后动脉粥样硬化模型小鼠进行AB23A治疗实验。实验周期结束后,使用ELISA试剂盒检测小鼠血清中雌激素水平,免疫组织化学染色检测小鼠结肠中ERα、ERβ、GPER和SRC的表达水平,免疫组织荧光染色检测小鼠结肠中PI3K和p-AKT的表达水平,蛋白印迹法检测小鼠结肠组织中ERα、ERβ、GPER、SRC、PI3K、AKT和p-AKT的蛋白表达水平。应用胆固醇负荷的Caco-2细胞复制肠道上皮细胞损伤模型,使用AB23A并联合ERα抑制剂MPP、ERβ抑制剂PHTPP、GPER抑制剂G-15、PI3K抑制剂LY294002或AKT抑制剂10-DEBC抑制相应蛋白,或联合ERα siRNA、ERβ siRNA、GPER siRNA或SRC siRNA沉默相应基因的表达,作用于Caco-2细胞,并建立不同的对照和分组。MTT法检测细胞活性,油红O染色评价细胞脂质堆积,免疫荧光法检测细胞中 SRC、ERα、ERβ、GPER、PI3K、p-AKT、Claudin-1、Occludin 及 ZO-1 单独或共同表达的情况,蛋白印迹法检测细胞中SRC、ERα、ERβ、GPER、NLRP3、IL-1β、PI3K、p-AKT、Claudin-1、Occludin、ZO-1的蛋白表达情况,免疫共沉淀法检测细胞中GPER与SRC的相互作用。结果:第一章:与绝经前女性相比,绝经后女性血管内皮层和平滑肌均呈现更严重的损伤及 NLRP3、Caspase-1、IL-1β 表达的升高,而 ERα、ERβ、GPER、SRC、PI3K 和 AKT的表达均显着降低。与正常绝经期女性相比,绝经后冠心病女性粪便中肠道菌群的物种丰度和物种多样性显着降低;特定水平的物种相对丰度变化显着,如门水平上,Firmicutes、Tenericutes及Fusobacteria等细菌门的相对水平在绝经后女性的粪便中显着降低,而Verrucomicrobia及Bacteroidetes等细菌门的相对水平显着升高,属水平上,Clostridium 及Faecalibacterium等细菌属的相对水平显着降低,而 Shigella、Lactobacillus及Bacteroides等细菌属的相对水平显着升高。相关性分析显示绝经前后女性主动脉炎症、雌激素受体表达及肠道菌群组成之间具有显着的相关性。第二章:与动脉粥样硬化小鼠相比,绝经后动脉粥样硬化小鼠血脂、血清炎症水平和动脉粥样硬化损伤进一步增加,并导致结肠炎症、紧密连接损伤和病理性变化的加剧,AB23A的治疗显着降低模型小鼠血脂、血清炎症水平和动脉粥样硬化损伤,并显着减轻结肠炎症、紧密连接损伤和病理性变化;与动脉粥样硬化小鼠相比,绝经后动脉粥样硬化小鼠的肠道菌群的丰度和多样性显着降低,且特定物种水平上相对丰度发生显着改变,AB23A的治疗显着增加模型小鼠肠道菌群的丰度和多样性,并逆转模型小鼠特定物种水平上相对丰度的变化,如AB23A的治疗显着增加模型小鼠粪便内降低的Firmicutes细菌门的相对水平,显着降低模型小鼠粪便内升高的Verrucomicrobia细菌门的相对水平,在属水平上,AB23A的治疗显着降低模型小鼠的粪便中Bacteroides和Akkermansia等细菌属的相对水平;相关性分析显示小鼠的动脉粥样硬化相关症状、肠道菌群组成及紧密连接之间呈现显着相关性。粪菌移植导致模型小鼠肠道菌群丰度、多样性和特定物种水平上相对丰度向供体小鼠靠近;接受模型组小鼠粪便的受体小鼠的肠道菌群丰度和多样性显着低于接受AB23A治疗组粪便的受体小鼠,具有同样变化的还包括特定物种水平上的相对丰度;改变模型小鼠肠道菌群结构足以引起血脂、血清炎症和动脉粥样硬化症状以及结肠炎症、紧密连接损伤和病理性变化显着改变,与接受模型组小鼠粪便的受体小鼠相比,接受AB23A治疗组粪便的受体小鼠的血脂、血清炎症和动脉粥样硬化损伤显着降低,结肠炎症、紧密连接损伤和病理性变化显着减轻。抗生素显着抑制各组小鼠肠道菌群的丰度和多样性;给予抗生素的模型组小鼠中,总胆固醇水平、血清炎症和动脉粥样硬化症状显着降低,结肠炎症、紧密连接损伤和病理性变化显着减轻;AB23A对给予抗生素的模型组小鼠的治疗仍促进了肠道菌群的丰度和多样性;抗生素的应用,增强了 AB23A对模型小鼠血脂、血清炎症和动脉粥样硬化损伤的降低作用及对结肠炎症、紧密连接损伤和病理性变化的减轻作用。第三章:双侧卵巢的切除,导致高脂饮食LDLR-/-小鼠雌激素受体、雌激素水平及SRC表达的显着降低,同时显着降低的还有PI3K/AKT信号,AB23A未影响模型小鼠雌激素水平,但显着上调肠道中雌激素受体和SRC的表达,并上调PI3K/AKT信号。胆固醇的负荷导致Caco-2细胞中胆固醇堆积、炎症增加和紧密连接损伤;AB23A减轻胆固醇作用的Caco-2细胞中胆固醇堆积、炎症和紧密连接损伤,上调SRC的表达并增强PI3K/AKT信号。使用ERα或ERβ的抑制剂或ERα或ERβ的基因被沉默时,未影响AB23A对胆固醇作用的Caco-2细胞胆固醇堆积和炎症的抑制以及紧密连接的保护作用,也未影响AB23A对GPER和SRC的上调作用,同样未影响AB23A对PI3K/AKT信号的激活;使用GPER抑制剂或GPER siRNA时,AB23A对胆固醇作用的Caco-2细胞胆固醇堆积和炎症的抑制以及紧密连接的保护作用被取消,同时被取消的还包括AB23A对SRC的上调作用和对PI3K/AKT信号的激活。SRC的基因被沉默时,AB23A对胆固醇作用的Caco-2细胞胆固醇堆积和炎症的抑制以及紧密连接的保护作用被取消,AB23A对PI3K/AKT信号的激活作用同样被取消,但未影响AB23A对胆固醇作用的Caco-2细胞雌激素受体表达的上调作用。PI3K/AKT信号被阻断时,AB23A对胆固醇作用的Caco-2细胞胆固醇堆积和炎症的抑制以及紧密连接的保护作用被取消;但是PI3K/AKT信号的抑制未影响AB23A对雌激素受体和SRC的上调作用。结论:1.绝经后女性血管炎症和损伤的增加与雌激素受体信号降低及肠道菌群的紊乱具有显着的相关性。2.AB23A可通过调节肠道菌群减轻绝经后LDLR-/-小鼠肠道炎症并保护肠屏障,进而降低绝经后小鼠的血脂、血清炎症及血管炎症,抑制绝经后小鼠动脉粥样硬化的发生发展。3.AB23A通过激活结肠上皮细胞GPER上调SRC表达并激活下游的PI3K/AKT信号进而抑制结肠上皮细胞炎症和紧密连接损伤是其抑制绝经后小鼠动脉粥样硬化发生发展的机制之一。
崔新月[8]（2020）在《冠心病支架内再狭窄的危险因素分析及甘油三酯最佳临界值的确定》文中研究指明背景《中国心血管病报告2018》中指出我国目前患冠心病人数逐年增加且有年轻化趋势[1]。经皮冠状动脉介入术（percutaneous coronary intervention,PCI）为治疗冠心病常用的手段,降低了心血管疾病的死亡率。但是支架内再狭窄（in-stent restenosis,ISR）的发生使其临床应用受到一定的限制。研究发现影响ISR发生最重要的危险因素为血脂异常和糖尿病[2]。中国成人血脂异常防治指南中提出PCI术后患者低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C）水平应<1.8mmol/L[3]。但近几年研究发现,尽管PCI术后患者LDL-C达到目标水平,ISR发生率仍偏高。次级血脂异常,如甘油三酯（triglyceride,TG）的升高,在ISR发生中所起的作用越来越受到重视[4,5]。高甘油三酯血症是导致心血管疾病发生率增加的重要危险因素[6]。对于心血管疾病极高危人群,甘油三酯水平是否应该降至更低水平而非1.7mmol/L目前尚无定论。本研究中纳入LDL-C达标的PCI术后患者,采用绘制受试者工作特征（ROC）曲线分析其甘油三酯的最佳临界值。有研究[7]报道称糖尿病患者多伴有血脂代谢异常,同时糖尿病也是导致ISR发生率增加的独立危险因素。糖尿病合并冠心病患者ISR发生率为单纯冠心病患者的2～4倍[8]。那么对于冠心病合并糖尿病的PCI术后患者其血脂是否需要降至更低水平,进一步加强降脂治疗能否收获更多的心血管获益,这方面研究较少。本研究进一步探讨了糖尿病与非糖尿病患者之间血脂水平及再狭窄率的差异,明确冠心病合并糖尿病患者是否应加强降脂治疗。目的探讨LDL-C<1.8mmol/L的冠心病PCI术后患者甘油三酯的最佳临界值,同时比较糖尿病与非糖尿病患者之间血脂水平及再狭窄率的差异,明确冠心病合并糖尿病患者是否应加强降脂治疗。方法选取2012年6月至2018年12月入住郑州大学第一附属医院心血管内科的冠心病PCI术后患者,PCI术前查LDL-C水平均<1.8mmol/L,并排除了严重心衰、冠状动脉旁路搭桥术后、严重肝肾功能不全、恶性肿瘤、感染性疾病及自身免疫性疾病等,共纳入368例。对这些患者进行为期1年的随访,1年后复查冠脉血管造影,记录支架内再狭窄的程度。根据造影复查结果将纳入患者分为两组:ISR组（n=175,其中男121例,女54例,年龄为59.23±9.53岁）及非ISR组（n=193,其中男146例,女47例,年龄为58.38±9.80岁）。比较两组之间影响ISR发生的危险因素的差异并且明确甘油三酯最佳临界值。同时为了明确糖尿病与非糖尿病患者之间血脂水平及再狭窄率的差异,本研究进一步将纳入的患者按照是否患糖尿病分为两组:糖尿病组（n=109,其中男76例,女33例,年龄58.48±9.06岁）以及非糖尿病组（n=259,其中男193例,女66例,年龄为58.91±9.93 岁）。结果1.研究对象的一般资料比较:与非ISR组相比,ISR组有更多的高血压（107 vs.94,P=.017）、糖尿病（77 vs.32,P<0.001）患者,LDL-C（1.51±0.22 vs.1.41±0.25,P<0.001）及甘油三酯（1.47±0.79 vs.1.04±0.51,P<0.001）的水平均较高。且ISR组三支血管病变的患者偏多（132 vs.117,P=0.002）。其余指标两组之间并无差异。2.促进ISR发生的危险因素分析:分别使用单因素和多因素logistic回归分析结果显示,“性别、糖尿病、LDL-C、甘油三酯、支架数量”为ISR发生的独立危险因素,且这5个指标之间无相关性。3.血脂临界值选取:采用ROC曲线分析结果显示,针对心血管疾病极高危人群,LDL-C的合适临界值为1.4mmol/L,与2019年ESC/EAS血脂防治指南相符合。而甘油三酯的适合临界值为1.0mmol/L。其曲线下面积为0.713,灵敏度和特异度分别为72%和 66%。4.糖尿病与非糖尿病患者之间的比较:相比较于非糖尿病患者,糖尿病患者高血压（71 vs.130,P=0.009）患病率更高。同时,糖尿病患者的LDL-C（1.51±0.18 vs.1.43±0.26,P=0.003）及甘油三酯（1.45±0.75 vs.1.16±0.64,P<0.001）水平偏高,ISR 发生率增高（77 vs.98,P<0.001）。其余指标两组之间并无差异。结论1.对于心血管疾病极高危人群,甘油三酯水平应进一步降至1.0mmol/L以下,而非 1.7mmol/L。2.对于冠心病合并糖尿病的PCI术后患者应进一步加强降脂治疗。
丛丽[9]（2020）在《金雀异黄素调控NF-κB/miR-21抑制LPS诱导炎症细胞反应的机制研究》文中研究表明动脉粥样硬化是一个慢性炎症过程,炎症反应参与其发生发展。金雀异黄素（GEN）具有抗炎活性,但作用机制尚未完全阐释。课题组前期研究显示GEN抑制活化炎症细胞的转录因子NF-κB,下调miR-21和TLR4表达,生物信息学分析发现miR-21与TIPE2 CDS区存在特异性结合位点。据此我们推测:NF-κB/miR-21/TIPE2信号轴在炎症细胞反应中扮演重要角色,GEN通过抑制NF-κB,下调miR-21表达,进而活化TIPE2,阻断TLR4信号转导,最终发挥抗炎作用。为验证上述科学假说,本研究用脂多糖（LPS）刺激RAW264.7细胞和THP-1细胞构建炎症细胞反应模型,LPS诱导C57小鼠血管慢性炎症反应构建动物模型。RT-qPCR检测LPS对炎症细胞miR-21、miR-155、miR-125a表达的影响。利用慢病毒构建稳定过表达和敲降miR-21细胞系,NF-κB抑制剂PDTC和GEN单独或联合处理细胞后再用LPS刺激,RT-qPCR、Western Blot、IF分别检测TNF-α、IL-6、MCP-1、i NOS、COX-2、NF-κB p65、miR-21表达,分析miR-21、PDTC对GEN抗炎作用的影响。不同浓度GEN处理巨噬细胞,CCK8和乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒分别检测细胞活力及细胞外LDH含量,评价GEN对细胞活力的影响。RT-qPCR检测不同浓度或不同孵育时间的GEN对活化巨噬细胞miR-21表达的影响。构建miR-21宿主基因Vmp1启动子报告基因载体、NF-κB p65过表达载体并转染至巨噬细胞,双荧光素酶启动子活性报告基因实验分析NF-κB和GEN对Vmp1启动子活性的影响。利用慢病毒构建TIPE2稳定过表达和敲降细胞系,miR-21 mimic转染至细胞后再用GEN、LPS处理,RT-qPCR、Western Blot检测GEN对TIPE2、TLR4、MyD88、TRIF表达的影响及TIPE2对GEN生物学效应的影响,并分析miR-21对GEN调控TIPE2/TLR4的影响。双荧光素酶报告基因实验研究miR-21与TIPE2的靶向关系,并通过RT-qPCR和Western Blot进行验证。采用腹腔注射LPS联合胃灌注GEN、尾静脉注射miR-21拮抗剂,或腹腔注射LPS联合胃灌注GEN、皮下注射PDTC处理高脂饮食喂养的C57小鼠。分别通过RT-qPCR检测主动脉、外周血单个核细胞（PBMC）、腹腔巨噬细胞（PMΦ）的miR-21、iNOS、COX-2、NF-κB p65、TIPE2、TLR4、MyD88、TRIF表达,Western Blot、IHC、IF分析主动脉、脾脏、PMΦ炎症相关蛋白表达,HE染色观察脾脏形态学改变,生化分析仪检测血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇的含量并计算动脉硬化指数,探索GEN、miR-21和PDTC对小鼠血管慢性炎症反应的影响。结果显示,LPS能促进炎症相关因子表达,可用于构建炎症细胞反应模型,并上调炎症细胞miR-21表达。敲降miR-21后,活化炎症细胞的炎症相关因子表达水平明显降低,而过表达miR-21可恢复其表达。同时,过表达NF-κB p65能增强miR-21宿主基因Vmp1的启动子活性,而PDTC作用与之相反,且PDTC能显着下调活化炎症细胞miR-21及炎症相关因子表达,然而过表达miR-21处理又可有效减弱PDTC对miR-21和炎症细胞反应的抑制作用。此外,实验浓度范围内的GEN不影响巨噬细胞活力,并以剂量、时间依赖的方式下调miR-21,过表达miR-21可明显抵消GEN对炎症细胞反应的抑制作用。高脂饮食喂养联合腹腔注射LPS能诱导小鼠血管慢性炎症反应,miR-21拮抗剂可有效减缓血管慢性炎症反应,并与GEN协同抑制炎症相关因子表达,降低血脂水平。此外,PDTC可增强GEN对活化巨噬细胞及血管慢性炎症小鼠miR-21、炎症相关因子表达的抑制作用。GEN虽能有效降低miR-21宿主基因的启动子活性,但过表达NF-κB p65又可显着减弱这一效应。GEN可上调血管慢性炎症小鼠TIPE2表达,并抑制TLR4、MyD88和TRIF表达,这一结果在活化巨噬细胞中得到证实。此外,敲降TIPE2能逆转GEN对炎症细胞反应的抑制作用以及对TLR4信号通路的阻断功能,而过表达TIPE2作用与之相反。虽然miR-21mimic可拮抗GEN恢复TLR4信号转导,但过表达TIPE2处理后又能明显减弱miR-21 mimic的作用。miR-21 inhibitor可促进TIPE2表达,miR-21 mimic作用与之相反,并能显着降低野生组荧光素酶活性。综合上述研究结果,可得出以下结论;（1）LPS通过NF-κB增强mi R-21宿主基因启动子活性,促进miR-21转录表达,激活炎症细胞反应。（2）GEN下调NF-κB减少miR-21表达,进而活化TIPE2,通过My D88依赖型和TRIF依赖型途径抑制TLR4炎症信号转导,发挥抗炎活性。
赵健[10]（2020）在《不同品系Apoe-/-小鼠颈动脉结扎后内膜增生的比较及N-乙酰半胱氨酸（NAC）的干预研究》文中指出目的:脑卒中是我国成年人致残的重要原因,严重影响病患的劳动能力和生活质量。颈动脉动脉硬化是缺血性脑卒中的主要原因之一,颈动脉狭窄或闭塞的介入腔内治疗短期效果良好,但动脉成形术后再狭窄或闭塞仍是目前临床治疗面临的难题。动脉内膜增生是介入治疗后再狭窄的主要病理过程,前期的研究发现载脂蛋白E敲除的小鼠高脂饮食条件下结扎颈动脉可以在短期内出现颈动脉硬化病变,病变从由巨噬细胞源性泡沫细胞组成的脂肪条纹发展到包含平滑肌细胞的纤维斑块,再发展到含有新生血管的严重管腔狭窄,在增生的动脉内膜中我们可以观察到巨噬细胞、中性粒细胞浸润和中层迁移而来的血管平滑肌细胞（VSMC）,前期的研究发现局部的炎症反应和氧化应激是影响血管平滑肌细胞迁移和增殖的影响因素。C3H/HeJ（C3H）和C57BL6（B6）载脂蛋白E敲除小鼠在动脉硬化遗传易感性存在较大差异,分析这两种品系小鼠动脉内膜增生病变成分的差异有助于分析二者动脉硬化遗传易感性差异的机制。本研究首先通过比较上述两种品系小鼠高脂饮食下动脉内膜增生病变的成分差异,分析出可能影响早期动脉内膜增生的因素。然后通过干预病变巨噬细胞、中性粒细胞浸润和干预病变局部的氧化应激水平,观察其对动脉硬化易感的B6载脂蛋白E敲除小鼠动脉内膜增生病变的影响,分析可能的主要影响因素。最后通过细胞实验,明确N-乙酰半胱氨酸（NAC）能否调节ox-LDL刺激后血管平滑肌细胞的氧化应激水平,与血管平滑肌细胞的增殖和迁移的关系,及其对血管平滑肌细胞炎性因子的分泌影响。研究方法:1、在动物实验中,A组两种性别的B6-Apoe-/-和C3H-Apoe-/-小鼠在6周龄时开始高脂饮食,并持续12周,获取双侧颈动脉标本。B组选用4-8周龄的两种性别的B6-Apoe-/-和C3H-Apoe-/-小鼠,进行左侧颈动脉动脉结扎手术,术前1周开始喂饲高脂饮食,术后继续给予高脂饮食,结扎术后1天、3天、1周、2周、4周安乐死小鼠,获得双侧颈动脉标本;ELISA法检测分析空腹血脂水平,组织病理学测量比较动脉内膜增生面积、动脉中层面积等形态学指标。免疫组织化学方法分析病变的细胞成分。干预实验中,C组选用8周龄的两种性别的Mep1α-/-/Apoe-/-小鼠进行左侧颈动脉动脉结扎手术,术前1周及术后持续给予高脂饮食,颈动脉结扎术前1天开始每隔一天腹腔注射抗Ly6G抗体250微克/只治疗,持续4周,对照组腹腔注射生理盐水。术后4周安乐死小鼠,获取心脏及双侧颈动脉;D组选用5-12周龄的两种性别的B6-Apoe-/-小鼠进行左侧颈动脉动脉结扎手术,术前1周及术后给予高脂饮食,颈动脉结扎术前1天开始每隔2天腹腔注射抗CSF-1R抗体（AFS98）200微克/只治疗,持续2周,对照组注射生理盐水。术后2周安乐死小鼠,获取肝脏及双侧颈动脉组织;E组选用8周龄的两种性别的B6-Apoe-/-小鼠进行左侧颈动脉动脉结扎手术,术前1周及术后给予高脂饮食,术前1周开始N-乙酰半胱氨酸（NAC）按照1.5g/每公斤体重/每天和20g小鼠每日饮水约4-6ml计算,将NAC混于小鼠的饮用水中,术后继续口服混有NAC的饮用水,持续4周。对照组口服正常饮用水,术后4周安乐死小鼠,获取双侧颈动脉。病理学检查比较动脉内膜增生面积。免疫组织化学分析颈动脉内膜病变、主动脉根部病变及肝脏组织的特定细胞成分。ELISA法检测动物血浆炎性因子分泌水平。2、细胞实验使用人血管平滑肌细胞系,以50μg/ml的ox-LDL刺激血管平滑肌细胞,MTT法检测血管平滑肌细胞的增殖能力,划痕试验检测血管平滑肌细胞的迁移能力,流式细胞学方法测量血管平滑肌ROS水平。ELISA法检测细胞培养液中单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-10（IL-10）和分光光度法检测一氧化氮NO的水平。结果:1、在喂饲高脂饮食12周后,B6-Apoe-/-和C3H-Apoe-/-小鼠均出现了严重的高脂血症,C3H-Apoe-/-小鼠与B6-Apoe-/-小鼠相比,具有更高的血浆血脂水平。在未干扰颈动脉血流的情况下,高脂饮食12周后,B6-Apoe-/-小鼠出现进展期动脉粥样硬化病变,而C3H-Apoe-/-小鼠没有病变。而在结扎颈动脉后,在1周、2周、4周三个时间点,B6-Apoe-/-小鼠结扎侧动脉比C3H-Apoe-/-小鼠出现更大的动脉内膜病变。组织学上,C3H-Apoe-/-小鼠2周时出现脂纹,C3H-Apoe-/-小鼠4周时和B6-Apoe-/-小鼠2周时出现中等大小的纤维性病变。B6-Apoe-/-小鼠4周时出现进展期的动脉内膜病变,出现新生血管及严重管腔狭窄。两个品系小鼠的颈动脉均可观察到早期中性粒细胞粘附于内皮细胞及内膜病变中的中性粒细胞浸润。B6-Apoe-/-小鼠动脉最早在1周时出现内膜病变巨噬细胞浸润,两个品系小鼠在2周和4周时的动脉内膜病变中出现明显的巨噬细胞浸润。在C3H-Apoe-/-小鼠的病变中观察到CD4+T细胞,但在B6-Apoe-/-小鼠的病变中没有观察到。两个品系小鼠的动脉硬化内膜病变出现血管平滑细胞染色,动脉中层α-平滑肌肌动蛋白的免疫反应性均下降。抗Ly6G抗体治疗组与对照组相比,病变中性粒细胞浸润明显减少,但内膜增生病变大小相当。抗CSF-1R抗体治疗后小鼠巨噬细胞清除结果不稳定,治疗组与对照组内膜增生病变大小相当。抗氧化剂NAC治疗后颈动脉内膜增生小于对照组,MCP-1表达受到抑制,治疗组小鼠血浆MCP-1、TNF-α分泌水平减低,而IL-10分泌增加。2、以50μg/ml浓度的ox-LDL刺激血管平滑肌细胞后,测量发现每孔8000个细胞组血管平滑肌细胞在刺激后能平稳的增殖。NAC在1mM和2m M浓度能明显抑制血管平滑肌细胞增殖。划痕试验中2mM NAC治疗组24h和48h血管平滑肌细胞迁移面积小于对照组。流式细胞学实验发现1mM NAC及2mM NAC干预可以抑制血管平滑肌细胞的氧自由基ROS水平。ELISA检测细胞培养液中的MCP-1、TNF-α、IL-10,发现NAC可以抑制由ox-LDL诱导血管平滑肌细胞分泌的MCP-1、TNF-α（P<0.05）,促进血管平滑肌细胞分泌IL-10（P<0.05）;分光光度法检测发现NAC促进血管平滑肌细胞分泌NO（P<0.05）。结论:1、遗传背景、动脉血流对高脂血症Apoe-/-小鼠颈动脉粥样硬化形成具有显着影响。中性粒细胞对B6-Apoe-/-小鼠颈动脉结扎后动脉内膜增生不起主要作用。NAC治疗抑制B6-Apoe-/-小鼠颈动脉结扎后动脉内膜增生,部分因为NAC治疗可调节小鼠血浆MCP-1、TNF-α、IL-10水平。2、NAC通过抑制ROS进而抑制了血管平滑肌细胞（VSMC）的增殖和迁移。NAC通过抑制VSMC MCP-1和TNF-α分泌而抑制VSMC的增殖和迁移,NAC促进VSMC IL-10和NO的分泌。抗氧化剂NAC有望成为预防动脉硬化闭塞和介入治疗后再狭窄的有效药物。
二、雌激素对氧化低密度脂蛋白诱导单核细胞趋化因子受体CXCR2的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、雌激素对氧化低密度脂蛋白诱导单核细胞趋化因子受体CXCR2的影响（论文提纲范文）
（1）温阳益心法对动脉粥样硬化miRNA调控作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 表1 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 综述一miRNA与动脉粥样硬化 |
| 参考文献 |
| 综述二冠心病诊疗与温阳益心法研究 |
| 参考文献 |
| 第一部分 miRNA基因测序及表达量验证 |
| 一、材料与方法 |
| 1.模型建立与取材 |
| 2.基因芯片测序与PCR定量验证 |
| 二、实验结果 |
| 1.一般情况 |
| 2.血脂情况 |
| 3.HE染色 |
| 4.miRNA及mRNA高通量测序及富集分析 |
| 5.核心miRNA的QT-PCR验证 |
| 三、小结 |
| 第二部分 温阳益心法治疗动脉粥样硬化的网络药理学研究 |
| 一、实验方法 |
| 1.方药成分化合物与网络构建 |
| 2.疾病靶点网络构建 |
| 3.韦恩图与蛋白互作网络(PPI)构建 |
| 4.GO与KEGG通路富集分析 |
| 二、实验结果 |
| 1.温心方有效成分筛选 |
| 2.药物化合物—靶点网络构建 |
| 3.药物与疾病的靶点韦恩图 |
| 4.药物与疾病PPI网络构建 |
| 5.GO及KEGG富集分析 |
| 三、小结 |
| 第三部分 PI3K-AKT通路关键蛋白验证 |
| 一、材料与方法 |
| 1.实验模型与取材 |
| 2.蛋白印记实验(Western Blot) |
| 二、实验结果 |
| 三、小结 |
| 讨论 |
| 1.温心方中关键化合物的作用机制 |
| 2.作用靶点与通路 |
| 3.PI3K-AKT通路中靶蛋白研究 |
| 4.PI3K-Akt通路与动脉粥样硬化 |
| 5.温阳益心法对PI3K-AKT通路的调控作用 |
| 6.问题与展望 |
| 结论 |
| 主要创新点 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 致谢 |
（2）Wnt1/β-catenin通路在瘦素介导的慢性肾脏病内皮功能障碍中的作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 第一部分 CKD患者血清瘦素水平与ED的关系 |
| 背景介绍 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 瘦素促进ED的分子机制研究 |
| 背景介绍 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 本研究的创新性与不足 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 慢性肾脏病内皮功能障碍的研宄现状：从基础到临床 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的文章 |
| 外文论文 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（3）IL-37通过Notch1和NF-κB途径抑制M1巨噬细胞极化而延缓主动脉瓣钙化（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 白细胞介素37通过Notch1和核因子κB途径抑制M1巨噬细胞极化 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.2 材料与方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 结论 |
| 第二部分 心脏手术患者术后白介素37水平及围术期各因素相关性分析 |
| 2.1 研究背景 |
| 2.2 资料与方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 参考文献 |
| 中英文缩略词对照表 |
| 攻读学位期间成果 |
| 致谢 |
（4）巨噬细胞迁移抑制因子对脑缺血再灌注大鼠神经损伤的作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 主要英文缩略词表 |
| 一、引言 |
| 二、材料与方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 试剂与仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 动物建模及分组 |
| 2.2 Garcia评分 |
| 2.3 平衡木实验 |
| 2.4 2,3,5-三苯四唑氯化(TTC)染色 |
| 2.5 心脏灌注 |
| 2.6 制备石蜡切片 |
| 2.7 Nissl染色 |
| 2.8 TUNEL染色+NeuN免疫荧光 |
| 2.9 免疫组化 |
| 2.10 免疫荧光染色 |
| 2.11 蛋白提取 |
| 2.12 BCA法检测总蛋白浓度 |
| 2.13 蛋白印迹 |
| 2.14 统计学分析 |
| 三、结果 |
| 1 I/R大鼠梗死周边区MIF表达明显增加 |
| 2 MIF主要位于神经元细胞中 |
| 3 MIF抑制剂ISO-1减少梗死体积及神经功能损 |
| 4 MIF抑制剂ISO-1减少神经元凋亡 |
| 5 MIF抑制剂ISO-1能够抑制星形胶质细胞活化 |
| 6 MIF抑制剂ISO-1能够促进糖代谢相关蛋白表达 |
| 四、讨论 |
| 五、结论 |
| 六、参考文献 |
| 综述 巨噬细胞迁移抑制因子在动脉粥样硬化及急性缺血性疾病中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（5）冠脉慢血流微循环障碍的机制和干预研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 冠脉慢血流患者外周血细胞测序分析 |
| 一、引言 |
| 二、材料和方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 第二部分 脂肪乳输注诱导小鼠冠脉微循环功能障碍 |
| 一、引言 |
| 二、材料和方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 第三部分 脂肪乳输注诱导冠脉微循环障碍的机制 |
| 一、引言 |
| 二、材料和方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 冠脉微循环障碍:非阻塞性冠心病潜在发病机制 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间的科研成果 |
| 致谢 |
（6）小鼠胸腺和脾脏增龄性变化的转录组和蛋白组学研究（论文提纲范文）
| 英汉缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 不同年龄组小鼠免疫器官组织学变化研究 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 主要试剂及耗材 |
| 1.1.3 主要仪器及器材 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 样本采集 |
| 1.2.2 石蜡切片制备与HE染色 |
| 1.2.3 免疫组化 |
| 1.2.4 电镜检测 |
| 1.2.5 ELISA检测 |
| 1.2.6 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 免疫器官重量及指数变化 |
| 2.2 免疫器官组织学变化 |
| 2.2.1 胸腺 |
| 2.2.1.1 HE染色 |
| 2.2.1.2 免疫组化 |
| 2.2.1.3 超微结构观察 |
| 2.2.2 脾脏 |
| 2.2.2.1 HE染色 |
| 2.2.2.2 免疫组化 |
| 2.2.2.3 超微结构观察 |
| 2.3 细胞因子检测 |
| 3 讨论 |
| 第二部分 基于RNA-seq转录组和 TMT 蛋白组技术研究不同年龄组小鼠胸腺组织差异表达 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验样本 |
| 1.1.2 主要试剂及耗材 |
| 1.1.3 主要仪器及器材 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 转录组测序 |
| 1.2.2 TMT蛋白质组学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 胸腺转录组分析 |
| 2.1.1 转录测序数据分析 |
| 2.1.2 基因表达分析 |
| 2.1.3 生物信息学分析 |
| 2.1.4 差异表达基因验证 |
| 2.2 胸腺蛋白质组分析 |
| 2.2.1 差异表达蛋白筛选 |
| 2.2.2 生物信息学分析 |
| 2.3 差异表达蛋白验证 |
| 2.4 转录组学与蛋白质组学关联性分析 |
| 3.讨论 |
| 第三部分 基于RNA-seq转录组和 TMT 蛋白组技术研究不同年龄组小鼠脾脏组织差异表达 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验样本 |
| 1.1.2 主要试剂及耗材 |
| 1.1.3 主要仪器及器材 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 转录组测序 |
| 1.2.2 TMT蛋白质组学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 不同年龄组脾脏转录组分析 |
| 2.1.1 转录测序数据及质量 |
| 2.1.2 基因表达分析 |
| 2.1.3 生物信息学分析 |
| 2.1.4 差异表达基因验证 |
| 2.2 脾脏蛋白质组分析 |
| 2.2.1 差异表达蛋白筛选 |
| 2.2.2 物信息学分析 |
| 2.3 验证差异表达蛋白 |
| 3 讨论 |
| 全文总结 |
| 文献综述 胸腺增龄性变化以及与疾病相关性的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 博士期间学术成果 |
| 附录 |
（7）泽泻醇B乙酸酯通过调节肠道菌群和肠道雌激素受体抗绝经后动脉粥样硬化的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 一、女性绝经后动脉粥样硬化的预防与治疗是全球范围内亟待解决的问题 |
| 二、绝经后及动脉粥样硬化时肠道菌群发生显着变化,调节肠道菌群可能是防治女性绝经后动脉粥样硬化的有效途径 |
| 三、肠道炎症导致肠屏障的破坏并加速动脉粥样硬化的发展 |
| 四、雌激素受体信号的降低促进肠屏障中肠道上皮细胞间紧密连接的损伤 |
| 五、泽泻醇B乙酸酯可能通过调节肠道雌激素受体和肠道菌群增强肠屏障发挥抗绝经后动脉粥样硬化的作用 |
| 六、研究的目的与意义及科学假说的提出 |
| 第一章 绝经后和非绝经期女性主动脉血管病变、血管内雌激素受体信号及肠道菌群异同的比较分析 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 临床样本的采集 |
| 1.1.2 试剂与耗材 |
| 1.1.3 仪器 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 人类女性肠道菌群的检测 |
| 1.2.2 人类女性主动脉血管HE染色 |
| 1.2.3 人类女性主动脉血管透射电镜的检测 |
| 1.2.4 人类女性主动脉血管免疫化学染色 |
| 1.2.5 统计分析 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.3.1 绝经后女性主动脉血管呈现高度的损伤与炎症 |
| 1.3.2 绝经后女性主动脉血管中激素受体和SRC的表达以及PI3K/AKT信号显着降低 |
| 1.3.3 非绝经期女性及绝经后女性肠道菌群组成异同的分析 |
| 1.3.4 绝经前后女性主动脉炎症、雌激素受体表达及肠道菌群组成的相关性分析 |
| 1.4 讨论 |
| 第二章 泽泻醇B乙酸酯通过调节肠道菌群抑制肠道炎症保护肠屏障抗绝经后动脉粥样硬化 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 药物、试剂与耗材 |
| 2.1.3 仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 绝经后动脉粥样硬化小鼠模型的复制、分组及给药 |
| 2.2.2 小鼠一般情况观察 |
| 2.2.3 小鼠血脂水平的检测 |
| 2.2.4 小鼠血清炎症因子水平的检测 |
| 2.2.5 小鼠主动脉油红O染色 |
| 2.2.6 小鼠主动脉根部切片的油红O染色、Masson染色及免疫组织化学染色 |
| 2.2.7 小鼠结肠组织的HE染色、免疫组织化学染色及免疫组织荧光染色 |
| 2.2.8 小鼠结肠组织蛋白印迹检测 |
| 2.2.9 小鼠肠道菌群的检测 |
| 2.2.10 统计分析 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 AB23A改善绝经后动脉粥样硬化小鼠的血脂紊乱、炎症及血管损伤 |
| 2.3.2 AB23A减轻绝经后动脉粥样硬化小鼠的肠道炎症并改善肠道紧密连接 |
| 2.3.3 AB23A调节绝经后动脉粥样硬化小鼠肠道菌群结构 |
| 2.3.4 小鼠动脉粥样硬化相关症状、肠道菌群变化及紧密连接呈现显着相关性 |
| 2.3.5 粪菌移植改变绝经后动脉粥样硬化小鼠的肠道菌群结构 |
| 2.3.6 调节菌群结构减轻绝经后动脉粥样硬化小鼠血脂紊乱、炎症及血管损伤 |
| 2.3.7 调节菌群结构减轻绝经后动脉粥样硬化小鼠肠道炎症并改善肠道紧密连接 |
| 2.3.8 抗生素抑制小鼠肠道菌群但未取消AB23A对绝经后动脉粥样硬化小鼠肠道菌群组成的调节作用 |
| 2.3.9 抗生素减轻绝经后动脉粥样硬化小鼠的损伤,增强AB23A对绝经后动脉粥样硬化小鼠的治疗作用 |
| 2.3.10 抗生素增强AB23A对绝经后动脉粥样硬化小鼠肠道炎症的抑制作用及对肠屏障的保护作用 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 泽泻醇B乙酸酯激活结肠上皮GPER/SRC及PI3K/AKT信号保护肠屏障抗绝经后动脉粥样硬化 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 细胞系 |
| 3.1.3 药物与试剂 |
| 3.1.4 仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 绝经后动脉粥样硬化小鼠模型的复制、分组及给药 |
| 3.2.2 小鼠血清雌激素水平的检测 |
| 3.2.3 小鼠结肠组织免疫组织化学染色及免疫组织荧光染色 |
| 3.2.4 小鼠结肠组织蛋白印迹检测 |
| 3.2.5 Caco-2细胞的培养 |
| 3.2.6 Caco-2细胞的分组及干预方式 |
| 3.2.7 MTT检测Caco-2细胞活性 |
| 3.2.8 Caco-2细胞油红O染色 |
| 3.2.9 Caco-2细胞免疫荧光染色 |
| 3.2.10 Caco-2细胞蛋白印迹检测 |
| 3.2.11 Caco-2细胞免疫沉淀检测 |
| 3.2.12 统计分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 AB23A调节绝经后动脉粥样硬化小鼠肠道中ERs/SRC及PI3 K/AKT信号 |
| 3.3.2 AB23A在胆固醇作用的Caco-2细胞模型中减少胆固醇堆积、减轻炎症并保护紧密连接 |
| 3.3.3 AB23A促进胆固醇作用的Caco-2细胞模型中SRC的表达和P13K/AKT信号 |
| 3.3.4 GPER的阻断减轻AB23A对胆固醇作用的Caco-2细胞模型的保护作用 |
| 3.3.5 SRC是AB23A通过GPER发挥肠道保护及脂质调节作用的关键因子 |
| 3.3.6 AB23A通过上调GPER激活SRC发挥对胆固醇作用的Caco-2细胞模型的保护作用 |
| 3.3.7 AB23A发挥肠道保护及脂质调节作用需要PI3K/AKT信号的激活 |
| 3.4 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 论文正文缩略词中英文对照表 |
| 综述: 女性绝经后动脉粥样硬化发展与雌激素、雌激素受体和肠道菌群关系的研究现状 |
| 一、雌激素及雌激素受体与绝经后动脉粥样硬化 |
| 二、肠道菌群与绝经后动脉粥样硬化 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 |
| 读博期间参与科研课题及其他工作情况 |
| 读博期间发表论文 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（8）冠心病支架内再狭窄的危险因素分析及甘油三酯最佳临界值的确定（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词 |
| 前言 |
| 1 对象与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 冠心病支架内再狭窄的研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简历及在学期间发表的学术论文与研究成果 |
| 致谢 |
（9）金雀异黄素调控NF-κB/miR-21抑制LPS诱导炎症细胞反应的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 引言与文献综述 |
| 1.1 炎症细胞反应与动脉粥样硬化 |
| 1.2 金雀异黄素的结构特征与生物学活性 |
| 1.3 金雀异黄素的抗炎作用及分子机制 |
| 1.4 炎症细胞反应的表观遗传调控 |
| 1.5 miRNA与炎症细胞反应 |
| 1.6 雌激素调控miR-21影响炎症细胞反应 |
| 1.7 免疫负调控因子TIPE2 |
| 1.8 炎症信号受体TLR4 |
| 1.9 立题依据和意义 |
| 第二章 NF-κB/miR-21 调控LPS诱导的炎症细胞反应 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 材料 |
| 2.2.2 方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 构建LPS诱导的炎症细胞反应模型 |
| 2.3.2 LPS上调炎症细胞miR-21 表达 |
| 2.3.3 miR-21促进炎症细胞反应 |
| 2.3.4 活化炎症细胞miR-21 表达依赖于转录因子NF-κB |
| 2.3.5 NF-κB/miR-21 调控炎症细胞反应 |
| 2.3.6 LPS依赖NF-κB增强miR-21 宿主基因启动子活性 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 金雀异黄素调控NF-κB/miR-21 抑制炎症细胞反应 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 材料 |
| 3.2.2 方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 GEN对巨噬细胞活力的影响 |
| 3.3.2 GEN以剂量、时间依赖的方式抑制活化巨噬细胞miR-21表达 |
| 3.3.3 GEN抑制miR-21 表达发挥抗炎作用 |
| 3.3.4 GEN对炎症细胞反应的抑制作用依赖于NF-κB |
| 3.3.5 GEN抑制NF-κB,下调miR-21 表达 |
| 3.3.6 GEN对活化巨噬细胞miR-21 宿主基因启动子活性的抑制作用依赖于NF-κB |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 金雀异黄素调控miR-21/TIPE2/TLR4 抑制炎症细胞反应的分子机制 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 材料 |
| 4.2.2 方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 GEN促进免疫负调控因子TIPE2 表达 |
| 4.3.2 GEN通过调控TIPE2 发挥抗炎作用 |
| 4.3.3 GEN抑制炎症信号受体TLR4 介导的信号转导 |
| 4.3.4 GEN上调TIPE2,抑制TLR4 信号通路 |
| 4.3.5 GEN通过抑制miR-21 调控TIPE2/TLR4 信号通路 |
| 4.3.6 TIPE2是miR-21 的直接靶标 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 研究结论与展望 |
| 参考文献 |
| 缩略词表(中英文对照) |
| 攻读博士学位期间撰写和发表的论文 |
| 致谢 |
（10）不同品系Apoe-/-小鼠颈动脉结扎后内膜增生的比较及N-乙酰半胱氨酸（NAC）的干预研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分:C57BL/6-Apoe~(-/-)与C3H-Apoe~(-/-)小鼠颈动脉结扎后动脉内膜增生的差异分析及针对炎症细胞、氧化应激的干预研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 研究对象 |
| 2.1.2 主要仪器和试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 动物分组 |
| 2.2.2 小鼠颈动脉结扎动脉硬化模型的建立 |
| 2.2.3 小鼠颈动脉获取及形态学测量 |
| 2.2.4 H&E染色 |
| 2.2.5 油红O染色 |
| 2.2.6 免疫组织化学分析 |
| 2.2.7 ELISA检测血脂 |
| 2.2.8 血中性粒细胞和T淋巴细胞的流式细胞学分析 |
| 2.2.9 ELISA法检测炎症介质 |
| 2.2.10 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 B6-Apoe~(-/-)小鼠与C3H-Apoe~(-/-)小鼠的空腹血脂水平 |
| 3.2 在不干扰颈动脉血流的情况下B6-Apoe~(-/-)小鼠与C3H-Apoe~(-/-)小鼠的颈动脉动脉硬化 |
| 3.3 B6-Apoe~(-/-)小鼠与C3H-Apoe~(-/-)小鼠颈动脉结扎后的颈动脉硬化 |
| 3.4 B6-Apoe~(-/-)小鼠与C3H-Apoe~(-/-)小鼠内膜病变的细胞学分析 |
| 3.5 外周血中性粒细胞和T淋巴细胞的流式细胞学分析 |
| 3.6 抗中性粒细胞抗体干预实验 |
| 3.6.1 抗Ly6G抗体治疗后动脉内膜增生病变形态学测量 |
| 3.6.2 抗Ly6G抗体治疗后内膜增生病变的细胞学分析 |
| 3.7 干扰巨噬细胞分化抗体干预实验 |
| 3.7.1 抗CSF-1R抗体治疗实验动脉内膜增生病变形态学测量 |
| 3.7.2 抗CSF-1R抗体治疗实验动脉内膜增生病变的细胞学分析 |
| 3.8 抗氧化剂NAC治疗实验结果 |
| 3.8.1 NAC治疗实验动脉内膜增生病变形态学测量 |
| 3.8.2 NAC治疗后内膜病变的免疫组织化学分析 |
| 3.8.3 NAC治疗后小鼠血浆炎性因子测定 |
| 4 讨论 |
| 4.1 遗传背景、血流对两个品系Apoe~(-/-)小鼠颈动脉硬化的影响 |
| 4.2 血脂与脂质沉积对两个品系Apoe~(-/-)小鼠颈动脉硬化的影响 |
| 4.3 炎症细胞对颈动脉结扎后颈动脉内膜增生的影响 |
| 4.4 血管平滑肌细胞参与颈动脉结扎后动脉内膜病变形成 |
| 4.5 氧化应激与颈动脉内膜增生 |
| 4.6 血浆炎性细胞因子与颈动脉内膜增生 |
| 5 结论 |
| 第二部分:N-乙酰半胱氨酸(NAC)通过调节氧化应激及炎症反应抑制血管平滑肌细胞的增殖和迁移 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 研究对象 |
| 2.1.2 主要仪器和试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 ox-LDL刺激血管平滑肌细胞 |
| 2.2.2 MTT法检测血管平滑肌细胞的增殖能力 |
| 2.2.3 划痕试验检测血管平滑肌细胞的迁移能力 |
| 2.2.4 流式细胞学方法测量血管平滑肌ROS水平 |
| 2.2.5 ELISA法检测细胞上清液中的MCP-1、TNF-α及 IL-10 的含量 |
| 2.2.6 分光光度法检测血管平滑肌细胞培养液中的一氧化氮(NO)的含量 |
| 2.2.7 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 NAC对血管平滑肌细胞增殖的影响 |
| 3.2 NAC对血管平滑肌细胞迁移能力的影响 |
| 3.3 NAC对血管平滑肌细胞氧化应激的影响 |
| 3.4 NAC对血管平滑肌细胞分泌的炎性因子(MCP-1、TNF-α、IL-10)的影响 |
| 3.5 NAC对血管平滑肌细胞分泌一氧化氮(NO)的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
四、雌激素对氧化低密度脂蛋白诱导单核细胞趋化因子受体CXCR2的影响（论文参考文献）
- [1]温阳益心法对动脉粥样硬化miRNA调控作用及机制研究[D]. 王兆博. 黑龙江中医药大学, 2021(01)
- [2]Wnt1/β-catenin通路在瘦素介导的慢性肾脏病内皮功能障碍中的作用机制研究[D]. 刘冰. 山东大学, 2021(10)
- [3]IL-37通过Notch1和NF-κB途径抑制M1巨噬细胞极化而延缓主动脉瓣钙化[D]. 李倩琴. 南方医科大学, 2021(02)
- [4]巨噬细胞迁移抑制因子对脑缺血再灌注大鼠神经损伤的作用[D]. 张瑞平. 湖北医药学院, 2021(01)
- [5]冠脉慢血流微循环障碍的机制和干预研究[D]. 张艳达. 中国人民解放军海军军医大学, 2021(01)
- [6]小鼠胸腺和脾脏增龄性变化的转录组和蛋白组学研究[D]. 张丽. 重庆医科大学, 2021(01)
- [7]泽泻醇B乙酸酯通过调节肠道菌群和肠道雌激素受体抗绝经后动脉粥样硬化的机制研究[D]. 孟庆海. 南京中医药大学, 2021(01)
- [8]冠心病支架内再狭窄的危险因素分析及甘油三酯最佳临界值的确定[D]. 崔新月. 郑州大学, 2020(02)
- [9]金雀异黄素调控NF-κB/miR-21抑制LPS诱导炎症细胞反应的机制研究[D]. 丛丽. 湖南师范大学, 2020(01)
- [10]不同品系Apoe-/-小鼠颈动脉结扎后内膜增生的比较及N-乙酰半胱氨酸（NAC）的干预研究[D]. 赵健. 中国医科大学, 2020(01)
标签：雌激素受体论文; 基因合成论文; 单核细胞论文; 动脉粥样硬化指数论文; 巨噬细胞论文;