一、睾丸绒毛膜促性腺激素受体的研究及其意义（论文文献综述）
段梦婷[1]（2021）在《探讨男性儿童Kallmann综合征的早期诊断》文中研究说明目的:探讨男性儿童Kallmann Syndrome（KS）的早期诊断,寻求一个更简单、经济、有效的检测指标用于早期识别KS患者。方法:2013年1月至2020年12月就诊于武汉儿童医院内分泌科和儿童保健科,将有阴茎和睾丸发育不良的男性患儿纳入研究对象。将确诊KS的患者纳入KS组。未予特殊干预,经随访后性发育正常的患者纳入对照组。比较两组促黄体生成素（LH）及促卵泡生成素（FSH）基础值、促性腺激素释放激素（Gn RH）激发后促性腺激素的峰值、人绒毛膜促性腺激素（HCG）激发实验前后睾酮水平、抗苗勒管激素（AMH）、抑制素B水平的差异,绘制ROC曲线,得出约登指数最大时对应的诊断的切割点,评价上述检测指标作为早期诊断KS的诊断价值。结果:1.KS组纳入5人,对照组有23人。FSH基础值、Gn RH激发实验中LH及FSH峰值、抑制素B、HCG激发实验后的睾酮的均值水平,KS组显着低于对照组。AMH、LH基础值、HCG激发实验前睾酮的均值在两组间无显着差异。2.当FSH基础值≤1.82m IU/ml时,筛选出KS的敏感性及特异性分别是100%及65.2%,AUC为0.870。当FSH峰值≤2.985m IU/ml时,筛选出KS的敏感性及特异性分别是60%及100%,AUC为0.843。当LH基础值≤0.27m IU/ml时,筛选出KS的敏感性及特异性分别是100%和52.2%,AUC=0.748。当LH峰值≤4.87m IU/ml时,筛选出KS的敏感性及特异性分别是100%和69.6%,AUC=0.861。当抑制素B≤52.56pg/ml时,筛选出KS的敏感性及特异性分别是100%及65%,AUC=0.850。当HCG激发前睾酮≤0.215ng/ml时,筛选出KS的敏感性及特异性分别是80%和86.7%,AUC=0.807。当HCG激发后睾酮≤0.975ng/ml时,筛选出KS的敏感性及特异性分别是80%及86.7%,AUC=0.887。3.若同时满足FSH0min≤1.82m IU/ml且抑制素B≤52.56pg/ml时,敏感性为100%,特异性提高至87.0%。结论:单独的FSH及LH的基础值和峰值、抑制素B和HCG激发后的睾酮对区分KS均有诊断价值,但存在诊断的敏感性或特异性不足,多个指标联合诊断可提高单个指标诊断的敏感及特异性。对于处于青春发育年龄早期的患者联合检测FSH基础值及抑制素B水平可作为一种相对经济的筛查手段。
奚婷[2]（2021）在《培元补肾安胎方治疗RSA的临床研究及基于内膜衰老的药物机制研究》文中认为目的1 探究培元补肾安胎方治疗黄体功能不足（LPD）型复发性流产（RSA）的临床疗效和安全性。2 通过网络药理学和分子对接学探讨培元补肾安胎方治疗RSA的作用机制。3 探究孕酮诱导“种植窗期”子宫内膜急性衰老对胚胎着床的影响。4 以“种植窗期”子宫内膜急性衰老为切入点,探究培元补肾安胎方治疗RSA的分子机制,并对上述网络药理学预测机制进行验证。方法1 采用临床随机对照研究方法,收集脾肾两虚型LPD型RSA患者60例,随机分为两组:治疗组30例和对照组30例。治疗组予培元补肾安胎方和西药地屈孕酮片治疗,对照组予西药地屈孕酮片治疗。观察对比两组患者的一般情况、孕12周妊娠结局、治疗前后中医证候积分、血清E2、P和β-HCG、盆腔B超,及治疗前后肝肾功、血常规等安全性指标。2 采用网络药理学方法对培元补肾安胎方治疗RSA的作用机制进行分析,并运用分子对接学对结果进行初步验证,具体方法如下:通过检索TCM、TCMSP数据库得到培元补肾安胎方的化合物;通过TCMSP、Pubchem、CHEMBL得到化合物对应的靶点;利用Genecards和OMIM数据库收集RSA相关基因;利用R语言得到培元补肾安胎方治疗RSA的潜在靶点;string数据库构建PPI网络图;应用clusterProfiler包对共同靶点完成GO和KEGG富集分析;最后采用MOE软件分子对接评估培元补肾安胎方重要活性成分与关键靶点的结合活性。3 采用体内和体外实验相结合方法,体内实验:将ICR雌鼠随机分为PD0-PD9组、除衰组、对照组①、米非司酮（RU486）组、对照组②。PD0-PD9组分别于PD0-9天下午取材,除衰组、对照组①、RU486组、对照组②分别于PD5和PD9下午取材,观察对比胚胎着床数目,应用SA-β-gal染色、IHC、WB检测子宫内膜组织衰老标志物（SA-β-gal活性、P16蛋白）的表达。体外实验:不同浓度、时间点的甲羟孕酮（MPA）对2BS细胞进行干预,应用WB检测各组2BS衰老标志蛋白P53、P21、P16表达量,SA-β-gal染色检测2BS SA-β-al活性,光学显微镜观察2BS形态的改变,EdU检测2BS增殖功能,RT-PCR检测2BS SASP、PRL mRNA表达量。收集MPA诱导2BS的衰老上清液与HTR-8/SVneo共培养,应用CCK8、EdU、划痕及Transwell实验分别检测HTR-8/SVneo的增殖、迁移和侵袭功能。4采用Clark经典复发性流产模型鼠造模方法造模,将CBA/J雌鼠随机分为12组。正常组B、模型组B、西药组B、中药低剂量组B、中药中剂量组B、中药高剂量组B在PD14取材计算胚胎丢失率;正常组A、模型组A、西药组A、中药低剂量组A、中药中剂量组A、中药高剂量组A在PD5下午取材,应用HE染色观察小鼠卵巢黄体面积,Elisa检测血清P水平,SA-β-gal染色检测内膜的SA-β-gal活性,WB和RT-PCR检测子宫内膜P16、P53、P21蛋白和mRNA表达,IHC检测子宫P16蛋白定位分布及表达。结果1培元补肾安胎方对LPD型RSA临床疗效1.1保胎结局:治疗组保胎成功率93.33%高于对照组70%（p<0.05）。1.2中医证候疗效:治疗组总有效率96.67%高于对照组60.00%（p<0.01）。1.3中医证候积分:治疗后两组患者脾肾两虚型中医证候总积分均明显低于治疗前（p<0.01）。治疗组改善LPD型RSA患者脾肾两虚型证候优于对照组（p<0.05）。1.4止血时间:治疗组平均止血时间4.29±0.46天短于对照组6.48±0.54天（p<0.05）。1.5腹痛消失时间:治疗组平均腹痛消失时间5.48±0.35天短于对照组8.63±0.84天（p<0.05）。1.6血清激素水平:治疗组在孕9、11、12周血清E2值高于对照组（p<0.05）;治疗组孕6、7、9、11、12周血清P值高于对照组（p<0.05）;治疗组孕8、9、10、11、12周血清β-HCG值高于对照组（p<0.01）。1.7 B超检查:治疗组胚胎发育与孕周相符22例,小于孕周6例,胎停育2例;对照组胚胎发育与孕周相符14例,小于孕周7例,停育9例。1.8不良反应:治疗组肝功异常1例,对照组肝功异常3例、皮疹1例,两组在安全性方面无差异（p>0.05）。2网络药理学和分子对接探讨培元补肾安胎方治疗复发性流产的作用机制2.1培元补肾安胎方潜在化合物及作用靶点:潜在化合物186个,作用靶点136个。2.2 RSA疾病靶点:经过筛选去重共得到RSA靶点1658个。2.3共同靶点筛选及互作网络构建:共同靶标65个,潜在靶点分别至少与两个化合物相连接。2.4 PPI网络的构建和关键靶点的提取:PPI网络中有65个节点,其中VEGFA、IL6、EGFR、MPAK8、ESR1等是关键靶点。2.5 GO和KEGG富集:GO主要涉及转录因子活性、单加氧酶活性等。KEGG主要涉及 PI3K-Akt、MPAK、P53 等。2.6分子对接:核心化合物和潜在靶点分子对接得分均≤-5.0 kcal/mol。3孕酮诱导“种植窗期”内膜细胞衰老在胚胎着床中的作用研究3.1“种植窗期”内膜存在急性衰老的生理表现:IHC结果显示,P16蛋白在子宫内膜间质成纤维细胞、上皮细胞胞核呈阳性表达,PD0-PD5组随着怀孕天数的增加P16蛋白表达量逐渐增多,于PD5达到最大值,PD6-PD9组P16表达量逐渐减少。WB和β-gal染色也得出相同结果。3.2“种植窗期”内膜衰老有利于胚胎着床:清除衰老细胞后胚胎着床数目、SA-β-gal活性、内膜P16蛋白表达量少于对照组（p<0.01）。3.3孕酮可诱导成纤维细胞衰老:与空白组相比,各组MPA干预后2BS细胞SA-β-gal活性和衰老标志蛋白P16、P21、P53表达量增多（p<0.01）,细胞形态不规则、细胞核增大,其中MPA（8μM）作用16天,各指标变化显着（p<0.01）。EDU结果显示MPA干预后2BS增殖减慢（;p<0.01）。RT-PCR实验结果显示,MPA组CXCL-2、CXCL-1 等 SASP、PRL mRNA 表达高于空白组（p<0.01）。3.4孕酮诱导细胞衰老是胚胎着床的重要条件:RU486阻断孕酮作用后胚胎着床数目、内膜P16蛋白表达量及SA-β-gal活性小于对照组（p<0.01）。3.5孕酮诱导形成的衰老微环境有利于滋养细胞功能:Senescent CM共培养的HTR-8/SVneo细胞水平和垂直迁移、侵袭功能强于Young CM组（p<0.01）。4基于“种植窗期”内膜衰老探讨培元补肾安胎方治疗RSA的作用研究4.1胚胎丢失率:模型组胚胎丢失率高于正常组（p<0.01）,提示造模成功。中药各剂量组和西药组均低于模型组（p<0.05）。4.2血清P水平:模型组血清P水平低于正常组（p<0.05）。中药中剂量组和西药组血清P水平高于模型组（p<0.05）。4.3卵巢黄体面积:模型组黄体面积少于正常组（p<0.05）。中药中剂量组和西药组卵巢黄体面积多于模型组（p<0.05）。4.4 SA-β-gal染色:模型组内膜SA-β-gal活性少于正常组（p<0.01）。中药中、高剂量组和西药组内膜组织SA-β-gal活性多于模型组（p<0.01）。4.5内膜组织P16、P53、P21蛋白和mRNA表达:模型组P16、P53、P21蛋白和mRNA表达低于正常组（p<0.05）。中药低、中剂量组、西药组P16、P53、P21蛋白和mRNA表达高于模型组（p<0.05）。4.6免疫组化:P16蛋白在内膜成纤维细胞、上皮细胞的胞核中呈阳性表达,模型组内膜P16蛋白表达量低于正常组（p<0.01）,中药低、中剂量组、西药组内膜P16蛋白表达量高于模型组（p<0.01）。结论1培元补肾安胎方能明显改善脾肾两虚证候,减轻阴道流血、腹痛症状,提高血清E2、P、β-HCG水平,促进胚胎发育,提高LPD型RSA的保胎成功率。2通过网络药理学初步明确培元补肾安胎方治疗RSA的分子机制可能是通过调控P53信号通路,调节细胞衰老,从而治疗RSA。3“种植窗期”内膜急性衰老是胚胎着床的必要条件之一,其中足量足时间的孕酮是诱导内膜衰老的重要因素。4 P不足、“种植窗期”内膜急性衰老不足可能是LPD型RSA发病机制。培元补肾安胎方可能通过提高血清P和卵巢黄体面积,增加“种植窗期”内膜P53、P21、P16表达,促进“种植窗期”内膜衰老从而发挥保胎作用。
刘晓雯[3]（2020）在《microRNA-196a-5p通过调控NR6A1/E-cadherin抑制睾丸生殖细胞肿瘤的进展》文中研究指明睾丸生殖细胞肿瘤（Testicular germ cell tumors,TGCTs）是一组由不同的病理组织类型和临床表现构成的多样性肿瘤,来源于功能失调的胚胎生殖细胞,可发生于生殖腺或生殖腺外。TGCTs在年轻男性中常见,其发病率在世界大部分地区处于上升趋势。TGCTs可分为两种主要的组织学类型,精原细胞瘤和非精原细胞瘤,后者包括胚胎癌、畸胎瘤、绒毛膜癌和卵黄囊肿瘤等。其中,胚胎癌细胞（Embryonal carcinoma,EC）属于TGCTs中恶性程度最高的一种类型,被认为是与胚胎干细胞（Embryonic stem cells,ES）对应的恶性细胞,因为两者都具有多能性。TGCTs对放疗和化疗敏感,大多数TGCTs患者预后良好,但仍有15-30%的转移患者预后不良甚至死亡,提示可能还存在一些未知的异常遗传因素导致TGCTs的恶性转化。然而,TGCTs恶性转化的遗传驱动因素至今尚未完全阐明。因此,寻找新的TGCTs诊断标志物及治疗靶点很有必要。到目前为止,通过全基因组关联研究（genome-wide association studies,GWAS）已发现了50多个TGCTs易感性位点,其中许多易感性位点位于基因组的非编码区域,提示包括micro RNA在内的非编码RNA可能影响TGCTs的发生发展。因此,miRNAs有望为TGCTs的诊断、预后和治疗带来突破。miR-196a-5p是一种保守的miRNA,由其前体miR-196a衍生而来。研究表明,miR-196a-5p与肿瘤发生相关,例如在胃肠道间质瘤中起癌基因的作用,或在恶性黑色素瘤中发挥抑癌基因的作用,但其在TGCTs中的作用及其机制尚不清楚。近年来,一系列的研究表明,神经细胞是肿瘤微环境的重要组成部分之一。癌细胞通过分泌神经营养因子吸引神经纤维,刺激神经生长。反过来,各种神经营养生长因子/受体在癌症中上调以促进癌细胞的存活、增殖和侵袭。例如发现胃癌和结肠直肠癌干细胞具有产生神经元细胞的潜力。然而,关于肿瘤的神经发生或肿瘤神经依赖性中的关键驱动或调控因素还未完全被确定,有待深入研究。本论文以miR-196a-5p为研究对象,分析了miR-196a-5p在TGCTs中的表达特点以及对TGCTs细胞生物学行为的影响,确定了核受体基因NR6A1是miR-196a-5p的作用靶点,并明确了NR6A1具有促进TGCTs增殖、迁移和侵袭的作用,同时证实细胞粘附分子E-cadherin是NR6A1在TGCTs中的一个新的靶基因,并从机制上探讨了NR6A1与E-cadherin的调控关系。此外,从肿瘤细胞神经发生的角度研究了NR6A1在参与调控EMT过程以及促进睾丸肿瘤细胞的神经样特征转变中的作用,阐释了miR-196a-5p/NR6A1/E-cadherin各分子间的相互调控关系,为TGCTs的诊治提供了潜在的分子靶点。本论文的主要研究内容及结果如下:（1）miR-196a-5p抑制睾丸胚胎癌细胞的增殖、迁移和侵袭:利用GEO数据库分析结合临床样本RT-q PCR检测,证实miR-196a-5p在睾丸生殖肿瘤组织中表达下调。随后,采用MTT实验、划痕实验、Transwell实验以及Western Blot检测,发现miR-196a-5p可明显抑制NT-2和NCCIT睾丸胚胎癌细胞的增殖、迁移和侵袭,表明miR-196a-5p在TGCTs中可能发挥肿瘤抑制作用。（2）miR-196a-5p靶基因的确定与功能验证:利用Targetscan下载miR-196a-5p所有靶基因并和GO数据库中所有增殖分化相关基因取交集后,筛选得到排名第一的靶基因为核受体基因NR6A1。通过生信分析和PCR实验证明了miR-196a-5p和NR6A1在TGCTs中的表达呈现负相关。通过Western blot,RT-q PCR以及双荧光素酶报告基因实验证明了miR-196a-5p靶向识别和降解NR6A1。进一步的功能拯救实验证实NR6A1可以部分回补miR-196a-5p对胚胎癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。（3）核受体NR6A1靶向抑制CDH1促进胚胎癌细胞的增殖、迁移和侵袭:利用RNA sequnce检测过表达NR6A1后对NT-2细胞的影响,GO分析发现过表达NR6A1可以显着负向调节NT-2细胞的细胞粘附行为。通过RT-q PCR、Western blot、免疫荧光等实验发现NR6A1显着抑制粘附分子E-cadherin的表达。进一步通过分析CDH1（E-cadherin编码基因）启动子区域的DR0位点,发现CDH1基因上面含有三个DR0位点。随后利用Western blot、染色质免疫共沉淀（CHIP）-PCR、双荧光素酶报告基因实验等方法确认了CDH1是NR6A1在TGCTs中的一个新的靶基因。功能拯救实验证实干扰CDH1可以部分回补干扰NR6A1对胚胎癌细胞增殖,迁移,侵袭的抑制。在机制上,通过CO-IP发现NR6A1可以和甲基化酶Dnmt1相互作用调节CDH1的甲基化水平,提示NR6A1可能通过募集Dnmt1至CDH1的启动子DR0位点处,甲基化CDH1的启动子,抑制其转录。此外,基于Starbase数据库的临床样本分析证明了miR-196a-5p/NR6A1/CDH1在TGCTs中存在相互调控关系。（4）NR6A1促进胚胎癌细胞的神经样特征转变:体外裸鼠成瘤实验表明过表达NR6A1的NT-2细胞异种移植肿瘤的增长率明显高于对照组,NR6A1过表达促进了NT-2细胞体外成瘤。免疫组化实验检测发现过表达NR6A1后瘤体中增殖标志分子PCNA和神经特异性标记分子MAP2的表达水平显着上升。体外构建了视磺酸（RA）诱导的胚胎癌NT-2细胞神经样转变模型,利用该模型检测了NR6A1干扰后MAP2的表达变化。结果证实干扰NR6A1后,MAP2的表达不再随RA的诱导而出现,提示了NR6A1可能在TGCTs细胞的神经样特征转变中发挥作用。（5）miR-196a-5p/NR6A1/E-cadherin轴调控TGCTs的发生发展:利用体外RA诱导NT-2神经样特征转变的细胞模型,探讨了miR-196a-5p/NR6A1/E-cadherin在胚胎癌细胞神经样转变过程中的相互调控关系。发现随RA浓度不断升高,NR6A1和N-cadherin的表达水平不断升高;OCT4和E-cadherin的表达水平逐渐下降。miR-196a-5p的表达与NR6A1的水平呈现互反,再次证明了miR-196a-5p与NR6A1在TGCTs中存在靶向关系。而且,发现RNA干扰NR6A1或者过表达miR-196a-5p抑制NR6A1后,均可以影响胚胎癌细胞神经样改变过程中E-cadherin/N-cadherin之间的表达转换,暗示NR6A1可能调控了EMT过程。为了在组织水平证明NR6A1、E-cadherin和MAP2在TGCTs中的相关性,收集了15例睾丸生殖细胞肿瘤组织及15例正常睾丸组织病理切片标本进行免疫组化分析。结果表明,与正常睾丸组织相比,NR6A1在TGCTs中高表达;E-cadherin在TGCTs中低表达;MAP2在TGCTs中高表达。相关性分析表明E-cadherin与MAP2在TGCTs中的表达相关性不显着;而NR6A1与E-cadherin表达呈负相关,NR6A1与MAP2则呈正相关,表明NR6A1在胚胎癌细胞发生神经样特性转变中发挥重要作用。
韦敬锡,庞晓霞,王俊利[4]（2020）在《黄体生成素/绒毛膜促性腺激素受体与生殖发育相关疾病的研究进展》文中指出黄体生成素/绒毛膜促性腺激素受体（LHCGR）是生殖发育的重要调节剂,其在生殖发育中的重要作用提示若其功能出现异常将会导致相关生殖疾病。因此,围绕LHCGR在生殖发育中的作用及其与生殖疾病关系的研究进行综述具有重要意义。
覃道锐[5]（2020）在《HOXA4基因在尿道下裂尿包皮组织中的表达及意义研究及SIS材料覆盖尿道外层在尿道下裂比格犬动物模型上的应用》文中进行了进一步梳理尿道下裂是小儿泌尿生殖系统常见的先天性畸形之一,发病率在1/300-1/125的出生男婴之间。我国近年尿道下裂发病率亦呈明显上升趋势。由于尿道下裂患者不能正排尿及射精,将严重影响患者的生活。目前认为尿道下裂与内分泌因素、环境因素、遗传因素等多种原因相关。但是,这些仅能解释约30%的尿道下裂。还有大部分尿道下裂不能解释。近年来,随着全基因组测序技术的发展及广泛应用。有更多可能与尿道下裂相关基因位点被筛选报道出来。有文章报道通过全基因组关联（GWAS）研究,发现HoxA4基因可能参与了尿道下裂疾病的发生发展过程。HoxA4基因是HOX基因家族成员,该基因定位于7号染色体上。编码一种DNA结合转录因子,参与调节基因表达及组织形态分化过程。但是GWAS相关研究的各种设计方法以及遗传统计学方法无法消除人群混杂、多重比较造成的假阳性。HOXA4基因是否真的参与了尿道下裂的发病过程需要进一步研究。目前外科手术是尿道下裂的唯一治疗方法。但尿道下裂修复手术中,容易出现各种并发症,其中尿道瘘是尿道下裂修复手术最常见对并发症。许多小儿泌尿外科医生为减少尿道下裂术后尿道瘘作出了不懈努力。常见的减少尿道下裂术后瘘的方法是手术中在新成形的尿道外层添加额外覆盖。常见的覆盖材料是患者手术区域临近的自体筋膜。但制备自体筋膜是一个耗时的过程,同时在多次手术等特殊情况下可能导致自体筋膜匮乏。小肠粘膜下层是一个在临床上有成熟使用经验的生物材料。它被广泛是应用在包括泌尿外科在内的多个专科的组织修复手术中。但该材料作为一种额外的覆盖材料使用在尿道下裂手术中的经验并不多。为了探究尿道下裂的发生过程以及临床治疗,我们进行了该研究。本研究分两部分,第一部分是关于尿道下裂发生原因的探讨;第二部分是SIS材料在减少尿道下裂常见并发症之一的尿道瘘上的应用。第一部分HoxA4基因在尿道下裂尿包皮组织中的表达及意义研究目的研究尿道下裂患儿包皮及及令苯二甲酸己酯诱导的小鼠尿道下裂模型小鼠阴茎中HoxA4基因及其蛋白的表达情况,初步研究HoxA4基因与尿道下裂发生的相关性。方法本研究分为两部分,其一是基础研究部分,其二是临床应用研究方面。在基础研究方面首先,选取正常包茎儿童的包皮与轻、中、重各型尿道下裂患儿的包皮做对照,分别用实时定量PCR方法及免疫组织化学方法测量HOXA4基因的mRNA及蛋白表达水平。其次,建立邻苯二甲酸酯（DEHP）诱导小鼠尿道下裂的动物模型。采用RT-PCR及免疫组织化学方法,进一步研究HOXA4基因在尿道下裂患病胎鼠及正常对照胎鼠阴茎组织中的mRNA及蛋白表达水平。结果DEHP诱导小鼠尿道下裂动物模型复制成功。HoxA4基因在包茎及包皮过长的患者标本中与尿道下裂包皮以及小鼠阴茎组织都有转录,及蛋白表达。与内参基因GAPDH相比,各组相对转录水平分别是:普通包皮组1.501±0.063、轻度尿道下裂1.101±0.147,中度尿道下裂1.099±0.140、重度尿道下裂0.539±0.056。普通包皮组HoxA4转录水平要高于尿道下裂组（p<0.001）。尿道下裂组内部比较轻、中度尿道下裂HoxA4基因转录水平要高于重度尿道下裂（p<0.001）。轻、中度尿道下裂间HoxA4基因mRNA转录水平差别无统计学意义（p=0.964）。结论 DEHP诱导小鼠构建胎鼠尿道下裂模型稳定有效,HoxA4基因表达可能参与了尿道下裂疾病的发生,是部分尿道下裂的原因。第二部分SIS材料覆盖尿道外层在尿道下裂比格犬动物模型上的应用目的:评价SIS组织尿道外层覆盖在修复犬尿道下裂模型中作用及观察SIS组织在犬尿道外层中降解过程。方法与材料:对22只健康雄性比格犬为试验对象。用随机数字表方法将犬随机分为试验组与对照组,每组11只犬。实验动物在戊巴比妥钠静脉全麻下通过手术切开尿道3-5cm建立尿道下裂模型。对照组常规手术修复尿道,试验组尿道外覆盖SIS组织材料,对照组尿道外不覆盖任何材料。将两组动物对尿道海绵体拨向两旁,使尿道与皮肤之间形成空腔,再缝合皮肤。术后注射头孢维星钠一次。于术后4W、12W采用逆行膀胱尿道造影检查重建尿道情况,记录尿道瘘及尿道狭窄发生情况。两组动物术后2w、4w、12w按计划麻醉处死后取材手术部位阴茎,材料组织保存于Bouin’s染色液中,包埋、切片,进行HE染色及Mallory染色,进行组织学观察。结果:对照组及试验组均顺利完成手术。早期均有手术部位红肿,未特殊处理,4周内恢复正常。两组各有1例动物手术后初期阴茎不能正常缩回皮套内。两组动物术后体重增长正常,组间无明显生物学差异。尿道造影未见明确尿道狭窄存在,术后4周试验组1/3,对照组3/3例动物手术部位存在漏尿现象;术后12周,试验组1/5例,对照组3/5例动物手术部位存在漏尿现象。合计试验组尿瘘发生率25%（2/8）,对照组尿瘘发生率75%（6/8）。组织学检查对照组早期术区可见明显急性炎症细胞浸润,随恢复时间延长,急性炎症转变为慢性炎症,且逐渐减轻。早期尿道固有层不连续、上皮增生,尿道海绵体血管窦和小梁消失,随恢复时间延长,尿道上皮与天然尿道上皮结构相似,但之谜纤维结缔组织与海绵体组织之间无明显边界。Mallory染色见胶原纤维在此处相互交错,杂乱无序。试验组早期只在手术缝线处见急性炎症细胞浸润,材料区未见明显炎症细胞浸润,后期术区及材料区均见慢性炎症细胞,SIS替代部位与天然尿道结构相似;mallory染色早期见胶原纤维随修复材料平行生长,后期材料消失,胶原纤维规则生长。结论:在本试验中,SIS材料对比格犬术后的正常生命活动无明显影响,可以降低动物模型尿道瘘发生率,可减少术区急性炎症反应,自身分解能引起慢性炎症细胞浸润,可引导胶原纤维附着于SIS材料成规则生长,术后12周已未见明确材料。SIS材料在比格犬体内有较好的生物相容性,具有减少比格犬尿道手术瘢痕的可能性。
庞晓霞[6]（2020）在《LHCGR基因SNPs及其血清水平与多囊卵巢综合征的相关性研究》文中研究表明目的:（1）探讨外周血黄体生成素-人绒毛膜促性腺激素受体（Luteinizing hormone receptor,LHCGR）蛋白水平与多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）的关系。（2）探讨LHCGR基因rs4519576、rs2293275、rs10495960、rs4953616多态性与PCOS遗传易感性的关系。（3）探讨LHCGR基因多态性与其蛋白表达水平的关系。方法:（1）以234例PCOS患者和248例对照组为研究对象,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清中LHCGR的表达水平。（2）运用im LDRTM SNP分型方法对LHCGR基因rs4519576、rs2293275、rs10495960、rs4953616位点进行基因分型,同时用DNA测序的方法对分型结果做验证。结果:（1）PCOS患者的LHCGR血清水平为13.73（1.08-47.20）ng/m L,对照组的为13.38（2.11-48.58）ng/m L,两组间差异无统计学意义（P>0.05）。在PCOS患者中,不同亚组的LHCGR血清水平为:肥胖组13.31（3.60-41.06）ng/m L,非肥胖组13.95（1.08-47.20）ng/m L;高雄组13.47（1.08-41.06）ng/m L,雄激素正常组14.40（1.08-47.20）ng/m L;IR组13.73（1.08-39.56）ng/m L,NIR组12.86（1.08-47.20）ng/m L;LH/FSH≥2组13.57（1.08-47.20）ng/m L,LH/FSH?2组13.84（1.08-41.06）ng/m L,不同分组间血清LHCGR的差异均无统计学意义（P>0.05）。（2）LHCGR基因rs4519576、rs2293275、rs10495960、rs4953616位点的等位基因频率在PCOS组和对照组间的分布差异均无统计学意义（P>0.05）。（3）rs4519576位点的CT基因型在PCOS组中的频率低于对照组,两组间的差异具有统计学意义（CT vs.TT:OR=0.54,95%CI,0.32-0.92,P=0.023）,经年龄和BMI因素校正后,两组间的差异仍具有统计学意义（CT vs.TT:adjusted OR=0.55,95%CI,0.31-0.96,P=0.034）。rs4519576位点的CT/CC基因型在PCOS组中的频率低于对照组,两组间的差异具有统计学意义（CT/CC vs.TT:OR=0.57,95%CI,0.34-0.96,P=0.033）,而两组经年龄和BMI因素校正后差异无统计学意义（CT/CC vs.TT:adjusted OR=0.59,95%CI,0.34-1.02,P=0.056）。另外,rs2293275、rs10495960、rs4953616三个位点的基因型频率在PCOS组和对照组间的分布差异均无统计学意义（P>0.05）。（4）rs4519576位点的基因型和等位基因频率在OA组、HA组、PCO组与对照组间的分布差异均无统计学意义（P>0.05）。（5）rs4519576位点不同基因型间的内分泌代谢指标和LHCGR水平均没有显着差异（P>0.05）。（6）T-C-G-T单倍型在PCOS组和对照组中的分布频率分别为44.9%和37.1%,可能具有增加PCOS的发病风险（OR=1.41,95%CI,1.08-1.83,P=0.010）。结论:（1）PCOS与血清中LHCGR的蛋白表达不具相关性,LHCGR尚未能作为区分不同标准分类的PCOS患者的指标。（2）LHCGR基因rs4519576多态性与PCOS有关,CT基因型与PCOS发生风险的降低存在相关性。（3）LHCGR基因rs4519576、rs2293275、rs10495960、rs4953616四个位点组成的T-C-G-T单倍型可能具有增加PCOS的发病风险。
王一蓉[7]（2020）在《补肾益元中药提取物复方对运动性低血睾酮的影响及其机制研究》文中指出目的:通过创新剂型,采用补肾益元中药提取物复方对运动性低血睾酮大鼠和男性运动员进行干预,并以淫羊藿提取物为阳性对照,观察大鼠睾酮合成相关酶及HPG轴相关激素变化,并且观察田径和游泳项目运动员睾酮代谢相关因子的变化,从睾酮的合成、分泌和代谢三大方面来探讨该方对防治运动性低血睾酮的有效性和可能分子机制,并比较中药提取物复方和单味中药提取物的干预效果,为临床开发新的运动营养补剂提供可能理论依据。同时,对补肾益元中药提取物复方中的有效成分进行检测。方法:采用高效液相色谱法（HPLC）双波长、梯度洗脱测定方中人参皂苷和淫羊藿苷的含量,采用紫外光谱检测法（UV法）测定该方中总多糖的含量。将40只SD大鼠（雄性、2月龄）随机分为空白生理盐水（CS）组、模型生理盐水（MS）组、模型淫羊藿干预（ME）组、模型低剂量复方中药干预（MLC）组、模型高剂量复方中药干预（MHC）组。经6周递增负荷跑台运动,构建大鼠运动性低血睾酮模型,采用Elisa方法检测血清CORT、T的含量;采用透射电镜观察大鼠睾丸Leydig细胞超微结构;采用RT-qPCR、western-blot检测大鼠脑组织中GnRH和FSH、LH,睾丸Leydig细胞中胆固醇合成限速酶（HMG-CoA还原酶、LDL-R和SR-BI）、睾酮合成限速酶（CYP11A1和StAR）以及LH/CG受体的mRNA和蛋白表达水平。将32位田径项目和游泳项目男性运动员按照双盲原则,随机分为运动安慰剂（MS）组、运动淫羊藿（ME）组、运动低剂量复方中药干预（MLC）组、运动高剂量复方中药干预（MHC）组,采用UV法测定运动员血、尿标本中睾酮代谢产物17-KS的含量。结果:（1）人参皂苷类、淫羊藿苷等11个成分得到有效分离,根据外标法计算得到复方含人参总皂苷、淫羊藿苷分别为43.57mg/粒、5.03mg/粒;并根据标准曲线法得到复方含多糖0.268g/粒。（2）大强度运动后,MS组大鼠血清T、T/C比值和Hb显着下降（P<0.01）,其中T值较CS组下降了38%;BLA、CK却显着上升（P<0.01）,BUN明显增加（P<0.05）,C无明显变化（P>0.05）;而三个给药组T、T/C比值和Hb有不同程度上升,BLA、CK、BUN却有不同程度下降。表明大鼠运动性低血睾酮模型建立成功。（3）透镜下可见MS组出现睾丸Leydig细胞水肿,染色质边集、细胞核固缩,内质网扩张,部分线粒体空泡变;给药组在透镜下可见Leydig细胞个别线粒体轻度肿胀,内质网扩张不明显。（4）ME、MLC和MHC组中睾丸Leydig细胞HMG-Co A还原酶,St AR和CYP11A1mRNA和蛋白表达水平均显着高于MS组（P<0.01）,但LDL-R和SR-BI的mRNA和蛋白表达水平与MS组相比无显着差异（P>0.05）。（5）MS组大鼠HPG轴中GnRH、FSH、LH和LH/CG的mRNA和蛋白表达水平较CS组显着降低（P<0.01）;而ME、MLC和MHC组组以上4个指标的mRNA和蛋白表达水平显着高于MS组（P<0.01）。（6）24h尿17-KS含量试验后ME、MLC和MHC组与MS组比较,无显着变化（P>0.05）,但仍有上升的趋势;而血17-KS含量试验后与MS组比较,ME、MLC和MHC组明显依次升高,但仍然低于试验前。结论:1.利用HPLC法能够使补肾益元方中人参皂苷、淫羊藿苷等11个成分得到有效分离,通过方法学考察说明此方法可行,精密度、回收率高,准确性、重复性良好,能够很好地控制补肾益元方的内在质量。2.采用逐级递增负荷跑台的方案能够成功建立大鼠运动性低血睾酮模型。从对大鼠一般情况观察、血清学指标检测及睾丸间质细胞形态学观察,证明补肾益元中药提取物复方对防治大鼠运动性低血睾酮症有药效。3.通过构建运动性低血睾酮大鼠模型,补肾益元中药提取物复方抗大鼠运动性低血睾酮的作用机制主要集中在对睾酮合成和分泌的影响上,包括:（1）可通过睾丸Leydig细胞内胆固醇内源性合成以及睾酮合成两个关键步骤来影响血睾酮浓度,但对于由LDL-R转录和/或SR-BI介导的逆转运影响胆固醇合成的分子机制还需要进一步探讨。（2）对HPG轴各环节具有促进作用,从影响睾酮分泌的角度影响血睾酮浓度。
郝明[8]（2020）在《Kallmann综合征伴ANOS1基因突变患者的特征分析和促性腺激素治疗部分性CHH患者的生精疗效研究》文中进行了进一步梳理第一部分Kallmann综合征伴ANOS1基因突变患者的特征分析背景ANOS1基因是Kallmann综合征发现的第一个致病基因,其位于X染色体上,属于X连锁的遗传形式,编码蛋白质anosmin-1。ANOS1基因突变引起anosmin-1蛋白功能异常,进而导致GnRH神经元及嗅神经元的迁移受损,引起Kallmann综合征。本研究深入探讨大样本量单中心的Kallmann综合征中国队列中ANOS1基因突变的情况,分析临床表型与基因突变的关系,并完成了新发突变位点的生物功能验证。目的1.筛查212例中国男性Kallmann综合征患者的ANOS1基因突变情况。2.判断新发ANOS1基因突变是否致病,且其与临床表型的关系。对象和方法研究对象:2010年1月至2017年10月共招募就诊于北京协和医院内分泌科的散发性中国Kallmann综合征男性患者,且同意进行致病基因筛查的患者,共入组212例。研究方法:1.基因筛查:采用目标序列捕获结合二代测序的方法筛查入组Kallmann综合征患者相关的31个基因。将检出的ANOS1突变基因进行Sanger测序验证。2.临床研究:收集Kallmann综合征患者临床资料,整理其中ANOS1基因突变患者的临床特点。3.新发突变基因型与表型相关性:利用Polyphen-2、SIFT、MutationTaster、MutationAssessor和Provean等五种生物预测软件对ANOS1的新发错义突变位点进行功能预测;利用 Human splicing finder 和 Splice site score calculation 等两种生物预测软件对ANOS1的新发剪切突变位点进行功能预测。4.体外功能验证实验:Transwell迁移实验验证新发错义突变是否致病。5.总结不同位点的突变导致Kallmann综合征患者的临床特点,探讨表型与基因型的关系。结果1.本研究共纳入212例Kallmann综合征患者,其中22例有ANOS1基因突变,在这些患者中隐睾患病率高达36.4%（8/22）,肾发育不全的概率达到18.2%（4/22）,一例出现双手的镜像运动,嗅神经MRI异常的患者100%出现嗅觉异常2.本研究共发现ANOS1的19个突变,包括8个错义、5个无义、3个剪接位点和3个移码突变,其中8个突变既往已报道过（p.R257X、p.W258X、p.R262X、p.R423X、p.R424X、p.Y579fs、p.V5601、c.1843-1G>A）。新发现 2 个移码突变（p.P135fs、K512fs）,7 个错义突变（p.A140G、p.C147Y、p.C157R、p.C164F、p.C164S、p.A264P、p.P504L）,2 个剪接位点突变（c.1207+1G>c、c.1449+1G>A）。所有新的错义突变经五种生物软件计算后都被认为是致病的。两个新发的剪切位点突变其突变位点位于人类最经典的剪切位点（GT-AG序列）上,经两个剪切预测软件（Human splicing finder 和 Splice site score calculation）预测均考虑致病可能性高。3.体外Transwell实验验证ANOS1基因突变功能对NLT细胞迁移的影响。七种ANOS1新发错义突变的迁移能力均明显少于ANOS1野生组。结论1.Kallmann综合征患者伴有ANOS1基因突变者更易出现累及其它非生殖系统的临床表型。2.本研究中共发现ANOS1的19个突变,再次确认了其中8个已报道位点的突变,新发现了 11个ANOS1突变位点,并对其中的错义突变进行功能验证,明确其致病性,这些突变扩大了ANOS1突变谱,为产前诊断和遗传咨询提供了基础。第二部分促性腺激素治疗部分性CHH患者的生精疗效研究背景先天性低促性腺激素性性腺功能减退症（Congenital hypogonadotropic hypogonadism,CHH）发生主要原因与下丘脑分泌的GnRH相关（分泌不足或作用障碍）,从而导致的一组在临床表型和遗传方式上罕见的异质性生殖障碍疾病。根据青春期发育程度,CHH患者可分为部分性CHH（Partial congenital hypogonadotropic hypogonadism,PCHH）和完全性 CHH（Complete congenital hypogonadotropic hypogonadism,CCHH）,以往对部分性CHH的研究主要局限于症状描述和突变基因的鉴定。目前还没有关于双促性腺激素（绒促性腺激素联合尿促性腺激素）治疗中国人部分性CHH治疗预后和部分性CHH突变基因的综合研究分析的报道。本研究通过对促性腺激素生精治疗部分性CHH患者预后及相关突变基因的研究,为临床开展治疗提供依据。目的1.分析应用双促性腺激素生精治疗下部分性CHH患者与完全性CHH患者精子生成的区别及相关差异原因2.部分性CHH患者与完全性CHH患者进行致病基因突变的筛查,以明确不同突变对患者临床表现的影响。对象和方法研究对象:2008年1月至2016年9月就诊于北京协和医院内分泌门诊后确诊为CHH的男性患者,并接受规律促性腺激素治疗两年且无隐睾史者（122例）研究方案:回顾性分析治疗及随诊方案:所有患者均按照指南给予绒促性腺激素联合尿促性腺激素肌肉注射治疗。每3-6个月进行一次随诊,每次随诊记录患者身高、体重、睾丸体积、性腺激素水平、精子生成等情况。致病基因筛查:87名患者接受二代测序筛查31种CHH相关基因突变。结果1.CHH患者按睾丸体积是否≥4ml分为部分性CHH（n=39）组（睾丸体积≥4ml）和完全性CHH（n=83）组（睾丸体积<4ml）。经规律两年双促性腺激素治疗后,与完全性CHH组（74.7%）相比,部分性CHH组生精率高达92.3%（P=0.023）;部分性CHH组首次精子出现时间11.7±6.8个月,较完全性CHH组首次精子出现时间提前了半年（17.8±6.2个月）（P<0.001）,每半年随访时部分性CHH组精子浓度均明显高于完全性CHH组,且在6、12、24个月时这种差异是有统计学意义的。2.共有87名患者接受31种CHH相关致病基因的筛查,其中28例CHH患者通过二代测序筛查出CHH相关致病基因变异,其检出率约为32.2%（28/87）。共检出9种致病基因的28处位点突变,其中7个突变位点为已知致病突变,有21处为新发突变。在部分性CHH组和完全性CHH组中均发现FGFR1、ANOS1、PROKR2和CHD7突变,说明相同基因的突变可导致不同程度的表型,导致不同的预后。LHB和NELF突变仅见于部分性CHH组,在完全性CHH组中没有检测到这些突变。GNRHR、FGF8和PROK2突变仅存在于完全性CHH组存在,在部分性CHH组中没有检测到这些突变。结论1.部分性CHH定义为初诊时基础睾丸体积≥4ml的CHH患者;完全性CHH定义为基础睾丸体积<4ml的CHH患者。2.在两年规律的促性腺激素治疗的过程中,部分性CHH患者组较完全性CHH患者组精子生成率更高,且精子初现的时间更短,在相同治疗时间下,部分性CHH患者产生精子的平均密度要远高于完全性CHH患者,成功生成精子的患者比率也高于完全性CHH组。3.FGFR1、PROKR2、CHD7、ANOS1等基因突变即可导致部分性CHH也可导致完全性CHH,根据目前的研究尚未发现仅可导致部分性CHH的基因突变,基因检测的结果说明:部分性CHH与完全性CHH患者检测出的基因突变的概率一样,对于已经明确有致病基因突变的患者,两组之间生精治疗不能成功的比率均较高,因此应该重视基因检测的结果,以期寻找到对症治疗方法。
王琪[9]（2020）在《双峰驼精清诱导排卵分子调控机制的研究》文中进行了进一步梳理双峰驼（Camelus Bactrianus）是生存于荒漠和半荒漠草原地带的古老物种,是我国重要的优势畜种资源,具有重要的经济和科研价值。由于双峰驼是严格的季节性发情动物,其生长速度慢、生殖周期长、繁殖性能低,而且双峰驼排卵机理尚不清楚,故而本研究以双峰驼为研究对象,展开蛋白质组及差异蛋白功能的研究。首先,我们选取繁殖季节和非繁殖季节双峰驼（公驼）血清,通过蛋白质组学（i TRAQ）筛选出与生殖相关的差异蛋白,利用生物信息学及分子生物学进一步筛选和鉴定与激素合成分泌相关的差异蛋白-视黄醇结合蛋白（Retinol-Binding Protein 4,RBP4）,并通过体外细胞模型验证RBP4蛋白的功能;其次,通过i TRAQ技术筛选肌肉注射精清（Seminal Plasm,SP）诱导排卵后的卵巢组织差异表达蛋白质;利用内分泌学、组织形态学、影像学及分子生物学进一步筛选出可能参与调控诱导排卵的靶蛋白-钙离子/钙调依赖性蛋白激酶II-γ（Calcium/calmodulin kinase II-γ,CAMK2G）;最后,通过体外卵巢颗粒细胞模型研究CAMK2G对雌激素受体（ER）的调控机制。本研究所取得的结果如下。1.通过i TRAQ方法,共筛选出359个公驼的血清蛋白,基于1.2和0.8的倍数变化临界值,且p<0.05,共筛选出32种差异蛋白（11种上调和21种下调）;筛选和鉴定了5个与生殖相关的差异蛋白（PCGF5、H1.2、ANTXR2、FOLR1和RBP4）。2.RBP4在性腺轴中均有不同程度的表达,但在睾丸组织中RBP4表达水平较高;双峰驼支持细胞中添加不同浓度的Vit A,可以影响IGFs、RBP4和AR的表达水平,且对RBP4（负相关）和AR（正相关）有剂量依赖性;过表达（敲低）RBP4对IGFs的表达有抑制（促进）作用,并且同时下调（上调）AR的表达水平;RBP4可通过类固醇合成通路调控雄激素受体AR的表达。3.通过i TRAQ共筛选出404个卵巢差异表达蛋白,260个上调蛋白（SP组）,144个下调蛋白,进一步筛选出5个可能参与诱导排卵的差异蛋白（CAMK2G、FST、NR5A1、PAK1和PRL）;通过RT-PCR、Western blot和组织免疫荧光等发现,排卵前后差异蛋白在性腺轴及生殖器官中表达水平不同,推测诱导排卵过程均有性腺轴的参与。4.调控CAMK2G的表达水平对各受体及相关蛋白有不同影响;过表达/敲低CAMK2G可以上调/下调ER的表达水平;CAMK2G的特异性抑制剂KN-93可下调ER的表达水平;CAMK2G可通过介导17βHSD和P450scc的表达来调节类雌激素受体（ER）的表达水平。本研究揭示:RBP4与公驼的繁殖相关,主要参与调节雄激素的合成,故而推测RBP4可作为一个调控因子调控激素的合成分泌;CAMK2G通过参与类固醇通路调控雌激素受体的表达,推测CAMK2G可能是双峰驼诱导排卵过程的一个调控分子。
王毅[10]（2020）在《苦马豆素致N-聚糖糖基化修饰改变对小鼠生殖激素分泌的影响》文中提出苦马豆素是疯草生物碱中的主要有毒成分,当家畜采食疯草导致苦马豆素中毒后,会出现蹒跚、消瘦以及运动障碍等症状。苦马豆素中毒主要表现为家畜组织发生广泛性的空泡变性,是由于苦马豆素抑制糖苷酶活性,导致N-聚糖加工过程紊乱,糖基化水平异常,富含甘露糖的低聚糖在细胞中大量蓄积所引起,会使许多生物学过程发生障碍。苦马豆素对生殖的影响主要表现为:母畜中毒后会引起不孕,生殖激素分泌紊乱,卵巢组织发生空泡变性或黄体细胞凋亡;妊娠母畜则出现流产,产下死胎、畸胎、弱胎等,导致生殖性能下降。糖基化修饰广泛存在于机体各个阶段,促性腺激素属于糖蛋白激素,糖基化水平对其正常活性与半衰期都起决定性作用。同时,促性腺激素的受体也具有糖基化结构,他们的功能受到糖基化水平的制约。生殖激素及其受体对于正常妊娠的维持有决定性意义,二者异常必然引起生殖障碍。那么苦马豆素是怎样影响N-聚糖加工过程的;是如何影响对家畜生殖激素分泌的调节;又是如何影响孕畜生殖激素的分泌及其受体表达量?因此,本试验通过苦马豆素腹腔注射对小鼠进行染毒,建立中毒模型,记录妊娠期6 d、11 d、16 d小鼠的生殖指数,妊娠胚胎数、胚胎重量等;分娩0 d、7 d、14 d记录仔鼠成活率及体重;采集妊娠期6 d、11 d、16 d小鼠的肝、脾、卵巢、胎盘、胎儿（包含子宫）进行病理学组织观察。收集妊娠期6 d、11 d、16 d小鼠的血液、垂体组织,利用ELISA及Western Blot检测糖基转移酶活性及表达量,单糖水平;选取染毒小鼠垂体,利用MALDI-TOF-MS质谱法检测垂体组织中糖链结构的改变以及的变化。收集妊娠期6 d、11 d、16 d小鼠的血液及卵巢,利用ELISA、Western Blot及荧光定量PCR法检测生殖激素水平,以及其受体和类固醇限速酶蛋白和基因的表达量。试验一结果:苦马豆素试验组小鼠生殖指数,妊娠胚胎数、胚胎重量,仔鼠成活率及体重均显着低于对照组（P<0.05）。试验组病理组织结果:肝脏、脾脏出现炎性反应;早期胚胎充血,晚期胚胎发育不良;胎盘绒毛板发育不良;妊娠末期子宫内膜固有层出现大量聚糖沉积;卵巢卵泡及黄体数目异常;试验二结果:与对照组相比试验组垂体的糖链结构发生改变,复合型聚糖的数量逐渐减少,杂合型聚糖的数量增加;试验组小鼠垂体糖基转移酶的活性与蛋白质表达量显着低于对照组（P<0.05）;试验组小鼠血液葡萄糖水平显着低于对照组（P<0.05）;试验三结果:生殖激素的活性显着低于对照组（P<0.05）,试验组小鼠生殖激素受体的基因及蛋白质的表达量显着低于对照组（P<0.05）,试验组小鼠性类固醇合成限速酶的基因及蛋白质的表达量都显着低于对照组（P<0.05）。结论:苦马豆素抑制N-聚糖加工关键酶的活性,引起N-聚糖合成异常,抑制促性腺激素的分泌,又通过抑制生殖激素受体进一步影响激素的活性;同时苦马豆素通过抑制性类固醇激素合成限速酶导致性类固醇激素分泌紊乱,最终造成机体生殖激素分泌紊乱,小鼠繁殖性能下降。
二、睾丸绒毛膜促性腺激素受体的研究及其意义（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、睾丸绒毛膜促性腺激素受体的研究及其意义（论文提纲范文）
（1）探讨男性儿童Kallmann综合征的早期诊断（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.2 国内外研究现状 |
| 1.3 研究的主要内容、目标和方法 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.2 分组标准 |
| 2.3 病史采集和体格检查 |
| 2.4 实验室检查 |
| 2.5 影像学检查 |
| 2.6 基因检测 |
| 2.7 基因变异结果解释 |
| 2.8 数据分析 |
| 第3章 结果 |
| 3.1 一般资料 |
| 3.2 KS组案例资料 |
| 3.3 KS组和对照组实验指标比较及ROC曲线 |
| 第4章 讨论 |
| 4.1 临床和遗传学分析 |
| 4.2 关于KS早期鉴别的临床指标分析 |
| 4.3 研究中存在的局限性和不足 |
| 4.4 展望未来 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及科研成果 |
（2）培元补肾安胎方治疗RSA的临床研究及基于内膜衰老的药物机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一章 文献综述 |
| 综述一 复发性流产的西医研究进展 |
| 1 复发性流产的病因研究 |
| 2 复发性流产的治疗现状 |
| 3 小结 |
| 参考文献 |
| 综述二 中医药治疗复发性流产的研究进展 |
| 1 中医病因病机 |
| 2 复发性流产的中医证型分布状况 |
| 3 复发性流产的中医治疗现状 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 综述三 子宫细胞衰老与女性生殖功能 |
| 1 衰老细胞 |
| 2 子宫的生理解剖及功能 |
| 3 子宫衰老细胞对女性生殖功能的影响 |
| 4 子宫衰老细胞的治疗现状 |
| 5 小结与展望 |
| 参考文献 |
| 第二章 培元补肾安胎方治疗黄体功能不足型复发性流产临床疗效观察 |
| 前言 |
| 1 研究材料 |
| 2 研究方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结与展望 |
| 参考文献 |
| 第三章 基于网络药理学和分子对接探讨培元补肾安胎方治疗复发性流产的作用机制 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结与展望 |
| 参考文献 |
| 第四章 孕酮诱导“种植窗期”子宫内膜细胞衰老在胚胎着床中的作用研究 |
| 前言 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结与展望 |
| 参考文献 |
| 第五章 基于“种植窗期”内膜衰老探讨培元补肾安胎方对复发性流产作用机制的研究 |
| 前言 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 1 研究总结 |
| 2 创新点 |
| 3 不足与展望 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
（3）microRNA-196a-5p通过调控NR6A1/E-cadherin抑制睾丸生殖细胞肿瘤的进展（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 睾丸生殖细胞肿瘤(TGCTs) |
| 1.1.1 TGCTs的发生 |
| 1.1.2 TGCTs的分类和诊断 |
| 1.1.3 TGCTs的预后及治疗方法 |
| 1.2 microRNA与TGCTs |
| 1.2.1 miRNAs简介 |
| 1.2.2 miRNAs参与多种肿瘤的发生发展过程 |
| 1.2.3 miRNAs参与TGCTs的发生发展过程 |
| 1.3 miR-196a研究进展 |
| 1.3.1 miR-196a简介 |
| 1.3.2 miR-196a参与肿瘤发生 |
| 1.3.3 miR-196参与发育过程 |
| 1.4 核受体NR6A1 |
| 1.4.1 核受体简介 |
| 1.4.2 NR6A1研究进展 |
| 1.5 肿瘤微环境 |
| 1.5.1 肿瘤微环境简介 |
| 1.5.2 肿瘤微环境与神经发生 |
| 1.6 肿瘤微环境与上皮-间质转化 |
| 1.7 本论文的研究目的与意义 |
| 第2章 miR-196a-5p抑制TGCTs |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 细胞系与临床标本 |
| 2.1.2 相关试剂及配制 |
| 2.1.3 仪器与设备 |
| 2.1.4 细胞瞬时转染 |
| 2.1.5 RNA提取,逆转录及RT-qPCR |
| 2.1.6 MTT实验 |
| 2.1.7 Western blot检测 |
| 2.1.8 划痕实验 |
| 2.1.9 Transwell实验 |
| 2.1.10 统计学分析 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 miR-196a-5p在TGCTs中低表达 |
| 2.2.2 miR-196a-5p抑制睾丸胚胎癌细胞的增殖能力 |
| 2.2.3 miR-196a-5p抑制睾丸胚胎癌细胞的迁移和侵袭能力 |
| 2.3 小结 |
| 第3章 MiR-196a-5p通过核受体NR6A1抑制TGCTs |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 生物信息学分析的主要软件与数据库 |
| 3.1.2 仪器与设备 |
| 3.1.3 细胞培养 |
| 3.1.4 双荧光素酶报告基因实验 |
| 3.1.5 Western blot实验 |
| 3.1.6 慢病毒制备 |
| 3.1.7 MTT实验 |
| 3.1.8 细胞迁移和侵袭实验 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 miR-196a-5p靶基因的筛选与确定 |
| 3.2.2 miR-196a-5p靶向抑制NR6A1 |
| 3.2.3 miR-196a-5p通过NR6A1抑制胚胎癌细胞的增殖、迁移和侵袭 |
| 3.3 小结 |
| 第4章 NR6A1靶向抑制CDH1促进TGCTs |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 细胞处理 |
| 4.1.2 Transwell实验 |
| 4.1.3 仪器与设备 |
| 4.1.4 RT-qPCR |
| 4.1.5 RNA-Seq |
| 4.1.6 Co-IP试验 |
| 4.1.7 免疫荧光试验 |
| 4.1.8 染色质免疫共沉淀试验(CHIP) |
| 4.1.9 双荧光素酶报告基因实验 |
| 4.1.10 统计学分析 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 NR6A1作用于NT-2细胞的差异基因表达谱分析 |
| 4.2.2 NR6A1通过招募甲基化酶Dnmt1抑制CDH1基因的转录 |
| 4.2.3 miR-196a-5p/NR6A1/CDH1在TGCTs中的表达相关性分析 |
| 4.3 小结 |
| 第5章 NR6A1促进胚胎癌细胞的神经样特征转变 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 材料 |
| 5.1.2 相关试剂 |
| 5.1.3 裸鼠成瘤实验 |
| 5.1.4 免疫组化实验分析 |
| 5.1.5 RA诱导细胞分化模型的构建 |
| 5.1.6 悬浮成球实验 |
| 5.1.7 免疫荧光 |
| 5.1.8 Western blot检测 |
| 5.1.9 MTT检测RA处理后细胞增殖 |
| 5.1.10 RT-qPCR |
| 5.1.11 临床数据相关性分析 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 NR6A1过表达促进胚胎癌移植瘤生长 |
| 5.2.2 RA诱导NT-2细胞神经样样特征转变模型的构建 |
| 5.2.3 NR6A1在RA诱导NT-2细胞神经样特征转变模型中的表达特征 |
| 5.2.4 miR-196a-5p/NR6A1/E-cadherin在RA诱导NT-2细胞神经样特征转变模型中的相互调控关系分析 |
| 5.2.5 NR6A1/E-cadherin/MAP2在临床TGCTs组织标本中的相关性分析 |
| 5.3 小结 |
| 第6章 结论与展望 |
| 6.1 结论 |
| 6.1.1 miR-196a-5p通过靶向核受体NR6A1抑制TGCTs |
| 6.1.2 NR6A1通过招募甲基化酶Dnmt1抑制E-cadherin的转录促进TGCTs |
| 6.1.3 NR6A1促进胚胎癌细胞的神经样特征转变 |
| 6.1.4 miR-196a-5p/NR6A1/E-cadherin轴参与调控TGCTs |
| 6.2 创新点 |
| 6.3 展望 |
| 参考文献 |
| 在学期间发表的学术论文和研究成果 |
| 致谢 |
（4）黄体生成素/绒毛膜促性腺激素受体与生殖发育相关疾病的研究进展（论文提纲范文）
| 1 LHCGR及LHCGR基因 |
| 2 LHCGR在生殖发育方面的作用 |
| 3 LHCGR与生殖疾病 |
| 3.1 LHCGR与男性生殖疾病 |
| 3.2 LHCGR与女性生殖疾病 |
| 4 小结与展望 |
（5）HOXA4基因在尿道下裂尿包皮组织中的表达及意义研究及SIS材料覆盖尿道外层在尿道下裂比格犬动物模型上的应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 HOXA4基因在尿道下裂尿包皮组织中的表达及意义研究 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 材料与方法 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 结论 |
| 参考文献 |
| 第二章 SIS材料覆盖尿道外层在尿道下裂比格犬模型上的应用 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料及方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间成果 |
| 致谢 |
（6）LHCGR基因SNPs及其血清水平与多囊卵巢综合征的相关性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英汉缩略词对照表 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.1.1 PCOS组 |
| 1.1.2 对照组 |
| 1.2 LHCGR基因位点的选择标准 |
| 1.3 样本含量的估算 |
| 1.4 标本的收集与保存 |
| 1.5 基因组DNA提取 |
| 1.5.1 试剂 |
| 1.5.2 主要器材 |
| 1.5.3 DNA提取步骤 |
| 1.5.4 DNA的浓度和纯度鉴定 |
| 1.6 基因分型 |
| 1.6.1 主要试剂 |
| 1.6.2 主要器材 |
| 1.6.3 DNA样本的质量检查以及浓度估计 |
| 1.6.4 多重PCR反应 |
| 1.6.5 多重PCR产物纯化 |
| 1.6.6 连接反应 |
| 1.6.7 连接产物测序与结果分析 |
| 1.7 检测血清中LHCGR的表达量 |
| 1.7.1 LHCGR酶联免疫分析试剂盒 |
| 1.7.2 主要器材 |
| 1.7.3 检测步骤 |
| 1.8 研究对象临床基本资料和实验室检查结果的收集 |
| 1.9 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 研究对象的一般临床资料 |
| 2.2 LHCGR血清水平的表达 |
| 2.3 LHCGR基因4个SNPs的基因型分型结果 |
| 2.4 LHCGR基因多态性与PCOS遗传易感性的关系 |
| 2.5 LHCGR基因rs4519576 位点多态性与PCOS的 OA、HA、PCO三种特征表型的相关性分析 |
| 2.6 LHCGR基因rs4519576 位点多态性与PCOS内分泌代谢指标的相关性分析 |
| 2.7 LHCGR基因rs4519576 位点多态性与血清LHCGR表达的关系 |
| 2.8 4个SNPs的连锁不平衡分析及所组成的单倍型分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 LHCGR的血清蛋白表达 |
| 3.2 LHCGR基因多态性与PCOS遗传易感性的关系分析 |
| 3.3 LHCGR基因多态性与PCOS的 OA、HA、PCO三种特征表型的相关性分析 |
| 3.4 LHCGR基因多态性与PCOS内分泌代谢指标及LHCGR的血清蛋白水平的关系分析 |
| 4 展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 黄体生成素/绒毛膜促性腺激素受体与生殖发育和相关疾病的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及获得的科研成果 |
（7）补肾益元中药提取物复方对运动性低血睾酮的影响及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 综述 —中药抗运动性低血睾酮的研究进展 |
| 1 睾酮简介 |
| 1.1 睾酮的结构与功能 |
| 1.2 睾酮的发生发展 |
| 1.3 睾酮在运动项目中的发生发展 |
| 1.4 睾酮的化学合成 |
| 2 运动性低血睾酮的产生机制 |
| 2.1 睾丸本身的功能障碍导致运动性低血睾酮 |
| 2.2 对睾酮分泌作用的影响导致运动性低血睾酮 |
| 2.3 影响睾酮以及睾酮前体胆固醇合成或分泌的限速酶 |
| 3 中医对运动性低血睾酮的认识 |
| 4 中药抗运动性低血睾酮的作用机理 |
| 4.1 调节下丘脑-垂体-性腺轴(HPG轴) |
| 4.2 调节下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA轴) |
| 4.3 调节胆固醇合成限速酶 |
| 4.4 调节睾酮合成限速酶 |
| 5 运动性低血睾酮与运动性疲劳的区别和联系 |
| 6 运动性低血睾酮模型及其判断标准 |
| 7 中药提取物复方的发展趋势 |
| 8 存在的问题 |
| 9 展望 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 研究一 补肾益元中药提取物复方有效成分检测 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试剂与对照品 |
| 2.2 主要仪器 |
| 2.3 淫羊藿苷提纯 |
| 2.4 人参总皂苷提纯 |
| 2.5 枸杞多糖提取 |
| 2.6 其它提取物 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 双波长HPLC法测定补肾益元中药提取物复方淫羊藿苷及人参皂苷类成分 |
| 3.2 UV法测定补肾益元中药提取物复方中多糖的含量 |
| 4 结果 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 研究二 大鼠运动性低血睾酮模型的构建及补肾益元中药提取物复方的药效观察 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验对象与分组 |
| 2.2 主要试剂与仪器 |
| 2.3 给药方案 |
| 2.4 运动方案 |
| 2.5 质量控制 |
| 2.6 血清测试样品采集与制备 |
| 2.7 透射电镜样品采集与制备 |
| 2.8 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 大鼠行为学及体重变化情况 |
| 3.2 大鼠血清指标变化情况 |
| 3.3 大鼠睾丸间质细胞超微结构变化情况 |
| 4 讨论 |
| 4.1 中药提取物复方对大鼠血清学指标的影响 |
| 4.2 中药提取物复方对大鼠睾丸间质细胞超微结构的影响 |
| 4.3 大鼠运动性低血睾酮模型的构建 |
| 5 小结 |
| 研究三 补肾益元中药提取物复方对大鼠睾酮合成相关指标的影响 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 样品采集与标本制备 |
| 2.2 实验仪器 |
| 2.3 实验试剂 |
| 2.4 指标检测 |
| 2.5 实验方法 |
| 2.6 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 大鼠血清中TC、HDL-CE、LDL-CE含量 |
| 3.2 大鼠睾丸Leydig细胞中HMG-COA、LDL-R、SR-BI、St AR、CYP11A1的m RNA表达水平 |
| 3.3 大鼠睾丸Leydig细胞中HMG-COA、LDL-R、SR-BI、St AR、CYP11A1的蛋白表达水平 |
| 4 讨论 |
| 4.1 中药提取物复方对大鼠睾丸Leydig细胞胆固醇合成限速酶HMG-Co A、LDL-R和 SR-BI的 m RNA和蛋白表达的影响 |
| 4.2 中药提取物复方对大鼠睾丸Leydig细胞睾酮合成限速CYP11A1和St AR的 m RNA和蛋白表达的影响 |
| 5 小结 |
| 研究四 补肾益元中药提取物复方对大鼠睾酮分泌相关指标的影响 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 样品采集与标本制备 |
| 2.2 实验仪器 |
| 2.3 实验试剂 |
| 2.4 指标检测 |
| 2.5 实验方法 |
| 2.6 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 大鼠脑组织中Gn RH、FSH、LH及睾丸组织中LH/CG受体的mRNA表达 |
| 3.2 大鼠脑组织中Gn RH、FSH、LH及睾丸组织LH/CG受体的蛋白表达 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 研究五 补肾益元中药提取物复方对男运动员睾酮代谢相关指标的影响 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 试验对象与分组 |
| 2.2 主要试剂与仪器 |
| 2.3 样品收集 |
| 2.4 指标检测 |
| 2.5 试验方法 |
| 2.6 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 精神状态和运动状态描述 |
| 3.2 血清睾酮、皮质醇、肌酸激酶和尿素氮含量 |
| 3.3 尿、血液中睾酮代谢产物17-KS含量 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 全文结果及结论 |
| 创新与不足 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附图 |
| 附表 |
| 附伦理学审批件 |
| 攻读学位期间发表的论文 |
| 攻读学位期间主持或参与的课题或项目 |
| 攻读学位期间参编的教材 |
| 攻读学位期间参与的论文报告会 |
| 致谢 |
（8）Kallmann综合征伴ANOS1基因突变患者的特征分析和促性腺激素治疗部分性CHH患者的生精疗效研究（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部分: Kallmann综合征伴ANOS1基因突变患者的特征分析 |
| 1. 前言 |
| 2. 材料与方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 优势与局限 |
| 6. 结论 |
| 7. 参考文献 |
| 第二部分: 促性腺激素治疗部分性CHH患者的生精疗效研究 |
| 1. 前言 |
| 2.研究方法与内容 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 优势与局限 |
| 6. 结论 |
| 7. 参考文献 |
| 论文综述 ANOS1基因的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（9）双峰驼精清诱导排卵分子调控机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Summary |
| 英文缩略表 |
| 第一章 综述 |
| 1.骆驼的生殖生理 |
| 1.1 骆驼的分类及分布 |
| 1.2 骆驼的生殖特性 |
| 1.3 骆驼生殖生理 |
| 2 视黄醇及其代谢过程 |
| 2.1 视黄醇与动物生殖 |
| 2.2 视黄醇结合蛋白RBP的研究进展 |
| 2.3 视黄醇结合蛋白的作用机理 |
| 2.4 视黄醇结合蛋白在生殖疾病方面的研究 |
| 3 钙离子及其代谢过程研究进展 |
| 3.1 钙离子的功能 |
| 3.2 钙离子与生殖 |
| 3.3 钙离子与钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ |
| 3.4 钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ的生理功能 |
| 3.5 钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ与生殖相关疾病的关系 |
| 4 本实验的研究目的意义及创新点 |
| 第二章 双峰驼血清差异蛋白的筛选与鉴定 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 试剂及仪器 |
| 1.3 方法 |
| 1.3.1 血清蛋白的提取 |
| 1.3.2 过滤辅助样品制备(FASP)消解 |
| 1.3.3 iTRAQ标记和SCX分馏 |
| 1.3.4 LC-MS/MS分析 |
| 1.3.5 数据分析 |
| 1.3.6 血清RNA的提取及qPCR反应 |
| 1.3.7 总蛋白的提取及蛋白免疫印迹 |
| 1.3.8 统计与分析 |
| 2 结果分析 |
| 2.1 双峰驼血清iTRAQ分析 |
| 2.2 鉴定差异表达蛋白 |
| 2.3 聚类分析和蛋白质间互作网络(PPI)分析 |
| 2.4 qPCR和 Western blot验证表达谱 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 维生素A结合蛋白(RBP4)对AR的影响 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 细胞原代培养 |
| 1.2.2 体外细胞处理和转染 |
| 1.2.3 实时荧光定量PCR |
| 1.2.4 免疫组织化学染色 |
| 1.2.5 免疫荧光染色 |
| 1.2.6 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 RBP4 基因在双峰驼各组织的mRNA检测 |
| 2.2 RBP4在双峰驼性腺轴的检测 |
| 2.3 不同浓度VitA对其受体,结合蛋白(RBP4)及IGFs的影响 |
| 2.4 RBP4过表达载体的构建及其酶切鉴定 |
| 2.5 支持细胞转染过表达p-EGFP-RBP4 的效果检测 |
| 2.6 过表达RBP4对IGFs及类固醇激素合成的影响 |
| 2.7 siRNA-RBP4 的合成及沉默效率检测 |
| 2.8 沉默RBP4对IGFs及类固醇激素合成通路的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第四章 双峰驼精清诱导排卵后卵巢差异蛋白质筛选 |
| 前言 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 试剂耗材 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 动物和处理条件 |
| 1.2.2 精液收集和精清制备 |
| 1.2.3 精清注射及血清样品收集 |
| 1.2.4 样品的采集 |
| 1.2.5 qRT-PCR和 RT-PCR |
| 1.2.6 蛋白质印迹 |
| 1.2.7 组织免疫荧光染色 |
| 1.2.8 数据分析 |
| 2 结果分析 |
| 2.1 卵泡直径和血清激素水平 |
| 2.2 蛋白质分析 |
| 2.3 差异表达蛋白的鉴定 |
| 2.4 蛋白质-蛋白质互作网络(PPI)分析 |
| 2.5 表达谱验证 |
| 2.6 组织表达分析 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第五章 CAMK2G通过类固醇通路调控ER的表达 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 不同浓度抑制剂处理细胞 |
| 1.2.2 细胞转染及其它方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 CAMK2G的表达分析 |
| 2.2 过表达载体p-EGFP-CAMK2G酶切验证 |
| 2.3 双峰驼颗粒细胞转染过表达p-EGFP-CAMK2G的效果检测 |
| 2.4 过表达CAMK2G对各受体的影响 |
| 2.5 过表达CAMK2G对类固醇激素合成通路的影响 |
| 2.6 siRNA-CAMK2G沉默效率的检测 |
| 2.7 敲低CAMK2G对各受体及PPI各相关蛋白的影响 |
| 2.8 敲低CAMK2G对类固醇激素合成通路的影响 |
| 2.9 抑制剂KN-93对CAMK2G的影响 |
| 2.10 抑制剂KN-93对各受体及PPI各相关蛋白的影响 |
| 2.11 抑制剂KN-93对类固醇激素合成通路的影响 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
| 导师简介 |
| 附件 |
（10）苦马豆素致N-聚糖糖基化修饰改变对小鼠生殖激素分泌的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 文献综述 |
| 第一章 苦马豆素对促性腺激素活性功能的影响 |
| 1.1 苦马豆素对家畜生殖性能的影响 |
| 1.1.1 苦马豆素对母畜生殖性能的影响 |
| 1.1.2 苦马豆素对公畜生殖性能的影响 |
| 1.1.3 苦马豆素对幼畜生殖性能的影响 |
| 1.2 促性腺激素及其糖基化 |
| 1.2.1 促性腺激素 |
| 1.2.2 促性腺激素的糖基化 |
| 1.3 促性腺激素受体及糖基化 |
| 1.4 苦马豆素对促性腺激素糖基化修饰的影响 |
| 第二章 苦马豆素对生殖激素分泌的影响 |
| 2.1 苦马豆素对性类固醇激素合成调节的影响 |
| 2.1.1 苦马豆素对促性腺激素的影响 |
| 2.1.2 苦马豆素对性类固醇激素分泌的影响 |
| 2.1.3 促性腺激素对性类固醇激素的调节作用 |
| 2.2 性类固醇激素合成关键酶研究进展 |
| 2.2.1 固醇激素合成急性调节蛋白 |
| 2.2.2 细胞色素P450胆固醇侧链切割酶 |
| 2.2.3 3β-羟脱氢酶 |
| 2.2.4 P450芳香酶 |
| 第三章 苦马豆素对N-聚糖糖基化修饰的影响 |
| 3.1 苦马豆素理化性质及毒性机理 |
| 3.2 N-聚糖的加工过程 |
| 3.3 N-聚糖加工过程中的酶 |
| 3.4 苦马豆素对N-聚糖糖基化修饰的影响 |
| 3.4.1 苦马豆素对N-聚糖合成酶的影响 |
| 3.4.2 苦马豆素对细胞粘附过程中N-聚糖的影响 |
| 3.4.3 苦马豆素对免疫过程中N-聚糖的影响 |
| 3.4.4 苦马豆素对其他过程中N-聚糖的影响 |
| 研究内容 |
| 第四章 苦马豆素对小鼠繁殖性能影响的研究 |
| 4.1 试验材料 |
| 4.1.1 受试动物 |
| 4.1.2 主要试剂和仪器 |
| 4.2 试验方法 |
| 4.2.1 试验动物模型的建立与观察 |
| 4.2.2 剖检变化及生殖指数 |
| 4.2.3 病理组织学检测 |
| 4.2.4 结果统计及分析 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 苦马豆素对小鼠胚胎发育剖检变化的影响 |
| 4.3.2 苦马豆素对小鼠繁殖性能的影响 |
| 4.3.3 苦马豆素对妊娠小鼠组织形态学的影响 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 苦马豆素对小鼠生殖激素分泌影响的研究 |
| 5.1 试验材料 |
| 5.1.1 受试动物 |
| 5.1.2 主要试剂和仪器 |
| 5.2 试验方法 |
| 5.2.1 试验动物模型的建立 |
| 5.2.2 血液生化检测 |
| 5.2.3 苦马豆素染毒小鼠卵巢生殖激素受体基因及蛋白的检测 |
| 5.2.4 苦马豆素染毒小鼠卵巢性类固醇激素合成限速酶基因及蛋白的检测 |
| 5.2.5 结果统计及分析 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 苦马豆素对小鼠血液生殖激素含量的影响 |
| 5.3.2 苦马豆素对小鼠卵巢生殖激素受体基因表达量的影响 |
| 5.3.3 苦马豆素对小鼠卵巢生殖激素受体蛋白表达量的影响 |
| 5.3.4 苦马豆素对小鼠卵巢性类固醇激素合成限速酶基因表达量的影响 |
| 5.3.5 苦马豆素对小鼠卵巢性类固醇激素合成限速酶蛋白表达量的影响 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 第六章 苦马豆素对糖蛋白N-聚糖加工过程影响的研究 |
| 6.1 试验材料 |
| 6.1.1 受试动物 |
| 6.1.2 主要试剂和仪器 |
| 6.2 试验方法 |
| 6.2.1 试验动物模型的建立 |
| 6.2.2 组织生化检测 |
| 6.2.3 苦马豆素染毒小鼠垂体糖基转移酶蛋白的检测 |
| 6.2.4 苦马豆素对小鼠垂体N-聚糖结构的影响 |
| 6.2.5 结果统计及分析 |
| 6.3 结果 |
| 6.3.1 苦马豆素对小鼠垂体N-聚糖加工过程糖基转移酶活性的影响 |
| 6.3.2 苦马豆素对垂体糖蛋白N-聚糖糖链结构的影响 |
| 6.3.3 苦马豆素对垂体N-聚糖加工糖基转移酶蛋白表达量的影响 |
| 6.3.4 苦马豆素对血液单糖含量的影响 |
| 6.4 讨论 |
| 6.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
四、睾丸绒毛膜促性腺激素受体的研究及其意义（论文参考文献）
- [1]探讨男性儿童Kallmann综合征的早期诊断[D]. 段梦婷. 江汉大学, 2021(01)
- [2]培元补肾安胎方治疗RSA的临床研究及基于内膜衰老的药物机制研究[D]. 奚婷. 北京中医药大学, 2021(01)
- [3]microRNA-196a-5p通过调控NR6A1/E-cadherin抑制睾丸生殖细胞肿瘤的进展[D]. 刘晓雯. 湖南大学, 2020(02)
- [4]黄体生成素/绒毛膜促性腺激素受体与生殖发育相关疾病的研究进展[J]. 韦敬锡,庞晓霞,王俊利. 右江医学, 2020(07)
- [5]HOXA4基因在尿道下裂尿包皮组织中的表达及意义研究及SIS材料覆盖尿道外层在尿道下裂比格犬动物模型上的应用[D]. 覃道锐. 南方医科大学, 2020(01)
- [6]LHCGR基因SNPs及其血清水平与多囊卵巢综合征的相关性研究[D]. 庞晓霞. 右江民族医学院, 2020(03)
- [7]补肾益元中药提取物复方对运动性低血睾酮的影响及其机制研究[D]. 王一蓉. 湖南师范大学, 2020(01)
- [8]Kallmann综合征伴ANOS1基因突变患者的特征分析和促性腺激素治疗部分性CHH患者的生精疗效研究[D]. 郝明. 北京协和医学院, 2020(05)
- [9]双峰驼精清诱导排卵分子调控机制的研究[D]. 王琪. 甘肃农业大学, 2020(01)
- [10]苦马豆素致N-聚糖糖基化修饰改变对小鼠生殖激素分泌的影响[D]. 王毅. 西北农林科技大学, 2020(02)