一、支持细胞综合征病理观察与分析(论文文献综述)
姜雨婷[1](2021)在《非梗阻性无精子症临床遗传学分析及全外显子组测序低频突变关联研究》文中研究说明研究背景全球不孕不育发病率约为10~15%,其中男性因素约占30~50%。导致男性不育的病因包括内分泌因素、遗传因素、睾丸创伤、隐睾、精索静脉曲张、泌尿生殖系统感染、医源性损伤、代谢性疾病等,而遗传因素的影响较为严重。男性不育中最严重的疾病类型是非梗阻性无精子症(nonobstructive azoospermia,NOA),表现为睾丸生精障碍。携带遗传因素异常的NOA患者进行药物、手术等治疗干预效果并不显着。由于NOA是由多因素引起的复杂疾病,临床表型具有高度异质性,使其遗传学诊断困难且复杂。染色体异常是NOA重要的遗传学病因,核型分析是染色体检查的常规方法,但仅能明确一部分NOA患者的诊断(如克氏综合征),不同种类的染色体异常在NOA患者中的检出率、对应临床表型及机制尚不清楚。Y染色体AZF(Azoospermia factor)微缺失是目前仅次于克氏综合征的NOA患者主要遗传学病因。AZF微缺失目前主要采用序列标签位点(Sequence-tagged site,STS)-PCR法。但由于选定的STS位点有限,仅能检出一部分的AZF微缺失,无法对AZF区其他变异进行检测,导致一部分AZF区变异被漏检。除了染色体异常和AZF微缺失,仍有60~80%的NOA患者无法找到病因,最终被定义为特发性NOA,其中很大一部分是由未知的遗传因素引起的。明确诊断NOA患者的遗传学病因,有助于患者获得适当的遗传咨询及临床决策。临床上通过睾丸显微活检技术发现一部分NOA患者睾丸中有少量精子,结合胞浆内单精子注射(Intracytoplasmic sperm injection,ICSI)技术,NOA患者有机会生育自己的血亲后代。随着测序平台的快速发展,高通量测序技术(Next generation sequencing,NGS)已逐渐应用于癌症、智力缺陷、遗传性疾病、心脑血管疾病、糖尿病等疾病的临床检测中。近年来,对NOA患者分子机制的研究也取得了较大进步,一些NOA相关的易感位点及新的致病基因也陆续被报道,然而大部分新发现的致病基因并未在NOA散发患者或家系中得到进一步验证。虽然染色体和AZF微缺失技术已经在临床广泛应用,但是特殊的染色体异常和染色体断裂位点及AZF区亚区变异类型对男性生育力的影响尚无确定规律,临床遗传咨询困难。虽然新的高通量测序技术的应用能检出新的致病基因,但是大量的变异位点需要结合临床表型进行分析,也需要进一步的家系验证。因此,为了给临床患者提供更明确的遗传咨询,NOA患者的遗传因素仍需要进一步的深入研究和探讨。研究目的1.研究NOA患者染色体异常的种类、检出率及其对临床表型的影响。2.探讨NOA患者AZF区变异的种类、检出率及亚区变异类型。3.分析生精基因捕获测序筛查的检出效率及检出位点的致病性。4.探索全外显子组测序(WES)及低频突变关联分析(RVAS)结果,应用家系验证,对NOA相关致病基因进行筛选分析,为进一步开展NOA致病基因研究提供实验基础。研究方法本研究纳入2014年9月至2018年12月到吉林大学第一医院生殖医学·产前诊断中心就诊男性不育患者,经过精液常规分析、精液脱落细胞学检测、睾丸细针穿刺术或睾丸显微取精术后细胞学检查,排除梗阻性无精子症。对确诊为NOA的1739名患者进行临床信息采集及不育相应的检查结果收集。本研究经吉林大学第一医院伦理委员会同意。整体研究从以下四个部分进行:第1部分:对全部1739例NOA患者进行染色体核型分析。外周血淋巴细胞培养、染色体制备及G显带分析。对常规核型分析无法明确的染色体异常进行染色体微阵列分析、特异性探针-荧光原位杂交检测等方法联合诊断异常核型。对不同种类的染色体异常在NOA患者中的检出率、对应临床表型及相关影响机制进行分析。第2部分:对排除染色体异常的NOA患者进行AZF微缺失检测。采用STS-PCR法及NGS法两种方法并比较其检出率,对AZF亚区变异进行相关机制分析,并探讨其对NOA生精障碍的影响。第3部分:在排除染色体异常和AZF微缺失后,对同意参加生精基因研究的136例患者进行生精基因捕获测序Panel筛查分析。生精基因Panel是课题组前期研究成果,在这个部分进行基因变异筛查及致病性分析。第4部分:对生精基因Panel筛查未检出突变的NOA患者133例及已生育对照组343例进行WES检测,然后进行RVAS分析,对差异有显着性的基因进行蛋白互作关联分析,进一步召回11个家系进行一代测序验证及家系关联分析。结合RVAS及蛋白互作关联分析结果进行复核,筛选出可能导致NOA相关基因,并讨论这些基因与表型之间的关系。研究结果1.1739例NOA患者检出染色体异常299例,占比17.19%,其中性染色体非整倍体(整条或部分性染色体的重复或缺失)247例,在染色体异常的NOA患者中检出比例最高,占82.61%(247/299)。2.X染色体全部或部分重复组的睾丸体积、睾酮水平低于Y染色体全部或部分重复组及Y染色体全部或部分缺失组,有统计学差异(P<0.05);而卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)高于另外两组,有统计学差异(P<0.05)。性染色体非整倍体导致拟常染色质区(PARs)非整倍体,16种异常核型中14种存在PARs区非整倍体,PARs区非整倍体的异常率占全部性染色体非整倍体93.93%(232/247)。3.45,X/46,XY嵌合体及其衍生核型中AZF微缺失检出率为87.5%(7/8),多为AZFb+c区缺失。4.XX-男性综合征形成的原因多是由于Xp-Yp易位,导致性别决定基因(SRY)易位至X染色体,占比92.86%(13/14)。5.联合应用染色体微阵列检测、特异性探针-荧光原位杂交检测、AZF微缺失检测等方法,诊断了t(Y;D/G组)染色体易位2例、X/Y染色体不平衡易位1例、Y染色体结构异常嵌合体1例、Y染色体来源的小标记染色体2例。6.染色体平衡性结构异常NOA患者睾丸体积、FSH、LH、睾酮水平接近正常男性。16例平衡性结构异常共检出31个断裂点,分布于18条染色体上。5q15、11q25、22q13断裂点发生频率均为二次,提示其断裂点上相关生精基因与NOA发生有关。7.STS-PCR法在868例NOA患者中检出109例AZF微缺失,检出率12.56%。NGS法在572例NOA患者中检出172例AZF区变异,检出率30.07%。检出异常不仅包括传统微缺失类型,还包括多种AZF亚区缺失模式。单纯缺失7类,其中AZFb+c区部分缺失及AZFc区部分缺失又分12种缺失模式。单纯重复3类,其中AZFc区部分重复分为2中重复模式。重复+缺失9类。缺失+倒位1类。多种AZF亚区变异导致Y染色体不稳定性增加。8.通过生精基因Panel筛查分析,检出TEX11基因突变2例及AR基因突变1例。TEX11(c.1985T>C,p.Leu662Pro)及AR(c.528C>A,p.Ser176Arg)可能是NOA的致病位点。TEX11突变导致生精阻滞于精原细胞及初级精母细胞早期阶段。AR基因突变的临床表型不完全表现为雄激素不敏感,具有异质性。本研究生精基因Panel筛查的检出率2.21%(3/136)。9.WES检测结果显示,NOA患者组检出已经过验证的NOA相关基因6个(TEX15、BRCA2、FAM47C、MEIOB、SYCP3、TDRD7)。通过NOA组及对照组RVAS分析,筛选出最显着(P<0.0001,OR>1)基因5个(DHRS4、WARS、PICK1、RRBP1、ENTPD2)及校验合格(P=0.0001~0.05,在睾丸中表达>6,OR值>6或因对照组未检出而无法估计)基因187个,其中包括已经过验证的NOA相关基因3个:BRCA2、TDRD7、SYCP3。10.对最显着基因(5个)、校验合格基因(184个)、校验合格的已经过验证的NOA相关基因(3个)及文献中已经过验证的NOA相关基因(28个)进行蛋白互作关联分析,得到117个关联蛋白,结果显示这些关联蛋白集中于减数分裂相关的蛋白互作通路。11.对11个被召回的家系进行一代测序验证及家系关联分析,结合RVAS分析及蛋白互作关联分析,得到6个家系验证过的生精相关基因:ACTL8、TRA2B、IDE、FIBP、NUP37、PIGT。12.WES检测结合生信分析共筛出9个生精基因:ACTL8(家系验证)、TRA2B(家系验证)、IDE(家系验证)、FIBP(家系验证)、NUP37(家系验证)、PIGT(家系验证)、BRCA2(文献验证)、TDRD7(文献验证)、SYCP3(文献验证),检出率为6.76%(9/133)。研究结论1.性染色体非整倍体是NOA染色体异常的主要类型。X染色体全部或部分重复可导致严重生精障碍。染色体断裂点5q15、11q25、22q13可能与精子发生相关,可能存在生精相关基因。2.AZF亚区存在多种变异形式(部分缺失、部分重复、部分缺失+部分缺失、部分缺失+倒位等),可能是通过影响Y染色体稳定性导致NOA。3.TEX11(c.1985T>C,p.Leu662Pro)及AR(c.528C>A,p.Ser176Arg)可能为NOA致病变异。生精基因Panel筛查检出率为2.21%。4.家系验证ACTL8、TRA2B、IDE、FIBP、NUP37、PIGT基因及已经过验证的BRCA2、TDRD7、SYCP3基因可能与NOA发生相关。WES及RVAS对NOA可能的致病候选基因检出率为6.76%。
王艳芳[2](2021)在《基于问卷调查、回顾性病例分析及全外显子测序的性发育异常相关肿瘤的研究》文中认为第一部分中国妇产科医师对性发育异常的诊治现状及肿瘤风险认识的全国性横断面调查目的:性发育异常(Disorders of sex development,DSD)是一组复杂的先天性疾病,需要多学科管理,妇产科发挥着重要作用,尤其是在预防肿瘤发生方面。然而,该领域目前的诊治现状未知。本次调研旨在了解妇产科医师在DSD的诊治现状以及对肿瘤风险的认识,为进一步规范DSD的管理、改善临床实践提供参考资料。方法:2020年6月到8月,在全国最大的妇产科培训教育平台发起网络问卷调查。问卷内容主要包括:人口统计学资料、诊疗行为,肿瘤风险认识等。统计方法:计数资料使用频数、百分比来表示,采用卡方检验进行差异分析,必要时使用对应分析直观展示两个变量的关系;连续变量表示为均数±标准差,通过单因素方差分析比较组间差异。影响因素分析采用二元或多分类Logistics回归分析。结果:网络问卷被浏览5505次,共回收5244份问卷,响应率95.3%,剔除无效问卷249份,最终4995份纳入统计分析,有效率达90.7%,调研覆盖全国3 1个省、自治区、直辖市。(1)中国妇产科医师基本情况:参与调研的妇产科医师以女性为主,占96.2%,年龄集中在36~55岁(73.3%);70.9%的医师从业时间超过10年;51.5%来自综合医院,42.9%来自妇幼/生殖专科医院;83.9%来自二级及以上医疗机构;专业覆盖了普通妇科(68.1%)、妇科/生殖内分泌(6.9%)、妇产科(非分科)(2.9%)、妇科肿瘤(1.5%)以及产科(20.5%)。(2)DSD的诊治情况:41.0%的医师表示在2019年接诊过1~20个DSD患者;接诊过21~40人和大于40人的分别占0.9%和0.4%。53.9%的医师认为DSD的发生率很少,但>1%,29.8%认为发生率<1%。接诊DSD的主要是妇科/生殖内分泌医师,集中在三级、二级医院和综合医院、妇幼/生殖专科医院。(3)最关注的临床问题:妇产科医师普遍关注的问题包括性器官的发育(83.2%)、心理健康(77.4%)、婚育问题(74.8%)、性别问题(71.9%)、第二性征(69.6%)、肿瘤风险增加(69.4%)、生长发育(61.5%)和家庭负担(45.1%);关注血压和电解质仅占16.7%和13.2%。其分布不受医师的从业时间以及所在医院性质影响(P>0.05);而与医院级别、专科类型密切相关(P<0.01),三级医院的妇产科医师和妇科/生殖内分泌医师关注的问题更全面。(4)手术指征及手术时机:盆腔包块(66.7%)、外阴畸形(65.8%)是最普遍认同的手术指征;仅29.4%的医师认为含Y染色体DSD需要手术。手术指征的把握受从业时间、医院级别、医院性质、专科类型影响(P<0.01),妇幼/生殖专科医院医师更倾向于选择含有Y染色体,妇科医生(未分专科)更可能选择盆腔包块,妇产科医生(未分科)则倾向于选择外阴畸形作为手术指征。关于手术时机,无论是何种DSD,选择不清楚的比例最高,占43.3%~44.6%。(5)DSD肿瘤风险的认识:腹腔内性腺(42.3%)、性腺发育不良(40.8%)、含有Y染色体(37.4%)以及腹股沟管内性腺(30.6%)是4个最普遍认同的危险因素。66.8%的医师认识到DSD与性腺肿瘤是部分相关,不受医师背景的影响。(6)自我评价:91.9%的医师表示对DSD相关知识了解不足;如开展相关继续教育培训,75.4%表示非常愿意,20.4%表示有时间就参加。结论:大部分的妇产科医师对DSD的诊治管理及肿瘤风险认识存在较大误区:对DSD患者血压、电解质关注不足;手术指征把握不全面,手术时机不清晰;对肿瘤发生的危险因素认识不足等。大部分医师对自身的该领域知识掌握情况不满意,并且非常希望参加相关培训。第二部分DSD诊治特点及性腺肿瘤相关影响因素回顾性分析目的:通过回顾近10年的DSD病例,总结不同分类DSD的临床及诊治特点,分析目前疾病谱,并探索性腺肿瘤发生的相关危险因素,为进一步开展深入的机制研究提供临床依据。方法:回顾分析2010年1月~2020年12月在北京协和医院妇产科病房进行手术治疗的DSD病例,按照分类总结其临床及诊治特点;并根据是否合并性腺肿瘤分为病例组及对照组探索肿瘤发生的相关危险因素。结果:共检索到423例DSD患者,根据入排标准筛选出412例最终纳入分析,平均年龄20.0±6.7岁,中位随访时间366天,不同类型DSD的纳入情况:250 例(60.7%)46,XY DSD,83 例性染色体 DSD(20.1%)和79例46,XX DSD(19.2%)。其中病例组77例和对照组335例。(1)人口统计学资料:46,XX DSD与46,XY DSD的年龄分布无显着差异,分别为21.8±7.5岁和20.2±6.4岁,高于性染色体DSD,17.8±6.2岁。不同类型DSD的身高、体重均有显着差异:46 XY DSD(165.7±10.5cm,60.1±15.0kg)>46 XX DSD(153.8±8.9cm,53.0±10.7kg)>性染色体 DSD(145.0±21.50cm,48.4±16.3kg),P<0.01。46,XXDSD与46,XY DSD的血压无显着差异,高于性染色DSD。(2)诊治特点:外阴畸形是46,XY DSD最常见的主诉及手术指征;46,XYDSD最常见的主诉是原发闭经;性染色体DSD则更可能由于生长发育迟缓、颈蹼等就诊。预防肿瘤发生是46,XYDSD与性染色DSD最常见的手术指征。DSD性腺肿瘤(良恶性)发生率是18.7%(77/412)。常见的病理类型是性腺母细胞瘤(35.1%)、无性细胞瘤(26.0%)和支持细胞瘤(23.4%)。(3)性腺肿瘤相关影响因素1)性激素水平:校正年龄、DSD分类后,促黄体生成素、孕激素水平与肿瘤发生相关,其中促黄体生成素产生正向影响关系(adjusted OR:1.022,95%CI:1.008~1.036),而孕激素产生负向影响关系(adjusted OR:0.923,95%CI:0.863~0.987)。2)Y染色体/序列:含Y组肿瘤的发生率为21.4%,不含Y组为8.2%。校正年龄及DSD分类后,含Y组的肿瘤风险是不含Y组的3.89倍(adjusted OR:3.89,95%CI:1.35~11.27)。3)DSD分类:不同类型DSD的肿瘤发生率分别是23.6%(46,XY DSD),15.7%(性染色体 DSD)和 6.3%(46,XXDSD)。校正年龄后,46,XYDSD 的肿瘤发生率是 46,XXDSD 的 4.55 倍(adjusted OR:4.55,95CI%:1.75~11.80);性染色体DSD与46,XXDSD之间肿瘤发生率差异不显着(adjusted OR:2.72,95%CI:0.91~8.09)。4)DSD病因诊断:与性腺发育不全(肿瘤发生率29.3%)相比,SRY阳性的特纳综合征、雄激素不敏感综合征(完全型)、17a羟化酶缺乏的肿瘤发生率无显着差异,分别为37.5%、21.2%和16.1%,P>0.05;雄激素不敏感综合征(部分型)(3.1%)和21羟化酶缺乏(1.6%)的肿瘤发生率明显较低,P<0.05。结论:不同类型DSD的临床特征、诊治特点及肿瘤风险不同。特纳综合征的Y片段检测可能有助于降低肿瘤风险。含有Y物质、较高的促黄体生成素、以及较低的孕激素水平与性腺肿瘤风险增加相关。第三部分基于全外显子测序的DSD性腺肿瘤发生机制研究目的:DSD性腺肿瘤的发生、发展机制尚不明确,二代测序技术开启了肿瘤研究新局面,本研究拟通过全外显子测序探索DSD性腺肿瘤的发生、发展的机制。方法:选取近3年确诊DSD并进行了性腺切除,病理证实合并性腺肿瘤的1 1例患者,对其石蜡标本进行全外显子测序,测序数据进行生物信息学分析,得到肿瘤突变频谱,并筛选出肿瘤易感基因、肿瘤驱动基因、高频突变基因,对相关基因进行功能注释及富集分析。结果:共检测出231974个变异位点,C>T/G>A是肿瘤样本中最高频的突变类型;筛选出7个易感基因,均为错义突变,在9个生物过程存在富集,涉及胚胎发育调控、胚胎器官发育、组织发育等。8个已知驱动基因在骨髓细胞分化(GO:0030099)、宫内胚胎发育(GO:0001701)生物过程和癌症中的转录失调(hsa05202)通路存在富集,涉及精原细胞瘤(C003663)、发育不全(C0002793)等疾病通路。在3个高频突变基因中,ACVR1B同时也是肿瘤驱动基因,与精原细胞瘤发生密切相关。结论:DSD性腺肿瘤的发生受多基因、多途径影响,ACVR1B是重要候选基因;胚胎发育相关的基因突变可能会增加性腺肿瘤风险。
汤冬冬[3](2021)在《人类特发性非梗阻性无精子症的致病基因筛查及功能探讨》文中认为研究背景:不育症已经成为一个21世纪全球性的健康问题,大约困扰着8%-12%的育龄夫妇。在不育症的病因中,男女双方大约各占一半左右,其中由男方因素所导致的不育症,称为男性不育症。在男性不育症中,非梗阻性无精子症(non-obstructive azoospermia,NOA)被认为是临床上最严重的类型,约占男性不育症病因的3%-5%左右。作为NOA患者中发生率最高的特发性NOA,一般很少能找到明确的致病因素,其发生可能受到遗传和环境因素等多方面的影响,一些单基因突变也被发现可能会导致NOA的发生,如TEX11,FANCM,STAG3等。目的:以特发性NOA患者为研究对象,通过全外显子测序技术(Whole exome sequencing,WES),联合生物信息学分析,筛选并鉴定与NOA相关的已知致病基因的相关变异,同时筛选NOA的未知候选基因,以期为特发性NOA的基因诊断、遗传咨询及个体化治疗提供理论依据。方法:收集来自安徽医科大学第一附属医院生殖医学中心的60例特发性NOA患者进行编号(NOA1-NOA60),对其外周血样进行全外显子测序。首先,对测序获得的数据进行变异筛选及生物信息学分析,筛选已知致病基因突变及新的候选致病基因突变:第一步比对目前已知的NOA致病基因及遗传模式,筛选已知致病基因突变;第二步在已知致病基因不能解释的病例中,重点关注罕见、有害的睾丸特异表达/高表达的基因,以期发现特发性NOA新的候选基因。其次,针对发现的已知致病基因突变和候选致病基因突变通过Sanger测序验证测序结果的准确性以及进行家系共分离分析,以明确基因突变的家系来源。最后,通过HE染色、免疫荧光共染不同生精细胞标记物等技术分析不同基因变异的特发性NOA患者睾丸组织的病理类型,并且通过免疫荧光技术、免疫组化、实时荧光PCR以及Western Blot技术检测候选致病基因在人类睾丸组织中的定位及定量表达情况。结果:首先,通过变异筛选及生物信息学分析,我们在5例患者中发现了3个新的NOA候选致病基因——HFM1、FER1L6以及SRRM5突变:(1)在患者NOA5和NOA26中我们分别发现并鉴定了HFM1基因的纯合突变。其中NOA5患者携带HFM1基因的纯合无义突变(NM_001017975:exon32:c.3490C>T:p.Q1164X);NOA26患者携带HFM1基因的纯合错义突变,软件预测突变位点是有害的。两例患者睾丸组织病理类型鉴定为精母细胞停滞型NOA,免疫荧光实验提示HFM1蛋白主要表达于对照组睾丸组织生精小管内的精母细胞的细胞核中,而在患者NOA5和NOA26睾丸组织中的表达显着减少,QRT-PCR实验及Western Blot实验提示两例患者的HFM1m RNA和蛋白表达水平显着降低。(2)在患者NOA8和NOA44中发现并鉴定了FER1L6的双等位基因突变。其中患者NOA8携带FER1L6基因的纯合错义突变(NM_001039112:exon9:c.722C>T:p.P241L),软件预测突变位点是有害的,患者睾丸组织病理类型鉴定为唯支持细胞综合征型NOA;在患者NOA44中,我们发现了FER1L6基因的复合杂合突变(NM_001039112:exon13:c.1693G>A:p.G565R/exon23:c.2905del C:p.P969fs),患者睾丸组织病理分析鉴定为精母细胞阻滞型NOA。通过免疫荧光实验,我们发现FER1L6蛋白主要表达于对照组睾丸组织生精小管内,而在患者NOA5和NOA26睾丸组织中的表达显着减少。(3)在患者NOA10中发现并鉴定了SRRM5的纯合突变(SRRM5:NM_001145641:exon1:c.1531C>T:p.Q511X),患者的病理表型鉴定为精母细胞停滞型NOA。其次,我们通过比对分析目前已知的NOA致病基因,我们在10例患者共发现7个已知致病基因的多个有害突变,包括3个隐性遗传基因,2个X连锁遗传基因以及2个显性遗传基因。(1)3个隐性遗传致病基因:(1)在患者NOA2中发现并鉴定了MSH4基因的罕见纯合突变(MSH4:NM_002440:exon12:c.1552C>T:p.Q518X),患者睾丸组织病理类型鉴定为精母细胞停滞型NOA。免疫荧光实验提示MSH4蛋白主要表达于对照组睾丸组织生精小管内的精母细胞中,而在NOA2患者睾丸组织中未见明确表达,QRT-PCR实验也提示患者的MSH4-m RNA表达水平显着降低。(2)在患者NOA9中发现MEI1基因的纯合片段缺失(MEI1:NM_152513.3:exon19-intron19:c2262_2268+9del ACGTGAGGTATGGACC)。(3)在患者NOA16中我们发现并鉴定了FANCA基因的纯合错义突变(FANCA:NM_000135:exon33:c.3263C>T:p.S1088F),患者睾丸组织病理表型鉴定为唯支持细胞综合征型NOA;在患者NOA50中我们发现并鉴定了FANCA的两个错义突变(FANCA:NM_000135:exon19:c.1729C>G:p.P577A/exon33:c.3263C>T:p.S1088F),患者睾丸组织病理表型鉴定为唯支持细胞综合征型NOA。(2)2个X连锁遗传致病基因:(1)在患者NOA7中发现了AR基因的一个半合子错义突变(AR:NM_000044:exon5:c.2263T>C:p.F755L),该患者睾丸组织病理类型鉴定为唯支持细胞综合征型NOA。(2)分别在患者NOA39和患者NOA49中发现了一个X连锁的NOA已知致病基因TEX11的半合子错义突变(NM_031276:exon7:c.466A>G:p.M156V)以及半合子移码突变(NM_031276:exon8:c.559_560del:p.M187fs),这2例患者睾丸组织的表型分别为精子发生低下型NOA和精母细胞阻滞型NOA。(3)2个显性遗传致病基因:(1)在患者NOA22和NOA25中我们分别发现并鉴定了一个已知NOA显性遗传致病基因DMRT1的杂合错义突变(DMRT1:NM_021951:exon2:c.425C>T:p.A142V以及exon1:c.340G>A:p.V114M),2例患者睾丸组织病理表型鉴定均为唯支持细胞综合征型NOA。(2)在患者NOA42中我们发现并鉴定了一个已知NOA显性遗传致病基因PLK4的杂合有害错义突变(PLK4:NM_001190799:exon15:c.2785A>G:p.M929V),患者睾丸组织病理表型鉴定均为唯支持细胞综合征型NOA。结论:通过全外显子测序结合Sanger测序验证技术可以高效的鉴定NOA的已知致病基因,在我们的60例NOA患者中,已知致病基因突变可以解释16.67%的病例;其中来自于近亲婚配家庭的特发性NOA患者已知基因突变所致的比例高达30%,因此,这类患者有更高的遗传风险,建议进行深入的遗传学检测指导临床治疗。另外,我们的研究结果也提示HFM1和FER1L6是很可能NOA新的候选致病基因,其纯合或者复合杂合突变可能导致NOA的发生。我们的发现为特发性NOA患者的基因诊断及遗传咨询提供了一些新的理论依据,为这类患者的个体化治疗提供了参考。
王平[4](2020)在《SOX30基因在雄性生殖发育毒性中的作用及机制初步研究》文中指出研究背景:近50年以来,人类的平均寿命已得到显着提高,但是生殖健康总体水平却呈现出下降的趋势。根据文献的统计分析,从1973到2011年,全球男性精子总数和密度分别降低约5.33×106个/年和0.7×106/m L.年[1-2];同时临床上各种男性生殖疾病的发病率也在逐渐增加[3-4]。已有的研究表明,基因与环境交互作用是造成男性生殖功能损伤尤其是生精障碍等不孕不育的重要原因之一[5]。其中,邻苯二甲酸酯(PAEs)是人类体液中最常被检出的环境有机污染物,其中又以邻苯二甲酸二丁酯(DBP)为代表受到广泛研究。目前的研究表明,DBP可以诱导雄性生殖损害,DBP暴露后导致睾丸生精细胞早熟脱落和精子数量下降,具有支持、营养和保护生精细胞功能的支持细胞内蛋白骨架解聚是生精细胞早熟脱落的重要节点[6-10]。尽管DBP生殖发育毒性已有大量的研究报道,但其分子机制还未充分阐明。SOX蛋白是一类基因转录调控分子,在生殖细胞的发生、分化和成熟等过程中起重要的调控作用,同时也参与了包括癌症在内的众多疾的发生[11,12]。SOX30基因是最近发现的SOX家族成员,本课题组前期也首次报道,在成体小鼠睾丸中SOX30基因低甲基化而高水平表达,推测SOX30可能在维持正常的雄性生殖功能方面具有重要作用[13]。最新的国内外一些报道也表明SOX30基因是精子形成所必需的,与睾丸发育紧密相关[14-16],但是SOX30基因在生殖系统发育中的功能和机制尚不清楚。此外,在前期研究中,我们发现DBP处理诱导的睾丸病理损伤和生精过程中,SOX30基因表达发生改变,提示SOX30可能在DBP诱导的雄性生殖损伤中发挥作用,但是二者的应答作用和机制还需实验证实。本研究拟通过SOX30基因敲除小鼠模型,分析不同基因型雄性小鼠的各脏器组织的病理特征,评价SOX30在生殖发育中的潜在作用。其次,通过DBP诱导的TM4细胞体外损伤模型及SOX30差异表达TM4细胞模型,探讨SOX30在DBP诱导的TM4细胞增殖抑制中的作用和分子机制。研究方法:1.SOX30基因敲除对雄性小鼠各重要脏器组织形态及生殖功能的影响通过基因重组构建SOX30基因敲除小鼠并进行PCR鉴定基因型,称重各脏器质量并计算脏器指数(包括心、肝、脾、肺、肾、大脑、胸腺、睾丸、附睾和骨髓),显微观察不同基因型小鼠各脏器组织结构和形态特征,分析SOX30基因敲除对小鼠各脏器发育的作用。重点观察睾丸、附睾组织形态及附睾精子数目,检测睾丸组织激素水平,分析SOX30对生殖功能的影响。2.SOX30在DBP致TM4细胞增殖抑制中的作用及机制体外构建DBP诱导TM4细胞损伤模型,通过CCK8法分析DBP染毒对TM4细胞形态及增殖的影响,流式细胞术(FCM)检测DBP染毒后TM4细胞周期的变化,PCR及WB检测周期相关分子蛋白。通过慢病毒感染和si RNA干扰技术构建SOX30差异表达TM4细胞模型,并采用通过FCM、WB和PCR法分别检测SOX30差异表达后TM4细胞周期及相关分子的表达变化。在此基础上,采用FCM法检测DBP处理及SOX30干扰后TM4细胞周期变化,验证DBP通过调控SOX30表达诱导TM4细胞周期阻滞的作用及机制。研究结果:1.SOX30基因敲除可导致雄性小鼠部分脏器病理损伤及生精障碍(1)野生型(WW)、杂合型(KW)和纯合型(KK)雄性小鼠体质量之间未见差异(P>0.05);KK组小鼠睾丸脏器指数较WW和KW组明显降低(P<0.05);提示SOX30基因敲除影响雄性小鼠睾丸发育。(2)显微观察一般脏器组织病理形态特征发现,与WW组和KW组比较,KK组雄性小鼠的部分脏器结构和形态发生改变:?大脑神经元及胶质细胞数量减少,胶质纤维结节形成;?肝细胞显着增生;?脾脏红髓增生;(4)骨髓巨核成簇伴小梁旁异常分布。结果提示:SOX30敲除可潜在影响大脑、肝脏、脾脏发育和造血细胞分化。(3)通过对不同基因型雄性小鼠性腺病理形态观察发现,与WW组和KW组比较,KK组雄性小鼠睾丸组织体积和曲细精管直径变小(P<0.05),曲细精管内生精细胞脱落,可见空泡变性和巨细胞,管腔中央无梭形精细胞;KK组附睾病理和精子涂片中未见精子,提示SOX30敲除可导致小鼠生精障碍。通过ELISA法检测3组基因型雄性小鼠睾丸组织中T和INH-B的水平,结果发现:与WW和KW组比较,KK组小鼠睾丸组织匀浆中T和INH-B显着下降(P<0.05)。表明敲除SOX30可影响小鼠睾丸T和INH-B合成分泌。2.SOX30基因参与DBP诱导的TM4细胞增殖抑制(1)DBP处理可诱导TM4细胞G1期阻滞通过CCK8法实验发现DBP暴露下可显着抑制TM4细胞增殖,且与DBP暴露诱导TM4细胞G1期阻滞有关;PCR检测发现DBP处理后细胞周期调控分子CDK2、CDK6下降,SOX30表达量明显上调(P<0.05)。提示DBP处理可诱导TM4细胞G1期阻滞,SOX30、CDK2、CDK6等是候选的调控分子之一。(2)干扰SOX30基因表达可部分恢复DBP诱导的TM4细胞G1期阻滞利用慢病毒感染构建的SOX30过表达TM4细胞模型,发现SOX30过表达可诱导细胞G1期阻滞。PCR和WB验证发现SOX30过表达后细胞周期相关调控分子CDK2和CDK6降低。同时,在si RNA转染的SOX30敲低细胞模型中,我们发现DBP暴露诱导的TM4细胞G1期能够部分恢复,细胞周期分子CDK2和CDK6的表达也显着升高,进一步证实SOX30参与了DBP诱导的TM4细胞G1期阻滞,且CDK2和CDK6是SOX30发挥调控作用的重要分子。结论:1.SOX30敲除可导致小鼠大脑、肝脏、脾脏出现病理损伤,并导致骨髓造血细胞分化发育异常,提示SOX30基因可能在大脑、脾脏和骨髓造血中具有重要的调控作用,可能参与多种脏器的功能调节。2.SOX30敲除可导致小鼠睾丸组织病理损伤、睾丸T和INH-B激素合成分泌异常并导致精子生成障碍,提示SOX30基因在小鼠睾丸发育及生精过程中具有重要作用,3.SOX30参与调控DBP诱导的TM4细胞G1期阻滞,CDK2和CDK6是SOX30参与调控通路中的重要下游分子。
闵潇[5](2020)在《益精方调控慢性缺氧诱导的睾丸Leydig细胞凋亡治疗LOH的机制研究》文中进行了进一步梳理研究目的:1.研究症状性迟发性性腺功能减退症(symptomatic late onset hypogonadism,sLOH)患者的中医体质证候。2.研究人体慢性间歇性缺氧与sLOH之间的相关性。3.构建及评判慢性间歇性缺氧诱发迟发性性腺功能减退症(late onsethypogonadism,LOH)动物模型。4.传承名老中医经验,研究以补肾活血为主要治则的“益精方”对慢性间歇性缺氧诱导的LOH模型大鼠治疗效果;从睾丸间质细胞(Leydig)凋亡、睾丸病理组织学改变及Leydig细胞超微结构改变探讨其作用机制。研究方法:第一部分:采用横断面研究的方法,以自填问卷的形式,收集在中国中医科学院广安门医院男科就诊的伴有鼾眠表现的sLOH患者的病例资料。采用Epworth嗜睡量表、STOP-bang问卷测评嗜睡状态,采用精简版AMS(cAMS)筛查量表测评LOH症状,中医体质分类与判定表测评中医体质,测定静脉血男性激素和乳酸。运用Pearson相关性分析,对血乳酸、性激素与sLOH症状、嗜睡状态进行相关性分析。第二部分:运用Attendor动物气体控制系统(Pro版),模拟慢性间歇性低氧模式,对50只40周龄的退役SD种鼠进行每日4小时,连续30天的低氧干预,设为模型组;设10只40周龄的退役SD种鼠为对照组;设10只8周龄的SD大鼠为正常组。在造模第15天、30天时,随机选取模型组中的10只大鼠,与对照组、正常组大鼠,采血,进行血清总睾酮(TT)、游离睾酮(FT)和乳酸检测。在造模第30天时,随机选取模型组中10只大鼠与对照组、正常组大鼠,进行大鼠悬尾实验和大鼠强迫游泳实验;结合血清TT、FT和乳酸水平评估造模效果。第三部分:选取造模成功的32只LOH模型大鼠,随机分成4组:模型组,益精方高、中、低剂量组,每组8只大鼠。继续运用Attendor动物气体控制系统(Pro版)对大鼠进行慢性间歇性低氧的干预,为期4周,同时灌胃4周。模型组大鼠按体重灌胃蒸馏水。低剂量组予以0.324g/mL的益精方水煎剂;中剂量组予以0.75g/mL的益精方水煎剂;高剂量组予以1.5g/mL的益精方水煎剂。4周结束后,采血,ELISA法测血清TT、FT;比色分析法测血乳酸值;将大鼠断颈处死,计算大鼠睾丸指数;细胞流式术检测睾丸Leydig细胞凋亡率;Western印迹检测睾丸组织Caspase-3、Bcl-2、Bax的蛋白表达水平;实时荧光定量PCR检测睾丸组织Caspase-3、Bcl-2、Bax的mRNA表达水平;分别以光学显微镜和透射电子显微镜观察睾丸病理组织学改变与超微结构的变化。研究结果:第一部分:sLOH患者排名前三的中医体质证候为气虚、痰湿、血瘀。41例sLOH患者完成了男性激素和乳酸检测,其中20例乳酸水平正常,21例乳酸水平高于正常,异常乳酸值范围为2.15-3.18(2.60±0.29)mmol/L,sLOH患者血乳酸异常比例约为51%。其中乳酸水平正常者气虚为主,乳酸水平增高者痰湿为主,但无论乳酸水平正常与否,血瘀均是sLOH患者比较突出的体质证候。Pearson相关性分析显示:Epworth评分与STOP-bang评分之间呈正向的强相关,r=0.681;cAMS评分与Epworth评分之间呈正向的弱相关,r=0.394;cAMS评分与STOP-bang评分之间呈正向的弱相关,r=0.311。Epworth评分与cAMS性功能症状分呈正向弱相关,r=0.317;Epworth评分与cAMS自主神经紊乱症状分呈正向中等强度相关,r=0.531;Epworth评分与cAMS心理和躯体症状分呈正向中等强度相关,r=0.460;STOP-bang评分与cAMS性功能症状分呈正向弱相关,r=0.357;STOP-bang评分与cAMS自主神经紊乱症状分呈正向弱相关,r=0.266;STOP-bang评分与cAMS心理和躯体症状分呈正向中等强度相关,r=0.434。乳酸正常sLOH组与乳酸升高sLOH组两组间,在年龄、Epworth嗜睡量表评分、STOP-bang问卷评分、cAMS评分、男性激素各项指标及TSI指数上的差异无统计学意义(P>0.05);缺氧高中低风险3组,年龄在缺氧中风险组和缺氧低风险组之间存在统计学差异(P<0.05),血雄烯二酮在缺氧高风险组和缺氧低风险组之间存在统计学差异(P<0.05),其余指标在各组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。第二部分:与正常组和对照组相比,模型组大鼠造模第15天、第30天时2次检测的血清TT、FT水平均显着下降(P<0.05),差异具有统计学意义。与正常组和对照组相比,模型组大鼠2次检测的血乳酸水平均显着增高(P<0.05),差异具有统计学意义。造模第30天时悬尾实验:与正常组大鼠相比,对照组和模型组6min内不动时间均明显延长(P<0.05),具有统计学意义;模型组与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。游泳实验:与正常组和对照组相比,模型组大鼠游泳至力竭的时间均明显缩短(P<0.05),差异具有统计学意义。依据LOH动物模型判定办法,以慢性间歇性缺氧为干预手段进行LOH动物模型构建,造模成功率为68%,造模途中死亡率为32%。第三部分:血TT、FT水平:与模型组相比,益精方低、中、高剂量组大鼠血TT、FT水平均显着增高(P<0.05),呈剂量依赖性。血乳酸水平:与模型组相比,益精方低、中、高剂量组大鼠血乳酸水平均显着下降(P<0.05),呈剂量依赖性。睾丸Leydig细胞凋亡率:与模型组相比,益精方中、高剂量组大鼠Leydig细胞凋亡率均显着下降(P<0.01),具有显着统计学意义;益精方低剂量组与模型组相比,P>0.05,无明显统计学意义。Caspase-3蛋白表达水平方面:与模型组相比,低、中、高剂量组均显着下调(P<0.01),低剂量组VS中剂量组,中剂量组VS高剂量组,P均>0.05;低剂量组VS高剂量组,P<0.01。Bcl-2蛋白表达水平方面:与模型组相比,益精方高剂量组Bcl-2蛋白表达水平显着上调(P<0.05),差异具有统计学意义;低、中剂量组VS模型组,P均>0.05,低剂量组VS高剂量组,P<0.05。Bax蛋白表达水平方面:与模型组相比,益精方中、高剂量组Bax蛋白表达水平均显着下调(P<0.01),差异具有显着统计学意义。低剂量组VS模型组,P>0.05;低剂量组VS高剂量组,P<0.05;中剂量组VS高剂量组,P>0.05。Caspase-3的mRNA表达水平方面:与模型组相比,低、中、高剂量组Caspase-3的mRNA表达水平均显着下调(P<0.05),差异具有统计学意义;低剂量组VS高剂量组(P<0.01),其余剂量组之间P均>0.05。Bcl-2的mRNA表达水平方面:与模型组相比,益精方高剂量组Bcl-2的mRNA表达水平显着上调(P<0.05),差异具有统计学意义;中、低剂量组VS模型组(P>0.05);低剂量组VS高剂量组(P<0.05)。Bax的mRNA表达水平方面:与模型组相比,益精方中、高剂量组Bax的mRNA表达水平均显着下调(P<0.01),差异具有显着统计学意义;低剂量组VS高剂量组(P<0.05),其余剂量组之间P均>0.05。光学显微镜下睾丸Leydig细胞数量:与模型组相比,益精方低、中、高剂量组均有升高,但低、中、高剂量组组间差异不大。发生凋亡改变的Leydig细胞数量,益精方低、中、高剂量组均少于模型组。益精方低、中、高剂量组Leydig细胞形态优于模型组,其中高、中剂量组Leydig细胞形态趋近正常。透射电子显微镜下,4组大鼠的睾丸Leydig细胞超微结构在脂滴形成上有所差异。研究结论:1.在伴有鼾眠表现的sLOH患者中存在血乳酸异常升高;sLOH患者缺氧的风险越高,其LOH症状越重;缺氧对sLOH患者自主神经紊乱症状、心理和躯体症状的影响较明显,对男性激素的影响相对不明显。提示慢性间歇性缺氧可能是LOH的重要潜在危险因素。sLOH患者的中医体质证候以气虚、痰湿、血瘀为主,其中乳酸水平正常者倾向于气虚,乳酸水平增高者倾向于痰湿。提示肾气虚夹痰湿、血瘀可能是sLOH较为关键的中医病因病机。2.增龄与慢性间歇性缺氧,都是大鼠血TT、FT水平下降的危险因素;增龄加上缺氧,较单一的增龄因素,对大鼠血TT、FT水平的影响更为显着。以慢性间歇性缺氧为干预手段进行LOH动物模型构建,造模成功率较高,造模方法切实可行。3.益精方能明显提高慢性间歇性缺氧诱导的LOH模型大鼠血TT、FT水平,降低血乳酸水平,降低睾丸Leydig细胞的凋亡率。其可能的作用机制在于:1)下调LOH模型大鼠睾丸组织中的Caspase-3、Bax的基因和蛋白表达,上调Bcl-2的基因和蛋白表达,调控了睾丸Leydig细胞的凋亡;2)改善LOH模型大鼠氧代谢,减轻乳酸蓄积,恢复雄激素合成睾丸内调节的正常环境,促进睾丸Leydig细胞分泌功能。
张永超[6](2020)在《超声应变弹性RTE及血清INHB评价无精症睾丸生精功能的价值探讨》文中研究指明背景:当今社会不孕不育患者越来越多,男性方面常表现为无精症,尤其是非梗阻性无精症(Non-obstructive azoospermia,NOA)更为多见,目前该部分患者可通过睾丸穿刺活检取精进而体外试管受孕。然而常规活检创伤性较大,并不首选,故有必要探寻微创甚至无创手段来替代睾丸活检。近年来,实时超声弹性成像(Real-time sonoelastography,RTE)在评价无精子症患者生精功能方面进行探索,显现出良好的临床应用前景。同时,众多研究表明,血清抑制素B(Inhibin-B,INHB)在评估睾丸生精功能方面也有较好的应用价值。目的:1.探究无精症患者睾丸超声应变弹性RTE和血清INHB的不同,以期寻找一种无创、无痛、易于操作的手段来评价无精子症患者睾丸生精能力;2.探究超声RTE结合血清INHB指导NOA患者细针穿刺抽吸活检精子检出率。方法:选取我院2018年7月-2019年11月男科收治的无精子症患者,严格按照纳入标准,纳入梗阻性无精症(Obstructive azoospermia,OA)组40例,NOA组69例,正常对照组54例,对163例受试者睾丸进行一般资料分析及超声弹性成像评分法检查和血清INHB浓度测定,同时对NOA患者进行弹性成像应变比值法检查和细针穿刺睾丸抽吸活检(Testicular sperm aspiration,TESA)分析。结果:1.在一般资料统计中,无精症组吸烟率(68.8%)高于正常对照组吸烟率(46.3%),差异均具有统计学意义(P<0.05)。而嗜酒率、年龄和体重指数(Body mass index,BMI)在组间差异不显着(P≥0.05)。2.NOA组中弹性评分3分和4分共占比73.8%,OA组和正常组2分和3分较多,总占比分别77.50%、75.93%,均以两分最多。NOA组、OA组和正常组INHB浓度M(P25,P75)分别28.40(14.20,44.70)、154.10(99.83,234.00)、158.55(110.88,247.00)pg/ml。在NOA组中,无论弹性评分还是血清INHB,其与OA组及正常组比较差异均有统计学意义(P<0.05),而OA组和正常组比较统计学差异不显着(P>0.05)。总体受试者RTE评分和血清INHB呈负相关性(r=-0.634,P<0.001)。3.从NOA患者活检结果来看,TESA取精成功率(Sperm retrieval rate,SRR)为39.1%;睾丸弹性应变率比值(Strain ratio,SR)和血清INHB在TESA(-)、(+)组之间差异均有统计学意义(P<0.001)。SR与INHB浓度之间呈负相关(r=-0.626,P<0.001),表明二者存在负线性相关关系。以TESA为金标准,应用ROC曲线评估SR、INHB及SR联合INHB预测睾丸活检SRR价值,得到SR、INHB、SR+INHB的ROC曲线下面积(Area Under Curve,AUC)分别为:0.89、0.90、0.93。SR及INHB最佳截断值分别为0.46、33.9pg/ml。唯支持细胞综合征型(Sertoli cell only syndrome,SCOS)、生精功能低下型(hypospermatogenesis,HS)和成熟障碍型(maturation arrest,MA)该三组下SR x±s分别为0.66±0.21、0.45±0.12、0.44±0.14,INHB的M(P25,P75)分别为14.10(8.25,24.45)、37.50(27.83,47.75)、32.60(20.48,47.75),无论SR还是INHB,前者病理类型和后两者之间存在统计学差异,而后两者间差异不显着。结论:超声应变弹性RTE和血清INHB均可以作为评估无精症患者睾丸生精功能的指标,对鉴别OA和NOA有一定临床价值。将两者联合应用可以更好预测SRR。SR和血清INHB虽然不能准确预测病理分型,但是对于SCOS患者,可以做出较好预测,避免盲目穿刺,指导临床更有针对性的进行男性不育诊治。
管斯琪[7](2020)在《补肾生精法治疗少弱精子症及其调控生精细胞增殖与凋亡的研究》文中研究说明目的人类生育力逐年降低已经成为影响发展的医学和社会学问题,男性因素导致的不孕不育占了 40%-50%,其中少弱精子症是男性不育症最常见的病因之一。对于特发性精液异常,西药治疗效果欠佳,手术治疗的应用范围存在一定局限性,而中医药具有较好的疗效。菟枸助育汤是在五子衍宗丸的基础上加减化裁而来,临床用于治疗少弱精子症逾20年,但目前尚无相关的研究。故本研究设计临床试验,观察评价菟枸助育汤对男性不育少弱精子症患者的临床疗效,并设计动物实验探究菟枸助育汤的核心药对“菟丝子-枸杞子”对生精功能障碍模型大鼠生精功能的影响,并对其具体的作用机制进行探讨。方法临床研究:收集男性不育少弱精子症76例,采用无病例对照研究的方法,观察菟枸助育汤对少精子症和弱精子症受试者精液质量(包括精液液化状态、精液量、精子活动率、精子浓度和总数等指标)和中医证候评分的干预作用。入组时,采集所有受试者的一般信息、病史、合并用药、体格检查等相关资料。研究第1天起每日给予入组的受试者菟枸助育汤中药免煎颗粒治疗,疗程共90天,分别于第0、30、60、90天各进行一次访视,记录受试者的精液常规结果和中医证候评分,同时进行安全性观察,记录各类不良事件,填写病例报告表,每次访视时严格进行脱落、剔除的评估,最后统计所有数据。实验研究:1.将78只SD大鼠随机分为空白对照组(NC组)、模型对照组(GTW组)、左卡尼汀组(GTW+LEV组)、菟丝子-枸杞子药对组(GTW+SCFL组)和药对+抑制剂组(LY+SCFL组)。2.除NC组以外,其余各组用雷公藤多苷(40mg/kg)灌胃4周,建立生精功能障碍模型。3.第5周起GTW+LEV组(予10ml/kg左卡尼汀灌胃)、GTW+SCFL组(予菟丝子-枸杞子中药液灌胃)和LY+SCFL组(予菟丝子-枸杞子中药液灌胃)每日分别予以相应药物干预,LY+SCFL组于第1周起每周1次尾静脉注射PI3K抑制剂。4.实验8周后测定各组大鼠精子质量、附睾/睾丸脏器系数,检测性激素、抑制素B、附睾肉毒碱的水平,光镜下和透射电镜下观察睾丸的组织病理形态和细胞的超微结构,用免疫组化法、western blot以及Real-Time PCR技术检测大鼠睾丸组织SCF、c-kit、PI3K、p-Akt、Bad、Bcl-2 和 Bax 蛋白及 mRNA 的表达。结果临床研究:本研究共完成临床病例76例,纳入研究的男性不育少精子症和弱精子症患者经过菟枸助育汤治疗后,总体的精液质量中液化状态、PR精子百分比、PR+NP精子百分比、精子浓度和精子总数等疗效性指标显着改善,具有统计学意义(P<0.05或P<0.01);中医证候评分随着治疗进行有了明显的下降(P<0.05或P<0.01);疗效判定为“痊愈”的11例,“显效”29例,“有效”32例,“无效”4例,总有效率为94.74%。整个观察期间脱落病例4例,无剔除病例,未见任何不良反应报告。实验研究:经菟丝子-枸杞子干预后的GTW+SCFL组与GTW组相比,大鼠的一般状态、附睾脏器系数、精子质量、卵泡生成素(FSH)、黄体生成素(LH)、泌乳素(PRL)和附睾肉毒碱均有显着的改善,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);睾丸组织病理形态及细胞的超微结构观察发现,GTW+SCFL组与GTW组比较,生精小管结构、排列较正常,生精细胞明显增多,形态改善,内含的线粒体等细胞器增多;免疫组化、western blot和Real-Time PCR结果显示,与GTW组比较,GTW+SCFL组大鼠睾丸SCF、c-kit、PI3K、p-Akt和Bcl-2蛋白含量升高,Bax、Bad蛋白表达下降(P<0.05或P<0.01);LY+SCFL组与GTW+SCFL组相比,SCF、c-kit和PI3K的表达无明显差异,p-Akt和Bcl-2表达减少,Bad和Bax的蛋白表达增加(p<0.05或P<0.01)。结论1.菟枸助育汤在改善男性不育少弱精子症患者的精液参数和肾虚证候中医评分方面疗效显着,能提高患者的生精功能。2.菟枸助育汤中的核心药对“菟丝子-枸杞子”可以改善生精功能障碍模型大鼠一般状态、附睾脏器系数、精子质量、FSH、LH、PRL和附睾肉毒碱,并对雷公藤多苷致睾丸组织和生精细胞的形态结构和功能的损伤具有较好的修复作用。3.“菟丝子-枸杞子”药对可以有效调控模型大鼠睾丸组织SCF、c-kit、PI3K、p-Akt、BAD、Bcl-2、Bax 蛋白及其 mRNA 的表达,通过调控 SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2 信号通路促进生精细胞增殖和抑制生精细胞凋亡的作用。综上,菟枸助育汤可有效提高男性不育少弱精子症患者的生精功能,临床疗效显着,其作用机制可能是通过SCF/c-kit--PI3K--Bcl-2通路调控生精细胞增殖和凋亡来实现的。
孙玲[8](2020)在《不同取精方法对无精子症患者辅助生殖助孕结局分析》文中提出根据世界卫生组织(WHO)统计,全球约有10%-15%的育龄夫妇患有不孕不育症,且病因复杂。目前学者普遍接受的不孕不育症按病因诊断分为女性不孕症,约占60%-70%;而其中男性因素导致的不育症约占30%左右,有文献报道男性因素占30%-50%[1];在当今社会,生活环境、食物、药物、生活习惯等均是造成男性不育的主要原因。这些因素使男性不育症患者在持续不断增加。在男性不育因素中,包括精液异常、性功能异常及免疫因素等因素。在精液质量异常中,无精子症是最为严重的指标,占到了男性不育的约15%。根据输精管道是否通畅可将无精子症分为非梗阻性无精子症和梗阻性无精子症。近20年来男性不育症的治疗取得了重大突破。1992年卵胞浆内单精子注射技术的诞生解决了严重少弱畸精症的不育问题[2]。1993年Craft等[3]首次采用睾丸活检术使梗阻性无精症患者获得精子后行卵胞质内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection)妊娠成功;1995年,Devroey等[4]利用睾丸精子抽吸术联合卵胞浆内单精子显微注射(testicular sperm extraction-intracytoplasmic sperm injection,TESE-ICSI)术使得非梗阻性无精子症(non-obstructive azoospermia,NOA)患者成功妊娠,此后TESA-ICSI成为无精子症患者的常规辅助生殖技术治疗方案,无精子症患者拥有自己的后代成为可能。1998年Schlegel[5]首次报道了显微切开取精术治疗NOA具有损伤小,针对性强、精子检出率高等优点。目前,已成为发展最快的取精技术。男性显微外科技术联合卵胞质内单精子注射给以前被认为是无法治疗的生精功能障碍所致的非梗阻性无精子症患者带来了希望。与此同时,显微外科输精管吻合和输精管附睾吻合技术的革命是梗阻性无精子症(obstructive azoospermia,OA)的治疗效果得到了显着的改善,成为部分OA患者治疗的首选方法。但梗阻性无精子症和非梗阻性无精子症患者的ICSI治疗结局是否存在差异,一直是临床的研究热点,但结论仍不统一。目前对于非梗阻性无精子症患者,取精结果成功与否在术前无法正确判断,有一部分患者即使行显微取精术,仍无法获得精子,也有一部分患者行睾丸穿刺活检阴性便放弃进一步行其他取精操作的情况发生,若后期行显微取精还是有机会发现精子。目前现有的临床技术手段对于显微取精的结果预测能力较低,这也导致了一部分患者得不到潜在的最优的临床治疗,因此,临床上筛选真正适合行显微取精手术的患者,并找到术前能够预测取精手术结果的指标尤为重要。研究目的1.通过不同外科手术方法获取的精子行ICS治疗结局的影响以及探讨不同外科手术方法与睾丸精子发生对ICSI临床结局的影响。2.通过分析NOA患者行显微镜下睾丸取精术(microdissection testicular sperm extraction,Micro-TESE)的精子获得率,初步探讨其影响因素;分析Micro-TESE联合ICSI的助孕疗效,通过受精率、优质胚胎率、可移植胚胎率、临床妊娠率等数据,为临床医疗手段选择提供理论基础。3.比较不同病理类型及不同病因的非梗阻性无精子(NOA)症患者行Micro-TESE的获精成功率及行卵胞质内单精子显微注射的临床结局。研究方法1.回顾性分析2018年05月-2019年09月在郑州大学第三附属医院因男性无精子症行不同手术方法取精术的患者,根据手术方式,分为显微镜下睾丸切开取精组(Micro-TESE),睾丸穿刺抽吸组(testicular sperm extraction,TESA),经皮附睾穿刺取精组(percutaneous epididymal sperm aspiration,PESA),比较三组间的受精率、胚胎卵裂率、优质胚胎率、优质胚胎率两两进行比较、随访并统计种植率、临床妊娠率、流产率、活婴出生率。2.将行显微镜下睾丸切开取精术的128例NOA患者,根据是否获得精子,分为获精组(43例)和未获精组(85例),比较患者的年龄、睾丸体积以及生殖激素水平。3.回顾性分析同期在本院男科因非梗阻性无精子症(NOA)行Micro-TESE患者的临床资料,根据2007年McLachlan提出的NOA分类,将其分为唯支持细胞综合征(supporting cell syndrome,SCOS)15例,生精细胞成熟阻滞者(Maturation arrest,MA)11 例,生精功能低下者(Hypo-spermatogenesis,H-S)7例,三种不同病因先天性35例,获得性8例,特发性51例,对其中获取精子的患者行ICSI治疗,比较三组患者年龄、睾丸体积、激素水平。获精后行ICSI后的受精率、可利用胚胎率、临床妊娠率进行比较。结果1.显微镜下睾丸取精术(Micro-TESE)组共37周期,经皮附睾穿刺取精(PESA)组175周期、睾丸穿刺抽吸组(TESA)20周期,将三组患者的一般资料进行比较,发现女方年龄、不孕年限、女方(Body Mass index,,BMI)、男方BMI均无统计学意义(p<0.05),而男性年龄三组间比较差异有统计学意义,(p<0.05),见表 1。2.将三组间行ICSI后的受精及妊娠结局比较,发现三组间受精率、2PN受精率、卵裂率比较,差异有统计学意义(p<0.05),见表2。3.将Micro-TESE组、PESA组、TESA组三组获取精子行ICSI后比较,三组间种植率、临床妊娠率、流产率,差异无统计学意义(p>0.05),见表3。4.128例NOA患者接受Micro-TESE手术,43例获得精子,总体精子获得率33.59%,其中获得性的NOA获精率较高为83.3%,先天性的NOA组取精率为34.29%,特发性的NOA取精率为25.5%,三组之间比较,p<0.05,差异有统计学意义。其中先天性与获得性、特发性与获得性比较,p<0.05,差异有统计学意义,见表4。5.三种不同病因的NOA患者获取精子后行ICSI,三组间获卵数、临床妊娠率、流产率相比较,p>0.05,差异均无统计学意义。但三组之间在受精率比较,发现获得性NOA患者的受精率较高,p<0.05,差异有统计学意义,见表5。6.三种不同病理类型的NOA患者,发现生精功能低下组获精率高于成熟细胞阻滞组高于唯支持细胞综合征,三组之间比较,p<0.05,差异有统计学意义,见表6。7.将128例接受睾丸显微取精术患者根据是否获取精子分为获精组和未获精组,比较两组之间的年龄、睾丸体积及生殖激素水平,预测能影响睾丸显微取精成功率的因素。获精组vs未获精组在FSH水平(20.34±9.26 vs 8.19±5.37)IU/L,p<0.05,差异有统计学意义;获精组vs未获精组在LH水平(6.81±6.51 vs 6.37±10.48)IU/L,p<0.05,差异有统计学意义;而两组之间在年龄、睾丸体积、雌二醇、睾酮差异没有统计学意义,见表7。8.36例不同病理类型NOA患者,其中SCOS 15例,MA 14例,H-S 7例,性激素检测分析提示卵泡雌激素(follicle stimulating hormone,FSH)值为SCOS组、MA 组、H-S 组为(8.01±6.37)、(8.08±5.10)、(25.43±10.73)IU/L,三组之间比较差异有统计学意义(p<0.005);黄体生成素(luteinizing hormone,LH)值为 SCOS 组、MA 组、H-S 组为(4.12±2.34)、(4.52±2.84)、(7.74±3.71)IU/L,三组之间比较差异有统计学意义(p<0.05),患者平均年龄、睾丸体积、睾酮比较差异无统计学意义,见表8。9.三组不同病理类型的NOA患者获得精子并全部行ICSI注射,其中三组之间的受精率、可利用胚胎数、优质胚胎数、临床妊娠率差异均无统计学意义,(p>0.05),见表 9。结论1.在三组中Micro-TESE组在受精率、卵裂率、优质胚胎率低于TESA组和PESA组,胚胎种植率及临床妊娠率高于TESA组和PESA组,但三组间种植率、临床妊娠率、流产率差异无统计学意义。2.在不同病因中的NOA患者中,获得性NOA患者的获精率最高,三组间患者的年龄、睾丸体积相比较,差异无统计学意义;而生殖激素水平FSH、LH相比较,差异有统计学意义。联合ICSI后发现获得性NOA的受精率高于先天性、特发性NOA。但临床妊娠率、流产率比较,差异无统计学意义。3.显微镜下睾丸取精术是非梗阻性无精子症患者获取精子的有效手段,三种不同病理类型的NOA患者取精成功率,三组间在年龄、睾丸体积、睾酮方面相比较,差异无统计学意义,p>0.05,。在FSH、LH方面相比较,差异有统计学意义,p<0.05,。H-S组获精率高于MA组高于SCOS组。
李琰峰[9](2020)在《基于SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2通路探讨广嗣育麟汤治疗男性不育的疗效及其作用机制的研究》文中指出目的男性不育症已成为目前社会关注的热点问题。西医治疗存在一定的局限性,相当一部分男性不育问题不能得到有效解决;中医治疗具有独特的治疗优势疗效确切,能很好地弥补西医治疗男性不育症的不足;广嗣育麟汤以补肾生精为治疗原则,临床疗效确切,值得进一步深入探讨;本研究通过随机对照试验进一步明确广嗣育麟汤的临床疗效,同时通过动物实验探讨其改善生精功能的机制与SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2信号通路相关性。方法临床研究:采用随机对照试验的方法,阳性对照组采用左卡尼汀治疗,观察组用左卡尼汀联合广嗣育麟汤治疗;疗程为90天;观察在治疗前后患者精液量、液化程度、精子浓度、精子总数、精子总活率、前向运动百分率等精液质量指标以及患者中医症状评分的变化;通过统计分析观察广嗣育麟汤治疗肾虚证男性不育的疗效。实验研究:采用雷公藤多苷诱导建立生精障碍大鼠模型,造模成功后,随机分为空白组、模型组、对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组12只;空白组和模型组给予去离子水灌胃,对照组给予左卡尼汀口服液灌胃,低、中、高剂量组给予广嗣育麟汤悬混液低、中、高剂量灌胃,共计4周;观察大鼠一般情况、体重、睾丸和附睾脏器系数、精液质量、血清性激素、抑制素B、附睾肉毒碱等指标,以及睾丸组织形态病理改变和超微结构的变,探讨广嗣育麟汤最佳药物治疗浓度。采用免疫组化检测方法检测大鼠睾丸组织Bax、Bcl-2蛋白的含量;采用WB和Real time PCR方法检查SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2信号通路相关蛋白含量及mRNA的表达量;探讨广嗣育麟汤改善生精功能的机制,以及其与SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2信号通路相关性。结果临床研究:治疗后精液质量相关指标观察组明显优于对照组,差异显着(P<0.05或P<0.01);中医症状总评分以及肾精亏虚证、肾阳虚证、肾阴虚证不同证候评分,观察组也优于对照组,差异显着(P<0.05或P<0.01);根据临床疗效标准,广嗣育麟汤联合左卡尼汀整体疗效明显优于单纯左卡尼汀治疗疗效,差异有统计学意义(P<0.05)。整个观察期间未出现不良反应报告。实验研究:干预结束后,广嗣育麟汤各剂量组大鼠一般情况、体重、脏器系数、精液质量、抑制素B、附睾肉毒碱等指标检测明显优于模型组,而且中剂量组优于对照组;性激素相关指标中,广嗣育麟汤各组优于模型组,差异有统计学差异(P<0.05),中剂量组LH和高剂量组T优于对照组;观察睾丸组织病理改变和超微结构可见广嗣育麟汤各组生精细胞形态和数量、线粒体等细胞器数量明显优于模型组和对照组;采用免疫组化检测大鼠睾丸组织Bax、Bcl-2蛋白的含量,可见广嗣育麟汤组Bax含量明显低于对照组,Bcl-2含量以及Bcl-2/Bax 比值均明显高于同对照组;采用WB和Real time PCR方法检查SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2信号通路相关蛋白含量及mRNA的表达量,可见观察组SCF、c-kit、PI3K、AKT、Bcl-2蛋白含量均高于对照组,Bad、Bax蛋白含量均低于对照组;mRNA的表达量SCF、c-kit、AKT、Bcl-2高于对照组,Bad、Bax mRNA的表达量均低于模型组。结论1.广嗣育麟汤可以有效改善男性不育症患者的精液质量,降低肾虚证患者中医症状评分;2.广嗣育麟汤可以有效改善生精障碍模型大鼠一般状态,提高睾丸附睾脏器系数、精液质量、抑制素B和附睾肉毒碱含量,参与下丘脑-垂体-性腺轴性激素的调控,修复睾丸组织及超微结构的形态;3.广嗣育麟汤中剂量为最佳治疗药物浓度;4.广嗣育麟汤可以通过SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2信号通路促进生精细胞的增殖和抑制生精细胞的凋亡。综上所述,广嗣育麟汤可以有效治疗肾虚型男性不育症,其调控SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2信号通路蛋白和基因是作用机制之一。
于洋[10](2019)在《非梗阻性无精子症行显微取精获精结局的预测因素分析》文中提出目的:通过对非梗阻性无精子症(NOA)患者术前和术中的各项指标的研究及评估,寻找对显微取精(Microdissection testicular sperm extraction,Micro-TESE)获精结局有预测价值的方法及评估手段,为临床医生选择更为合理的治疗方案提供理论参考,最大程度的减少患者不必要的损伤。方法:回顾性分析2016年3月至2019年1月,在吉林大学第一医院行Micro-TESE的189例NOA患者。通过对NOA患者临床指标,病因,病理,术中睾丸曲细精管的评估,以预测显微取精的成功率及指导手术方案。术前常规临床指标包含临床病因,临床指标(年龄,睾丸体积,生殖激素)及常规病理学诊断;术中评估指标包含曲细精管均一性及曲细精管直径。并探索新的研究方法(包含遗传学病因)的进一步检测及分类,病理的进一步分类。常规临床指标的分类方法:(1)年龄:≤30岁组,>30岁组;(2)睾丸体积:≤5ml组,5-10ml组,≥10ml组;(3)促卵泡刺激素(FSH):≤12.4m IU/l组,12.4-24.8m IU/l组,≥24.8m IU/l组;(4)促黄体生成素(LH):≤8.6m IU/l组,8.6-17.2m IU/l组,≥17.2m IU/l组;(5)睾酮(T):≤9.9nmol/l组,>9.9nmol/l;(6)病因:克氏综合征(KS),Y染色体微缺失,隐睾,睾丸炎,特发性NOA;(7)常规病理分型:唯支持细胞综合征(SCOS),生精阻滞(MA),生精功能低下(HS),透明样变。新的研究方法如下:(1)增加染色体核型检查的核型数,寻找小比例的嵌合型KS与获精的相关性。(2)高通量测序法增加Y染色体微缺失检查的STS位点,明确缺失的片段及新的STS缺失位点。(3)基因捕获测序技术筛查基因突变位点。(4)病理一致性分型:根据是否仅含有单一的病理组织类型进一步分为8类:完全型SCOS,混合型SCOS,完全型MA,混合型MA,完全型HS,混合型HS,完全型透明样变,混合型透明样变;(5)术中评估方法:(1)术中曲细精管均一性:均一曲细精管组,不均一曲细精管组;(2)曲细精管直径:≥100μm组,<100μm组。结果:1.总获精率:入组189例,获精61例,获精率为32.3%。2.ROC曲线显示病理,睾丸体积,T具有预测价值。3.临床指标分析(1)获精组T水平和睾丸体积显着低于未获精组(P=0.038;P=0.013)。(2)睾丸体积分组:≤5ml组的获精率显着高于5-10ml组(P<0.001)以及≥10ml组(P=0.032)。(3)T水平分组:≤9.9nmol/l组获精率显着高于>9.9nmol/l组(P=0.009)。(4)年龄,FSH,LH对获精率无影响,无统计学差异。4.病因学分析(1)获精率:特发性NOA获精率显着低于克氏综合征(P=0.001)和隐睾组(P<0.001)。(2)各种病因的获精组与未获精组的获精率比较均无统计学差异。(3)克氏综合征:增加染色体核型检查数可以测出小比例嵌合型KS,含有46,XY正常核型的嵌合体获精率增高。(4)Y染色体微缺失:高通量测序方法可检测新的缺失位点,明确具体缺失的区域及大小,较常规PCR方法更具优势。(5)基因筛查:基因捕获测序共检测NOA患者35例,5例为阳性结果,检出率为14.3%。发现的变异基因分别为TEX11,KISS1R,HSF2,NR5A1,DNAH11。其中TEX11,HSF2,NR5A1具有NOA致病性,具有一定的指导意义。5.病因结合临床指标分析:(1)在特发性NOA中,睾丸体积≤5ml且FSH≥24.8m IU/ml获精率显着高于睾丸体积5-10ml且FSH 12.4-24.8m IU/ml组(P=0.026)。(2)在特发性NOA中,睾丸体积≤5ml且任一LH组获精率均显着高于睾丸体积5-10ml组且LH 8.6-17.2m IU/ml组(三组均P<0.05)。(3)在特发性NOA中,当睾丸体积≤5ml且T水平正常的获精率显着高于睾丸体积5-10ml组且T水平低下组(P=0.006)及正常组(P=0.01);睾丸体积≥10ml且低T水平组获精率显着高于睾丸体积5-10ml组且低T水平组(P=0.041)。6.病理组织学分析(1)获精率:SCOS组的获精率显着低于HS组(P<0.001)和透明样变组(P=0.001);MA组的获精率显着低于HS组(P=0.002)。(2)SCOS获精组睾丸体积显着低于未获精组(P=0.002)。其他病理分型无统计学差异。7.病理结合临床指标分析:(1)SCOS组中,睾丸≤5ml组获精率显着高于睾丸体积5-10ml组(P=0.043)及≥10ml组(P=0.016)。(2)透明样变性组中,LH水平8.6-17.2m IU/ml获精率显着高于LH≥17.2m IU/ml(P=0.041)。(3)MA组和HS组中,低T水平获精率显着高于正常T水平组(分别为P=0.026;P=0.004)。其他无统计学差异。8.病理组织单一性分析(1)获精率:混合型病理组织组显着高于单一型病理组织组(P<0.001),混合型SCOS获精率显着高于单一型SCOS(P=0.019)。(2)单一型病理获精组的T水平显着低于未获精组(P=0.024);混合型病理组间无统计学差异。9.术中评估(1)获精率:不均一曲细精管组的获精率显着高于均一组(P<0.001);一侧未获精,不均一组的对侧睾丸获精率显着高于均一组(P<0.001)。(2)获精组与未获精组获精率无统计学差异。10.病因/病理结合术中评估(1)在特发性NOA(P<0.001)及克氏综合征(P=0.007)组中,不均一曲细精管组的获精率显着高于均一组。其他无统计学差异。(2)特发性NOA一侧未获精,不均一组对侧睾丸获精率显着高于均一组(P=0.007)。(3)SCOS组及透明样变性组,不均一曲细精管组的获精率显着高于均一组获精率(P=0.003,P=0.002)。其他无统计学差异。(4)SCOS组中,曲细精管直径≥100μm的获精率显着低于<100μm组(P<0.001)。≥100μm组行对侧睾丸手术31例,全部未获精。结论:1.睾丸体积≤5ml或者睾酮≤9.9nmol/l对获精率具有较低的预测价值。2.不同病因中,特发性NOA获精率低,当其结合睾丸体积及生殖激素时可提高预测的准确性;增加克氏综合征患者核型检测数量可以找到小比例嵌合,含有46,XY嵌合体克氏综合征获精率高;致病基因筛查可以发现未知的病因,指导手术方案的选择。3.睾丸病理组织分型中,唯支持细胞综合征获精率显着低于生精功能低下,对NOA获精结局具有较好的预测价值;病理组织分型结合不同临床指标以及病理组织的单一性分型进一步提高了获精率预测的准确性。4.特发性NOA或唯支持细胞综合征结合术中评估为均一型曲细精管时,或唯支持细胞综合征结合曲细精管直径≥100μm时一侧睾丸未获精,另一侧获精率极低,在患者知情同意后可行另一侧睾丸的浅层手术甚至取消手术。
二、支持细胞综合征病理观察与分析(论文开题报告)
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、支持细胞综合征病理观察与分析(论文提纲范文)
(1)非梗阻性无精子症临床遗传学分析及全外显子组测序低频突变关联研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
abstract |
英文缩略词表 |
第一篇 绪论 |
1.1 NOA的鉴别诊断 |
1.2 NOA的遗传学病因 |
1.3 临床遗传学诊断技术 |
1.4 存在问题及实验方案 |
第二篇 研究内容 |
第1部分 非梗阻性无精子症的染色体异常分析 |
1.1 研究对象与方法 |
1.2 研究方法 |
1.3 研究结果 |
1.4 讨论 |
1.5 小结 |
第2部分 非梗阻性无精子症的AZF区变异分析 |
2.1 研究对象与方法 |
2.2 研究方法 |
2.3 研究结果 |
2.4 讨论 |
2.5 小结 |
第3部分 非梗阻性无精子症的生精基因捕获测序筛查分析 |
3.1 研究对象与方法 |
3.2 研究方法 |
3.3 研究结果 |
3.4 讨论 |
3.5 小结 |
第4部分 非梗阻性无精子症外显子组测序及低频突变关联分析 |
4.1 研究对象与方法 |
4.2 研究方法 |
4.3 研究结果 |
4.4 讨论 |
4.5 小结 |
结论 |
参考文献 |
附录 |
作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
致谢 |
(2)基于问卷调查、回顾性病例分析及全外显子测序的性发育异常相关肿瘤的研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
第一部分 流行病学调研 |
中国妇产科医师对性发育异常的诊治现状及认知的横断面调查 |
一 引言 |
二 对象与方法 |
1 研究对象 |
2 研究内容 |
3 调查方式 |
4 数据收集 |
5 统计分析方法 |
6 质量控制 |
三 结果 |
1 数据核查 |
2 中国妇产科医师基本情况 |
3 中国妇产科医师对性发育异常的诊治现状 |
3.1 DSD发生率的认识及接诊DSD现状 |
3.2 DSD临床问题的管理现状 |
3.3 中国妇产科医师对DSD与性腺肿瘤方面的认识 |
4 DSD诊治情况的影响因素 |
4.1 DSD接诊情况 |
4.2 关注的临床问题 |
4.3 DSD肿瘤风险认识 |
4.4 手术时机及指征的把握 |
4.5 DSD性腺肿瘤患者辅助治疗 |
5 中国妇产科医师的自我评价及参加培训意愿 |
6 参加相关培训意愿影响因素 |
四 讨论 |
1 调研对象的代表性 |
2 中国妇产科医师对DSD的诊治现状 |
2.1 DSD的接诊现状 |
2.2 DSD患者需关注的临床问题 |
2.3 DSD的手术指征及性腺切除时机 |
3 中国妇产科医师对DSD与性腺肿瘤认识情况 |
3.1 DSD与性腺肿瘤相关性及其危险因素 |
3.2 DSD性腺肿瘤的长期预后 |
3.3 性激素治疗及肿瘤风险认识 |
五 结论及展望 |
第二部分 临床研究 |
DSD诊治特点及性腺肿瘤相关影响因素回顾性分析 |
一 引言 |
二 对象与方法 |
1. 研究对象 |
2. 研究方法及技术路线 |
3. 质量控制 |
4. 病史数据采集 |
5. 统计学分析 |
三 结果 |
1 DSD的分类情况 |
2 DSD的临床及诊治特点 |
2.1 人口统计学资料 |
2.2 不同类型DSD临床特征 |
2.3 手术指征及手术方式 |
2.4 肿瘤发生情况 |
3 DSD性腺肿瘤发生相关影响因素 |
3.1 人口统计学资料 |
3.2 实验室检查 |
3.3 是否含有Y物质 |
3.4 DSD分类 |
3.5 DSD病因诊断 |
四 讨论 |
1. DSD疾病谱 |
2. 不同DSD类型的临床及诊治特点 |
3. DSD与性腺肿瘤 |
五 结论与展望 |
第三部分 基础研究 |
基于全外显子测序DSD性腺肿瘤发生机制研究 |
一 引言 |
二 试验材料与方法 |
1 实验仪器和设备 |
2 方法 |
2.1 选取石蜡样本 |
2.2 DNA的提取及质检 |
2.3 DNA的片段化 |
2.4 文库的构建及库检 |
2.5 上机测序 |
2.6 测序数据处理 |
2.7 数据分析 |
2.8 功能富集/通路分析 |
三 结果 |
1. 测序数据质量 |
2. 变异情况 |
3. 肿瘤易感基因及通路富集分析 |
4. 肿瘤突变频谱 |
5. 肿瘤驱动基因 |
6. 肿瘤高频突变基因 |
四 讨论 |
1. GCT共同起源 |
2. 测序技术在两性性腺GCT中的应用 |
3. DSD性腺肿瘤发生机制 |
五结论与展望 |
全文小结 |
参考文献 |
附录一: 问卷内容 |
附录二: 基因名称 |
综述:性发育异常与性腺肿瘤 |
参考文献 |
附录1:中英文符号及缩略语说明 |
博士期间发表文章 |
致谢 |
(3)人类特发性非梗阻性无精子症的致病基因筛查及功能探讨(论文提纲范文)
英文缩略表 |
中文摘要 |
ABSTRACT |
1.引言 |
1.1 男性不育症和无精子症的研究现状 |
1.2 正常的精子发生过程 |
1.3 特发性非梗阻性无精子症的遗传学病因研究现状 |
1.4 本课题的研究设计及拟解决的科学问题 |
2.材料与方法 |
2.1 研究对象 |
2.2 实验试剂 |
2.3 仪器与耗材 |
2.4 实验方法 |
3.结果 |
3.1 特发性NOA患者及对照组睾丸组织病理分型 |
3.2 60例特发性NOA患者全外显子测序结果分析寻找新的NOA候选致病基因突变 |
3.3 60例特发性NOA患者全外显子测序结果分析寻找已知NOA致病基因突变 |
4.讨论 |
4.1 已知致病基因突变导致NOA的发生 |
4.2 我们发现的新的候选致病基因突变可能导致NOA的发生 |
4.3 本项研究中的不足之处 |
5.结论 |
6.参考文献 |
附录 |
致谢 |
课题综述 非梗阻性无精子症的遗传学研究进展 |
参考文献 |
(4)SOX30基因在雄性生殖发育毒性中的作用及机制初步研究(论文提纲范文)
缩略词表 |
英文摘要 |
中文摘要 |
第一章 前言 |
1.1 研究背景 |
1.2 研究内容 |
1.3 研究路线 |
第二章 SOX30基因敲除对雄性小鼠脏器发育和生殖功能的影响 |
2.1 引言 |
2.2 材料与方法 |
2.3 实验结果 |
2.4 讨论 |
第三章 SOX30在DBP致TM4细胞增殖抑制中的作用及机制 |
3.1 引言 |
3.2 材料与方法 |
3.3 实验结果 |
3.4 讨论 |
全文总结 |
参考文献 |
文献综述 SOX转录因子家族在脏器发育中的功能研究进展 |
参考文献 |
附件:构建的过表达载体的测序结果 |
攻读学位期间的研究成果 |
致谢 |
(5)益精方调控慢性缺氧诱导的睾丸Leydig细胞凋亡治疗LOH的机制研究(论文提纲范文)
英文缩略语表 |
摘要 |
Abstract |
综述一 迟发性性腺功能减退症诊断、危险因素和动物模型研究述评 |
1.LOH诊断上的困惑 |
1.1 LOH精准诊断相对困难 |
1.2 LOH症状与睾酮水平低下不能完全对等 |
1.3 LOH诊断方法难以统一 |
1.4 LOH样症状如何定义有待商榷 |
1.5 LOH相关新概念的提出 |
1.6 小结 |
2.LOH动物模型构建概况 |
2.1 将老龄雄性大鼠(14-24月龄)视为LOH动物模型 |
2.2 环磷酰胺诱导生殖系统受损构建LOH动物模型 |
2.3 对退役种鼠进行“孤养+复合情志刺激”构建LOH动物模型 |
2.4 将去势小鼠视作LOH动物模型 |
2.5 小结 |
3.LOH危险因素研究概况 |
3.1 LOH常见的危险因素 |
3.2 肥胖与LOH |
3.3 LOH散在报道的危险因素 |
3.4 缺氧可能是LOH 一个尚未得到重视的潜在危险因素 |
3.5 小结 |
4.缺氧代谢产物乳酸与睾丸生殖机能 |
5.结语 |
6.参考文献 |
综述二 中医药对男性生殖内分泌的认识与诊疗进展 |
1.男性生殖内分泌的基础生理病理概况 |
1.1 下丘脑-垂体-睾丸轴是男性生殖内分泌的核心 |
1.2 HPT轴功能可受到多种危险因素的影响 |
2.以“天癸”为核心的中医男性生殖内分泌理论的构建 |
2.1 天癸是一种与人体生殖机能密切相关且客观存在的物质 |
2.2 天癸的本质和中西医结合研究 |
2.3 以天癸为核心或信使的中医“肾-天癸-精室”男性性腺轴的构建 |
2.4 小结 |
3.中医药在男性生殖内分泌疾病上的运用 |
3.1 常见的男性生殖内分泌疾病 |
3.2 中医药在动物实验研究方面对HPT轴的调控作用 |
3.3 中医药在临床研究方面对HPT轴的调控作用 |
3.4 小结 |
4.结语 |
5.参考文献 |
前言 |
第一部分 临床研究 症状性迟发性性腺功能减退症(sLOH)中医体质证候调查以及与慢性间歇性缺氧相关性研究 |
1.资料与方法 |
1.1 研究对象 |
1.2 纳入标准 |
1.3 排除标准 |
1.4 研究方法 |
1.5 统计学方法 |
2.结果 |
2.1 基本资料 |
2.2 sLOH患者“中医体质证候”基本调研概况 |
2.3 男性激素及静脉血乳酸值异常情况 |
2.4 cAMS评分与Epworth评分、STOP-bang评分的相关性分析 |
2.5 Epworth评分、STOP-bang评分与cAMS性功能症状、自主神经紊乱症状、心理和躯体症状评分之间的相关性分析 |
2.6 乳酸正常sLOH组与乳酸升高sLOH组各指标的比较 |
2.7 缺氧高中低风险3组间各指标的比较 |
2.8 cAMS评分轻度和中度2组间各指标的比较 |
3.讨论 |
3.1 sLOH患者中医体质证候 |
3.2 sLOH与缺氧 |
4.小结 |
5.参考文献 |
第二部分 实验研究 |
研究一 慢性间歇性缺氧诱导的LOH动物模型构建探究 |
1.材料和方法 |
1.1 实验动物及分组 |
1.2 主要设备与试剂 |
1.3 实验方法 |
1.4 统计方法 |
2.结果 |
2.1 造模第15天时,3组大鼠血TT、FT、乳酸检测对比 |
2.2 造模第30天时,3组大鼠血TT、FT、乳酸检测对比 |
2.3 造模第30天时,3组大鼠悬尾实验、游泳实验检测对比 |
2.4 模型判定与造模成功情况 |
3.讨论 |
3.1 增龄、缺氧与血TT、FT水平 |
3.2 缺氧对模型大鼠体能和情志的影响 |
3.3 乳酸的结果讨论 |
3.4 LOH动物模型讨论 |
4.小结 |
5.参考文献 |
研究二 补肾活血益精方对慢性间歇性缺氧诱导的LOH模型大鼠睾丸Leydig细胞凋亡的影响 |
1.材料和方法 |
1.1 实验材料 |
1.2 实验方法 |
2.结果 |
2.1 各组大鼠睾丸指数的对比 |
2.2 各组大鼠血TT、FT水平的比较 |
2.3 各组大鼠血乳酸水平的比较 |
2.4 各组大鼠睾丸Leydig细胞凋亡率的情况对比 |
2.5 各组大鼠睾丸组织内Caspase-3、Bcl-2及Bax的蛋白表达情况 |
2.6 各组大鼠睾丸组织内Caspase-3、Bcl-2及Bax的基因表达情况 |
2.7 各组大鼠睾丸病理组织学情况比较 |
2.8 各组大鼠睾丸Leydig细胞超微结构的情况比较 |
3.讨论 |
3.1 Leydig细胞数量、功能与雄激素的关系 |
3.2 睾丸Leydig细胞的凋亡调控 |
3.3 益精方的组方分析及前期研究基础 |
3.4 益精方对LOH模型大鼠的可能作用机制一:调控睾丸Leydig细胞的凋亡 |
3.5 益精方对LOH模型大鼠的可能作用机制二:恢复雄激素合成睾丸内调节的正常环境,促进睾丸Leydig细胞分泌功能 |
4.小结 |
5.参考文献 |
结论 |
创新点 |
不足与展望 |
致谢 |
个人简历 |
附件 |
(6)超声应变弹性RTE及血清INHB评价无精症睾丸生精功能的价值探讨(论文提纲范文)
中文摘要 |
英文摘要 |
缩略词 |
一、引言 |
二、材料与方法 |
三、结果 |
四、讨论 |
五、结论 |
六、参考文献 |
七、文献综述 实时超声弹性应变成像及血清抑制素B评估无精子症患者睾丸生精功能的研究进展 |
参考文献 |
八、附录 |
九、致谢 |
(7)补肾生精法治疗少弱精子症及其调控生精细胞增殖与凋亡的研究(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
符号说明 |
第一部分 文献综述 |
综述一 中医药诊治男性不育少弱精子症的研究进展 |
1 少弱精子症诱因 |
2 中医病名 |
3 中医病因病机 |
4 中医药治疗 |
5 总结与展望 |
参考文献 |
综述二 生精细胞增殖、凋亡相关蛋白及通路的研究进展 |
1 精子发生的三个阶段 |
2 生精细胞的增殖 |
3 生精细胞的凋亡 |
4 生精细胞增殖、凋亡相关蛋白 |
5 总结与展望 |
参考文献 |
第二部分 临床研究 菟枸助育汤治疗男性不育少弱精子症的临床研究 |
前言 |
1 研究对象 |
2 研究方法 |
3 结果 |
4 讨论 |
参考文献 |
第三部分 实验研究 |
实验一 菟丝子-枸杞子对生精功能障碍SD大鼠生精功能的影响 |
前言 |
1 材料 |
2 实验方法 |
3 结果 |
4 讨论 |
参考文献 |
实验二 基于SCF/c-kit--PI3K--Bcl-2通路探讨菟丝子-枸杞子调控生精细胞增殖与凋亡的作用机制 |
前言 |
1 材料 |
2 实验方法 |
3 结果 |
4 讨论 |
参考文献 |
结语 |
附录1 |
附录2 |
致谢 |
个人简介 |
(8)不同取精方法对无精子症患者辅助生殖助孕结局分析(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
中英文缩写列表 |
1 引言 |
2 研究材料和方法 |
3 结果 |
4 讨论 |
5 结论 |
6 创新点 |
7 展望 |
参考文献 |
综述 无精子症的研究进展 |
参考文献 |
附录部分 |
个人简历在校期间发表的学术论文及研究成果 |
致谢 |
(9)基于SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2通路探讨广嗣育麟汤治疗男性不育的疗效及其作用机制的研究(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
符号说明 |
第一部分 文献综述 |
综述一 男性不育症中医诊治研究进展 |
1 病因病机 |
2 辨证分型 |
3 辨证论治 |
4 总结 |
参考文献 |
综述二 男性不育症西医诊治研究进展 |
1 男性不育症的病因 |
2 男性不育症的治疗 |
3 生精细胞增殖、凋亡的研究进展 |
4 总结 |
参考文献 |
第二部分 临床研究 广嗣育麟汤治疗肾虚型男性不育症的临床研究 |
前言 |
临床资料 |
结果 |
讨论 |
参考文献 |
第三部分 实验研究 |
实验一 广嗣育麟汤对GTW诱导生精障碍模型大鼠生精功能的影响 |
前言 |
材料与方法 |
结果 |
讨论 |
参考文献 |
实验二 广嗣育麟汤对生精障碍大鼠的SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2信号通路相关蛋白及mRNA表达的影响 |
前言 |
材料与方法 |
结果 |
讨论 |
参考文献 |
结语 |
致谢 |
附录 |
在学期间主要研究成果 |
(10)非梗阻性无精子症行显微取精获精结局的预测因素分析(论文提纲范文)
前言 |
中文摘要 |
Abstract |
英文缩略词表 |
第1章 绪论 |
1.1 无精子症概述 |
1.1.1 梗阻性无精子症 |
1.1.2 非梗阻性无精子症 |
1.2 外科取精技术的发展与比较 |
1.2.1 外科取精技术的发展 |
1.2.2 不同取精技术的比较 |
1.3 影响NOA显微取精结局的因素 |
1.3.1 临床指标 |
1.3.2 遗传性病因 |
1.3.3 非遗传性病因 |
1.3.4 病理组织学分型 |
1.4 显微取精的术中评估 |
第2章 材料与方法 |
2.1 主要仪器和试剂 |
2.1.1 主要仪器 |
2.1.2 主要试剂及材料 |
2.2 研究对象及方法 |
2.2.1 研究对象 |
2.2.2 研究方法 |
2.3 实验方法 |
2.3.1 精液分析检查 |
2.3.2 血清生殖激素检测 |
2.3.3 睾丸体积测量 |
2.3.4 精浆生化检测 |
2.3.5 性高潮后尿液检查 |
2.3.6 染色体核型分析 |
2.3.7 荧光原位杂交技术检测染色体嵌合体率 |
2.3.8 Y染色体微缺失检测 |
2.3.9 目标基因捕获测序 |
2.3.10 睾丸组织病理学检查 |
2.4 显微取精术及术中评估 |
2.4.1 显微取精术 |
2.4.2 曲细精管的均一性评估 |
2.4.3 曲细精管的直径评估 |
2.5 统计学方法 |
第3章 结果 |
3.1 入组患者临床资料 |
3.1.1 一般临床指标 |
3.1.2 病因构成 |
3.1.3 病理构成 |
3.2 初步预测效果评价 |
3.3 临床指标与获精的相关因素分析 |
3.3.1 获精组与未获精比较 |
3.3.2 临床指标的细化分析 |
3.4 病因与获精的相关因素分析 |
3.4.1 获精率 |
3.4.2 遗传性病因 |
3.4.3 非遗传性病因 |
3.4.4 特发性NOA |
3.4.5 病因结合临床指标 |
3.5 病理与获精相关因素分析 |
3.5.1 常规病理组织学分型 |
3.5.2 单一型和混合型分型 |
3.6 术中评估与获精的相关因素分析 |
3.6.1 曲细精管直径的均一性 |
3.6.2 曲细精管直径大小对获精率的影响 |
第4章 讨论 |
4.1 入组患者临床资料 |
4.1.1 基本临床指标 |
4.1.2 病因构成 |
4.1.3 病理分型构成 |
4.2 初步预测效果评价 |
4.3 临床指标与获精的相关因素分析 |
4.3.1 获精组与未获精组比较 |
4.3.2 临床指标细化分析 |
4.4 病因与获精的相关因素分析 |
4.4.1 获精率 |
4.4.2 遗传性病因 |
4.4.3 非遗传性病因 |
4.4.4 特发性NOA |
4.4.5 病因结合临床指标 |
4.5 病理与获精相关因素分析 |
4.5.1 常规病理组织学分型 |
4.5.2 病理一致性与获精相关因素分析 |
4.6 术中评估与获精的相关因素分析 |
4.6.1 曲细精管直径的均一性 |
4.6.2 曲细精管直径大小对获精率的影响 |
第5章 结论 |
创新点及意义 |
参考文献 |
附录 |
作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
致谢 |
四、支持细胞综合征病理观察与分析(论文参考文献)
- [1]非梗阻性无精子症临床遗传学分析及全外显子组测序低频突变关联研究[D]. 姜雨婷. 吉林大学, 2021(01)
- [2]基于问卷调查、回顾性病例分析及全外显子测序的性发育异常相关肿瘤的研究[D]. 王艳芳. 北京协和医学院, 2021(02)
- [3]人类特发性非梗阻性无精子症的致病基因筛查及功能探讨[D]. 汤冬冬. 安徽医科大学, 2021(01)
- [4]SOX30基因在雄性生殖发育毒性中的作用及机制初步研究[D]. 王平. 中国人民解放军陆军军医大学, 2020
- [5]益精方调控慢性缺氧诱导的睾丸Leydig细胞凋亡治疗LOH的机制研究[D]. 闵潇. 中国中医科学院, 2020(01)
- [6]超声应变弹性RTE及血清INHB评价无精症睾丸生精功能的价值探讨[D]. 张永超. 湖北医药学院, 2020(04)
- [7]补肾生精法治疗少弱精子症及其调控生精细胞增殖与凋亡的研究[D]. 管斯琪. 北京中医药大学, 2020(04)
- [8]不同取精方法对无精子症患者辅助生殖助孕结局分析[D]. 孙玲. 郑州大学, 2020(02)
- [9]基于SCF/c-kit-PI3K-Bcl-2通路探讨广嗣育麟汤治疗男性不育的疗效及其作用机制的研究[D]. 李琰峰. 北京中医药大学, 2020(04)
- [10]非梗阻性无精子症行显微取精获精结局的预测因素分析[D]. 于洋. 吉林大学, 2019(02)