一、薄层色谱法同时鉴别复方己烯雌酚栓的四种成分（论文文献综述）
刘聪[1]（2021）在《四制香附和蒸陈皮的质量评价研究》文中研究表明目的:中药饮片是指在原中药材的基础上炮制加工后得到的处方药品,主要被用于中医临床或制剂生产中,因此其质量优劣与临床疗效密切相关。药典标准,部颁标准和地方标准是目前我国中药饮片质量评价所执行的三个级别的标准。但有些地方特色炮制饮片和根据临床需求制备的特殊饮片未被收录,并且目前的饮片质量标准存在问题也较多,或缺乏统一的质量标准,或简单的重复套版中药材质量标准,或地方炮制规范中标准较低,不能反映出饮片炮制后质量控制的。本研究以具有广东地方特色的四制香附和蒸陈皮饮片为例,利用现代仪器分析方法比较炮制前后的变化,建立具有饮片特色的质量评价体系,制定更合理科学的标准,为完善四制香附和蒸陈皮的质量评价体系提供科学依据。方法:收集15批不同产地的香附药材,并参照炮制标准制成相应的四制香附,建立30批香附和四制香附的UPLC指纹图谱,结合化学计量学分析香附四制前后化学成分的变化;采用UPLC法同时测定30批香附和四制香附中香附烯酮和α-香附酮成分含量,并比较香附四制前后这两个指标成分的变化;采用电子眼技术对30批香附和四制香附的粉末进行颜色测试,给出客观化颜色性状参数,结合统计分析香附和四制香附颜色外观性状变化与内在化学成分的相关性。针对香附炮制前后所含多糖及其质量标准常规化项目也同时进行检测。从以上主要药效成分定性、定量及外观性状客观化等多角度进行综合研究,以期建立具有饮片炮制特色的四制香附的质量评价标准。收集15批不同产地的陈皮药材,并参照炮制标准制成相应的蒸陈皮,建立30批陈皮和蒸陈皮的UPLC指纹图谱,结合化学计量学分析皮蒸制前后化学成分的变化;采用UPLC法同时测定30批陈皮和蒸陈皮中芸香柚皮苷、橙皮苷、川陈皮素和桔皮素的含量,并比较陈皮蒸制前后这四个指标成分的变化;采用电子眼技术对30批陈皮和蒸陈皮的粉末进行颜色采集,结合统计分析陈皮和蒸陈皮外观性状变化与内在化学成分的相关性,同样从定性、定量、性状客观化等多角度综合分析,建立具有饮片炮制特色的蒸陈皮的质量评价标准。结果:香附和四制香附的指纹图谱中共标示了28个特征峰,其中峰1、2、4为四制香附经炮制后产生的特有峰,峰5为香附的特有峰,经指认峰1为5-羟基麦芽酚（DDMP）,峰2为5-羟甲基糠醛（5-HMF）,峰24为香附烯酮,峰27为α-香附酮;指纹图谱分析结果显示四制对香附中化学成分的总体特征产生了显着影响,峰4、2、1、19、5、25、24、9、28、7对香附四制前后的区分有重大贡献;定量分析结果显示四制前后香附烯酮含量无显着性差异,但α-香附酮含量明显降低,且两成分的含量与样品的色度值L*,a*,b*（色度空间参数）值存在显着性相关性。多糖及其他指标炮制前后也发生了一定的变化。通过对主要药效成分定性、定量及外观性状客观化等多方面的综合分析,建立了四制香附的饮片质量标准。陈皮和蒸陈皮的指纹图谱中共标示了24个特征峰,其中峰1（DDMP）和峰2（5-HMF）为蒸陈皮的特有峰,对区分陈皮和蒸陈皮的贡献最大,可作为蒸陈皮的专属性特征标识;指纹图谱分析结果显示蒸制对陈皮中化学成分产生了显着影响,峰1、2、4、14（橙皮苷）、12、15的变化对区分陈皮和蒸陈皮的贡献最大,蒸制后峰4的变化呈下降趋势,峰14、12、15的变化呈上升趋势;陈皮蒸制后四种指标成分含量变化无明显规律,但芸香柚皮苷、橙皮苷和桔皮素的含量与陈皮和蒸陈皮粉末的色度值L*,a*,b*值存在显着性相关。通过对主要药效成分定性、定量及外观性状客观化等多方面的综合分析,建立了蒸陈皮的饮片质量评价标准。结论:香附和陈皮在炮制过程中多糖发生结构转化并产生新成分,同时指标成分含量发生变化,可作为区别生品与炮制品的专属特征标识和差异性特征标识。香附和陈皮粉末的色度值与指标成分含量具有相关性,也能明显区分生品和炮制品,也可用于饮片的质量评价,为四制香附和蒸陈皮的质量评价体系的建立提供了实验依据。
周艺璇[2]（2019）在《肤康凝胶的药学及药效学研究》文中研究指明目的:本实验主要研究了肤康凝胶的制备工艺、质量标准以及药效学（抑菌试验）,为肤康凝胶在日常生活中的应用和临床上的治疗提供了科学依据,为皮炎湿疹等皮肤病患者带去福音。材料与方法:1.肤康凝胶制备工艺研究以肤康凝胶的外观、细度、铺展性和药物稠度等为考察指标,选择基质和基质的用量,加入基质中的水量和溶胀时间、中和剂的选择与用量考察、保湿剂的选择和用量考察、防腐剂的选择等,得到的肤康凝胶的制备工艺是优选的。2.肤康凝胶质量标准研究薄层色谱法用于鉴定黄芩提取物、苦参碱、丹皮酚等;化学鉴定法用于鉴别醋酸氯己定;采用高效液相色谱法测定黄芩提取物、苦参碱、丹皮酚、醋酸氯己定的含量;根据药典对肤康凝胶的性状进行检查。3.肤康凝胶药效学研究（抑菌试验）通过检测金黄色葡萄球菌、细菌菌落总数、绿脓杆菌、真菌菌落总数、溶血性链球菌、大肠杆菌菌落的总数;药物抑菌作用的稳定性实验;检验溶出性抑菌产品的抗菌性能,以确定肤康凝胶的抑菌作用。4.皮肤刺激性实验通过将肤康凝胶涂抹于家兔的皮肤,来检测其对皮肤的刺激性。结果:1.通过试验得到肤康凝胶的最佳制备工艺为:选择卡波姆-940用作凝胶基质,三乙醇胺用作中和剂,甘油用作保湿剂,羟苯乙酯用作防腐剂等。2.薄层鉴别结果显示:肤康凝胶供试品与对照组在相同位置出现相同颜色的斑点,阴性对照组无色斑。理化鉴定结果表明:肤康凝胶供试品的颜色变化与对照样品相同,而阴性试验样品的颜色变化与对照样品不同。含量测定结果表明:黄芩苷进样量在0.05281.056μg范围内具有良好的线性关系,r=0.9999,该含量测定方法具有良好的重复性、精密度、稳定性,回收率为99.6%,RSD=1.19%;苦参碱进样量在0.10282.570μg范围内具有良好的线性关系,r=0.9999,含量测定方法具有良好的重复性、精密度、稳定性,回收率为99.2%,RSD=1.45%;丹皮酚进样量在0.10671.067μg范围内具有良好的线性关系,r=0.9999,含量测定方法具有良好的重复性、精密度、稳定性,回收率为100.0%,RSD=0.08%。醋酸氯己定进样量在0.8171.067μg范围内具有良好的线性关系,r=0.9997,含量测定方法具有良好的重复性、精密度、稳定性,回收率为99.9%,RSD=0.03%。3.药效学实验表明:微生物指标符合GB 15979-2002的标准要求;该样品对所测菌株有较强的抑菌作用;该样品对所测菌株的抑菌作用的室温下最少保存两年;送检样品对白色家兔的皮肤刺激指数为0,皮肤刺激强度为无刺激性。4.皮肤刺激性试验:经过多次完整皮肤刺激性试验,测得各组在14天内水肿、红斑评分均为0分,对照组和试验组均为0分。结论:1.研究制定出了肤康凝胶的最佳制备工艺。2.建立了肤康凝胶的薄层鉴别、化学鉴别和含量测定方法,制定了肤康凝胶的质量标准草案。3.通过实验研究表明,肤康凝胶具有抑菌的作用,且稳定性好,为肤康凝胶治疗真菌、细菌性皮肤病提供了理论依据。4.皮肤刺激性试验:该样品对家兔皮肤刺激指数为0,并且皮肤刺激强度为无刺激性。
高旭东[3]（2016）在《畜禽肉中雄激素及同化激素检测方法的研究与应用》文中进行了进一步梳理近年来发现蛋白同化激素能显着提高动物肌肉产量,在畜牧生产中使用广泛。该类药物副作用较大、体内代谢时间较长,严重危害人体健康及未成年人发育,引起了人们对该类药物的广泛关注。因此,检测动物源性食品中该类药物残留具有重要的研究意义。为了建立一种快速、高效,可准确分析畜禽肉样品中雄激素及同化激素的检测方法,针对样品前处理、液相色谱、质谱条件进行探讨研究。本实验前处理方法选择QuEChERS技术,检测方法选择液相色谱-质谱技术,主要考察因素有：提取溶剂、萃取及净化条件、色谱及质谱条件等。本文选择甘肃省内牛肉、羊肉、猪肉及鸡肝为检测样本,对线性关系、回收率和重现性进行了研究,通过在肉品安全检测中的实际应用验证了该方法的可靠性和实用性。主要实验结果如下：（1）高效液相色谱-串联质谱法：采用多反应监测模式（MRM）采集信号,正离子模式扫描,利用ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱对进行分离,以乙腈-0.1%甲酸水为流动相梯度洗脱,流速为0.25 mL·min-1,柱温为30℃进行测定,10种目标激素加标回收率为51.06%～91.34%,相对标准偏差为0.64%～3.62%,检出限为1ng·kg-1,定量限为100～300ng·kg-1。（2）前处理方法的优化：传统前处理方法通常需要酶解且在37℃恒温箱中保持12 h以上。采用QuEChERS技术,可简化前处理各个环节,处理过程仅需20～30 min,大大缩短了前处理的时间,该技术更为快捷简单。（3）市售肉品的检测：在采集的97个样品中,有4个样品被检出睾酮药物残留,总检出率为4.124%；有1个样品被检出醋酸群勃龙药物残留,总检出率为1.031%。说明该方法可以用于检测动物肉品中该类激素的残留,其灵敏度、准确度和精密度均符合要求,且前处理较为简单。实验结果表明,本文所建立的方法适用于畜禽肉中雄激素及同化激素的检测,可避免出现假阳性结果,在实际生产中具有良好的实用性。
高旭东,黄鑫,郝宝成,陈士恩,梁剑平[4]（2015）在《动物源性食品中性激素残留的危害及检测方法》文中研究表明我国畜牧业资源丰富,且食品开发及加工业也已跃居成为我国国民经济的主要支柱产业之一,工农业发展和人们生活水平的提高也必将受其影响。文章参考国内外有关激素残留相关文献,重点介绍目前动物源食品中性激素残留的危害及检测方法,并对前景进行了展望。
杨兴东[5]（2015）在《己烯雌酚残留免疫学快速检测研究》文中提出己烯雌酚（Diethylstilbestrol,DES）属于非甾体雌激素,具有促进动物生长和提高动物瘦肉率等作用,曾经被当作促生长剂普遍应用于畜禽生产中,因其对人类有很强的致畸、致癌等毒副作用,大多数国家和地区已明确规定禁止在畜牧养殖中使用DES。为了降低动物生产成本,不规范使用己烯雌酚的现象仍然存在。传统的理化检测技术虽然能够监测动物源性食品中的DES残留,但其存在用时长、、程序繁琐费用高等不足,因此急需建立一种迅速、简便、灵敏、准确、成本低的分析方法。本研究应用已制备的免疫原DES-BSA和己烯雌酚单克隆抗体（DES McAb）制备了间接竞争ELISA（ci-ELISA）试剂盒（DES-Kit）和免疫胶体金标记快速检测试纸条（DES-Strip）,并用液相色谱法（HPLC）和气-质联用法（GC-MS）对DES-Kit和DES-Strip的性能进行验证。1.在分析DES分子结构和免疫原性的基础上,经过一系列化学反应在DES苯环的羟基（-OH）位点上引入活性基团羧基（-COOH）,合成具有半抗原结构特征的己烯雌酚-单-羧基丙基-醚（DES-MCPE）,利用活性酯法使DES-MCPE与牛血清白蛋白（BSA）发生偶联,合成免疫原DES-BSA, DES-MCPE与鸡卵清蛋白（OVA）偶联,制备包被抗原DES-OVA。利用紫外扫描（UV）和SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）进行初步鉴定,实验结果显示,DES-BSA紫外扫描图的最大吸收峰发生偏移,DES-BSA的泳动率小于BSA,判定DES-BSA偶联成功,并测得DES与BSA分子结合比为12.8：1。用免疫原DES-BSA免疫3只BALB/c小鼠,5次免疫后获得了抗DES多克隆抗体（DES pAb）,用间接ELISA检测DES pAb的效价均大于1：1.0×104,用cz-ELISA检测DESpAb的半数抑制浓度（IC50）,其中测定结果最好的2号小鼠的IC50为18.221 μg/L,与己烷雌酚（HEX）和双烯雌酚的（DIEN）交叉反应率（CR%）分别为8.09%、3.63%与其他竞争物没有交叉反应（CR）。获得了灵敏、特异、高效价的多克隆抗体。2.利用ELISA筛选细胞融合鼠,应用融合剂聚乙二醇（PEG4000）使SP2/0瘤细胞与免疫小鼠的脾细胞发生融合,生成的杂交瘤细胞进一步筛选、克隆和扩大培养后,采用体内诱生腹水法生产己烯雌酚单克隆抗体（DES McAb）,选取4株敏感性和选择性均好的抗DES杂家瘤细胞：1B8 DES McAb、2 C4DES McAb、4 Al DES McAb、4 C7 DES McAb,其细胞上清效价分别为：1：2.56×102、1：4.0×102、1：1.2×102、1：8.0 × 102,腹水效价分别为：1：2.0×105、1：2.56×105、1：128×105、1：5.12×105,亲和常数（Ka）分别为：3.38×109、9.27×109、2.30×109、1.87×1010 L/moL,单抗亚型分别为：]gG2a/κ、IgGl/κ、IgG2a/κ、IgG2a/K。ci-ELISA测定亲和力最高的4C7株的IC50为0.49μg/L,与HEX和DIEN的CR%分别为7.66%、3.83%,与其他竞争物没有CR。3.以DES McAb为基础,优化了ci-ELISA最佳实验条件。DES-OVA的包被浓度为0.5μg/mL, DES McAb的工作浓度为1：6.4×104；酶标二抗（GaMIgG-HRP）的稀释浓度为1：1×103；最佳包被条件为37℃,包被原DES-OVA孵育120min,37℃,5%的猪血清封闭60min；室温条件下,显色时间为TMB显色液作用10min。绘制出的ci-ELISA DES-Kit的标准曲线显示为典型的S型,与4参数logit曲线拟合相符,IC50为0.49ng/mL,检测限为0.5 ng/mL;阴性的鲫鱼肉、猪肉平均回收率分别为79.3%和81.63%,平均变异系数（CV）分别为9.28%、8.70%,平均批内CV分别为9.7%、9.3%,平均批间CV分别为7.6%、7.0%,平均批内CV和平均批间CV均小于10%；与HEX和DIEN的CR%分别为6.53%、3.42%,与其他竞争物没有CR；在4℃、避光条件下,DES-Kit可存放6个月。4.建立了胶体金的制备条件：以柠檬酸三钠（Na3C6H5O7·2H2O）作为还原剂,1.0%的氯金酸与1.0%的Na3c6H5O7·2H2O最佳的作用剂量比为1mL:1.7 mL,金颗粒直径为25 nm；胶体金标记DES McAb的最佳标记浓度为7.2 μg/ml。应用胶体金免疫层析试验（GICA）原理和获得的DES McAb制备DES-Strip, DES-Strip的标准曲线显示为典型的S型,机读检测限为0.25 μg/L,目测检测限为2.0μg/L,10min内即可完成测定,与其类似物没有CR,在4℃干燥条件下DES-Strip的保存期为9个月。5. HPLC的确证检测显示,DES-Kit与HPLC的差异为2.7%～4.3%,DES-Strip与HPLC的差异为1.5%-4.9%；GC-MS的确证检测显示,DES-Kit与GC-MS的差异为1.4%～4.1%,DES-Strip与GC-MS的差异为1.0%-4.6%,实验结果表明,4种方法的测定结果无明显差异,测定结果基本相同。
李静宇[6]（2016）在《荧光定量免疫层析法在己烯雌酚检测中的应用》文中研究说明己烯雌酚是一种人工合成的雌性激素,因其价廉效优,被广泛用于临床医学和畜牧养殖业。国内外广泛的科学研究证明己烯雌酚对人类和动物的生殖系统、免疫系统有一定的毒性,有生殖系统致癌性,且对生态环境具有强大的潜在危害,己烯雌酚的毒副作用对人类及其生存环境形成了巨大威胁,这就促使很多国家陆续出台法令禁止其使用。己烯雌酚检测方法的研究在世界各国迅猛发展,GC-MS和LC-MS是检测己烯雌酚残留的标准方法,方法准确度高,但是此类方法检测仪器昂贵、样品前处理复杂、需专业人才操作、不易普及。而荧光定量免疫层析法检测的基础是免疫反应,该类检测方法具有快速、灵敏、操作简便、成本低等诸多优点,有着广阔的发展前景。本研究旨在建立一种己烯雌酚的竞争性荧光定量免疫层析法,并针对己烯雌酚残留检测研制出一款快速高效小巧的检测试剂盒。实验首先设计合成了两种己烯雌酚半抗原（DES-HS和DES-MCME）,并通过元素分析法和质谱分析法进行联合鉴定,运用碳二亚胺法和混合酸酐法将两种半抗原与BSA进行偶联,紫外分析表明成功合成了DES-HS-BSA和DES-MCME-BSA两种完全抗原。运用ELISA和荧光定量免疫层析双平台对合成和购买的抗原抗体进行配对筛选,最终筛选出一对适用于荧光定量免疫检测的包被原B2和抗体A1。实验对荧光定量免疫层析平台进行了条件优化,结果表明:试纸条最佳工艺条件为荧光胶乳标记抗体浓度0.2 mg/mL,检测线抗原包被浓度2.0 mg/m L,荧光标记抗体的稀释参数1:100,荧光胶乳标记抗体溶液与待测样液的加样比例1:1,包被膜干燥时间36 h,层析反应时间15min。在0μg/L、2μg/L、4μg/L、8μg/L、16μg/L这五个DES浓度点建立的标准曲线线性良好,R2=0.9998。实验对试剂盒性能进行评估,结果表明:试剂盒对猪尿样本的检测限和定量限分别为0.4684μg/L和1.4316μg/L,添加回收率在95.1%97.2%之间,批内、批间精密度均符合要求,试纸条的特异性和稳定性都较好。实验探讨了不同的己烯雌酚残留样本（猪肉、鱼肉、饲料和牛奶样本）的前处理方法,不同状态和基质的样本经过不同方式的前处理后,用己烯雌酚试剂盒进行检测,结果表明:四种样本的加标回收率分别为91.50%、93.25%、91.07%和90.39%,符合检测要求,样本前处理方法有效,可以在类似基质样品中沿用。
姚军[7]（2012）在《新疆孕马结合雌激素产业化进程中关键技术研究》文中进行了进一步梳理目的:孕马结合雌激素（conjugated estrogens,CE）是雌激素补充疗法中使用最为广泛的药物,对于骨质疏松、心血管疾病及改善妇女绝经期症状有良好的治疗和预防效果。新疆伊犁地区是全国马匹最为集中的地区,在充分利用当地优势资源开发孕马结合雌激素新药的产业化进程中,有诸多关键技术需要解决。针对这些问题本课题进行了以下研究:1)建立孕马尿原料品质评价新方法,有望解决在孕马尿收购过程中快速检测的难题;2)建立新疆孕马CE原料药HPLC-UV指纹图谱、LC-MS及GC-MS药学等效性评价方法,进行新疆孕马CE原料药与美国同类产品Premarin的药学等效性（Pharmaceutical Equivalence）评价,为新疆孕马CE原料药进行国际认证提供依据;3)对新疆孕马CE原料药中未知成分的化学结构进行分析,为进一步揭示和证实孕马CE的多靶点综合作用的物质基础提供依据。方法:1.孕马尿原料品质评价研究采用自制HPD-400大孔吸附树脂固相萃取小柱对孕马尿样品进行前处理,利用5%NaCl溶液及1.5%NaOH溶液除去孕马尿中干扰杂质,无水乙醇进行洗脱,利用乙酸乙酯-二氯甲烷-甲醇（30:90:22）作为展开剂,利用硅胶板和银化硅胶板对孕马尿中雌酮硫酸钠（ES）、马烯雌酮硫酸钠（EqS）和17α-双氢马烯雌酮硫酸钠（17α-EqS）等主要结合雌激素进行分离,采用20%的硫酸乙醇溶液作为显色剂,进行新疆孕马尿中主要CE定性研究。采用HPD-400大孔吸附树脂固相萃取进行孕马尿前处理,采用高效液相色谱法（HPLC）、超高效液相色谱法（UPLC）及液相色谱-质谱联用法（LC-MS）三种检测方法对孕马尿中3种主要CE进行含量测定,建立了孕马尿中3种主要CE含量的HPLC、UPLC及LC-MS测定方法,考察了三种方法的精密度和准确度,以寻找快速检测孕马尿中主要CE含量的方法。2.新疆孕马结合雌激素原料药质量评价方法研究1)新疆孕马CE原料药HPLC-UV指纹图谱质量评价方法研究采用0.025mol/L磷酸二氢钾溶液和乙腈为流动相,梯度洗脱,Agilent Zorbax ODS柱（4.6mm×250mm、5μm）为分析柱,检测波长215nm,考察了 10批新疆孕马CE原料药与3批美国同类产品Premarin的HPLC-UV指纹图谱中共有峰的个数、相对保留时间及相对峰面积等指标。2)新疆孕马CE原料药与美国同类产品Premarin的LC-MS药学等效性评价根据美国FDA的工业指南提供的LC-MS药学等效性评价方法,对10批新疆孕马CE原料药与3批Premarin在LC-MS药学等效性条件下的56个m/z的提取离子色谱进行考察,以相对峰面积>0.1%及>1%的碎片离子数目进行分析,对新疆孕马CE原料药与美国同类产品Premarin进行药学等效性一致性评价。3)新疆孕马CE原料药GC-MS药学等效性评价研究采用硫酸酯酶水解孕马CE原料药,采用1%三甲基氯硅烷的二（三甲基硅烷）三氟乙酰胺进行衍生化,以恒压模式进行分析,15m的DB-225毛细管色谱柱进行分离,质谱条件:EI源,离子源温度:200℃,倍增器电压:1kv,质谱库:NIST。建立了新疆孕马CE原料药GC-MS指纹图谱,在GC-MS指纹图谱基础上建立了新疆孕马CE原料药GC-MS药学等效性评价方法,以共有峰的个数、相对保留时间、特征离子碎片及及相对峰面积,作为评价指标,并与Premarin进行GC-MS药学等效性评价。3.新疆孕马结合雌激素原料药中未知成分的化学结构质谱分析在GC-MS药学等效性实验的基础上,利用GC-MS方法中MS的定性功能,通过组分的电子轰击源（EI）及化学电离源（CI）得到的碎片离子特征图谱,结合EI源裂解规律及标准图谱的信息,对新疆孕马CE原料药中GC-MS指纹图谱中40个共有峰对应的化合物进行结构分析,并采用对照品对鉴定的化合物的结构进行确证。结果:1.孕马尿品质评价研究经HPD-400大孔吸附树脂固相萃取小柱前处理后的样品进行薄层色谱定性分析,供试品与对照品在相应位置显相同颜色的条带,条带清晰,分离效果好,阴性无干扰。银化硅胶G板能有效分离雌酮硫酸钠、马烯雌酮硫酸钠及17α-双氢马烯雌酮硫酸钠。建立的HPLC、UPLC及LC-MS含量测定方法的准确度和精密度均能符合检测要求。UPLC和LC-MS方法较HPLC方法能大大缩短样品测定周期,并通过6批孕马尿样品测定结果的统计方法比较,结果显示三种方法的测定结果无统计学意义。2.新疆孕马结合雌激素原料药质量评价方法研究建立的HPLC-UV指纹图谱法表明10批新疆孕马CE原料药的一致性很好,检测出新疆孕马CE原料药中相对峰面积>0.1%的27个共有峰,得到分离度和重现性较好的CE原料药HPLC-UV指纹图谱,利用建立的HPLC-UV指纹图谱评价指标分析3批Premarin的HPLC-UV指纹图谱情况,结果显示:新疆孕马CE原料药与Premarin的成分一致性较好,新疆孕马CE原料药在58min处多出一个峰。新疆孕马CE原料药的LC-MS药学等效性实验结果显示:有56个m/z提取离子图谱（EIC）中可观察到明显的峰;其中50-54个m/z的EIC图谱检测到离子峰的峰面积>0.1%,相对峰面积在0.1%以上的峰数平均为230个,m/z个数平均52个,19～23个m/z的EIC图谱检测到离子峰的峰面积>1%,峰数平均为42个,m/z个数平均为21个,新疆孕马CE原料药与Premarin药学等效性实验结果基本一致,符合FDA工业指南的要求。建立的GC-MS药学等效性评价方法可以检测出新疆孕马CE原料药中相对峰面积>0.1%的40个共有峰,通过对10批新疆孕马CE原料药和3批Premarin的GC-MS药学等效性考察,结果显示:新疆孕马CE原料药中有4个小峰略有差异,其余共有峰与美国同类产品Premarin一致性很好。3.新疆孕马结合雌激素原料药中未知成分的化学结构质谱分析通过新疆孕马CE原料药的GC-MS色谱峰的EI-MS及CI-MS的碎片离子信息,对新疆孕马CE原料药与Premarin有差异的4种成分进行了 MS解析,确定其化学结构分别为3-羟基-孕甾-16-脱氢-20-酮、3-羟基-1,3,5（10）-甾三烯-6,17-二酮、3-羟基-16-甲氧基-孕甾-20-酮及3-羟基-1,3,5（10）-雌甾三烯-17-酮。通过与对照品验证,证明了质谱推断的正确;通过LC-MS信息,确定了其中2种在原料药中是以硫酸钠盐形式存在、1种是以游离态形式存在。通过标准图谱检索得到18种共有组分的结构信息;10种共有成分的化学结构通过质谱分析得到其结构。组分的质谱分析表明:新疆孕马结合雌激素原料药中39（不含内标峰）共有峰中雌激素为14种,孕激素5种,雄激素10种,脂肪酸酯2种,8个较小面积的色谱峰对应的化合物未能鉴定。结论:1.本文所建立的孕马尿大孔树脂固相萃取前处理方法,快速、成本低、除杂效果好,可作为孕马尿中主要CE定性、定量检测的前处理方法。银化硅胶薄层法可作为3种主要CE的快速定性方法。UPLC及LC-MS法可作为孕马尿中3种主要CE的快速定量检测方法。2.新疆孕马CE原料药的HPLC-UV指纹图谱、LC-MS及GC-MS药学等效性实验的建立为新疆孕马CE原料药的质量评价提供重要方法,在上述三种方法下进行新疆孕马CE原料药与Premarin的质量评价,结果显示新疆孕马CE原料药与Premarin在成分组成上极为相似,证明新疆孕马CE原料药与Premarin具有药学等效性。3.通过对新疆孕马CE原料药和Premarin的GC-MS指纹图谱分析,采用质谱分析方法鉴定了新疆孕马CE原料药中含量较大的32种成分的化学结构,其中11种成分为目前已报道的CE（包括内标）,其余21种均为首次通过质谱分析确定化学结构的,这些成分化学结构的确定,为进一步揭示和证实了孕马CE的多靶点综合作用的物质基础。
孙亚楠[8]（2011）在《核糖体展示天然鼠源scFv文库筛选己烯雌酚抗体》文中研究说明己烯雌酚（Diethylstilbestrol, DES）是第一个有活性可口服的人工合成非甾体雌激素物质。但是,随着研究的深入,发现DES有对人致癌,致畸以及对生殖系统的危害。针对上述情况,发展检测DES残留的简便、快速、灵敏的方法是有效遏制滥用DES的重要技术手段,也是维护法规制度的必要保障。与其它检测方法相比,具有快速、灵敏、简便特性的检测方法是免疫学分析方法。但是此法需要以特异性的抗体作为检测基础。利用核糖体展示技术筛选单链抗体（singe chain variable fragment, scFv）,成本低,方便进行大规模生产等。从未经免疫的动物或人的免疫组织或B细胞中,构建的天然抗体文库,从理论上讲,只要使用合适的筛选方法,任何抗原都可以从中筛选到相应的抗体,具有较强的通用性。利用核糖体展示技术筛选针对小分子半抗原单链抗体的研究较少,尤其是从天然抗体文库中筛选更是少之又少。目前,还未见到利用此技术从天然抗体文库中筛选DES单链抗体的报道。本研究利用重叠引物延伸法（splicing by overlap extension, SOE） PCR技术构建了天然鼠源单链抗体文库,应用核糖体展示技术筛选己烯雌酚特异的单链抗体。主要研究结果如下：主要研究结果如下：1.从未免疫的6-8周龄Balb/c小鼠的脾脏细胞中提取总RNA,利用Oligo（dT）15引物反转出单链cDNA,再扩增VH、VL基因片段,大小分别约为380 bp,350 bp;合成（G4S）3linker,经序列测定,与理论序列完全一致。利用SOE-PCR构建单链抗体文库,大小约为750 bp,经序列比对,单链抗体的文库中约80%的单链抗体可以正确翻译,无移码突变和致死突变,无终止密码子；测序正确的单链抗体互补决定区氨基酸序列均不相同,证明构建的单链抗体文库具有良好的多样性,可以进行下一步的单链抗体筛选。2.核糖体展示元件T（包含T7启动子,5’茎环,核糖体识别位点）以及间隔序列P（包含3’茎环,间隔序列）是从已构建好的载体pT7PD上扩增,其大小分别为102bp和298bp,两片段分别经序列测定,与理论序列完全一致。以重叠引物延伸法（splicing by overlap extension, SOE）将T片段与scFv文库连接,再将P片段与其拼接,构建成核糖体展示单链抗体文库,大小为1200 bp左右。3.鼠源天然scFv文库质量的鉴定。（1）将构建好的核糖体展示单链抗体文库连接pMD18-T克隆载体后,随机挑取13株送Invitrogen公司测序鉴定文库的完整性和多样性。由测序结果可知,共有9株序列与文库理论大小相符,且能完全正确的翻译,内部无终止密码子,无移码突变和点突变。由序列分析可知文库仍保持着多样性,经Bioedit软件对文库的氨基酸序列分析,CDR区仍然保持着高度的可变性。以上结果进一步验证了利用SOE-PCR构建核糖体展示单链抗体文库的方法是可行的,为下一步文库的筛选打下了坚实的基础。（2）经鉴定,文库的可扩增性,转录活性,反转录活性良好。4.使用固相和液相交替筛选的方法对文库进行七轮筛选,第一轮筛选后RT-PCR得到的条带比较弱,说明原始抗体文库中能与DES结合的抗体较少。经过七轮核糖体展示筛选后,RT-PCR扩增得到的DNA条带亮度明显增加,说明筛选后的抗体文库中抗原阳性的抗体得到了富集。5.将七轮筛选后单链抗体文库进行序列鉴定,其中有43株无致死突变,可以进行DES结合活性的测定。6.随机挑选26个克隆子,将单链抗体基因与pTIG-TRX连接成表达载体,在大肠杆菌BL21（DE3）中表达,经SDS-PAGE和Western Blot鉴定,在约30KDa处有目的蛋白条带,与理论蛋白大小一致,确定表达产物存在于破碎菌体后的上清液中。7.将26株克隆子的表达上清液用间接ELISA和间接竞争ELISA分别鉴定,结果筛选出5株克隆子对DES有特异性的结合。8.对5株克隆子进行序列比对,结果表明CDR区有相似性,推断抗DES单链抗体的抗体识别位点相似。用SPR分析筛出的一株30-3的单链抗体的亲和力为3.79×10-6M。利用Anti-His tag亲和层析柱对表达的单链抗体进行了纯化,使目的条带得到了明显的浓缩。
韩康[9]（2008）在《医药中苯系物和丙烯酰胺的色谱分析方法研究》文中提出随着色谱技术的不断发展,色谱在医药分析中的应用越来越广泛。本文首先对色谱在医药分析中的应用进行了综述,主要包括医药的样品前处理方法,气相色谱和高效液相色谱在医药分析中的应用,以及医药中苯系物,丙烯酰胺和糖的测定方法,引用文献85篇。第二章建立了一种新的药品及水中残留溶剂的测定方法,采用顶空单液滴微萃取-气相色谱法测定了马来酸氯苯那敏及水中苯、甲苯、对二甲苯的含量,考察了不同萃取剂、萃取条件对检测结果的影响。苯、甲苯和对二甲苯的检测限分别为1.3×10-3、1.3×10-3和7.8×10-4μg／g,平均回收率分别为97.0%、100.2%和92.7%；马来酸氯苯那敏中有甲苯检出但不超标,污水中未检测出三种苯系物。第三章采用离子排斥色谱法测定焦麦芽中的丙烯酰胺,以水提取焦麦芽中的丙烯酰胺、固相萃取柱净化浓缩、离子排斥色谱分离、紫外检测器测定其含量,考察了丙烯酰胺的分离检测条件以及炮制中药焦麦芽的样品预处理方法。丙烯酰胺在0.020 mg/L-5.00 mg/L范围内线性良好,相关系数0.9996,平均回收率为96.0%。第四章采用衍生化高效液相色谱法测定炮制中草药中的单糖组成,考察了单糖的色谱分离条件,用水提取炮制中药焦麦芽中的多糖、三氟乙酸水解,经1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）柱前衍生化反应,在0.10 mmol/L-0.001mmol/L范围内,甘露糖、鼠李糖、葡萄糖和木糖的线性相关系数在0.9995-0.9999之间,平均回收率在84.2%-108.8%之间,主要单糖为葡萄糖。
杨泽晓[10]（2008）在《醋酸甲羟孕酮的单克隆抗体及ELISA检测技术研究》文中研究表明动物性食品卫生问题,尤其是兽药残留问题,已成为人们广泛关注的焦点之一,也是引起国际贸易中经济纠纷的主要起因。2002年,欧盟发生的醋酸甲羟孕酮（Medroxy progesterone acetate,MPA）饲料污染事件再次给世界各国政府食品安全管理部门和消费者敲响了警钟,引起国际上的强烈反响。MPA是一种人工合成的孕激素类药物,为了提高经济效益,将MPA作为安情助长药物在畜牧养殖业中使用。但长期大量使用可导致动物性食品中MPA残留,对消费者的健康造成潜在威胁,可能引起乳腺癌、不孕不育症等不良反应,欧盟等很多国家已明令禁止将MPA用于食源性动物的任何用途,但MPA仍被一些国家仍允许使用。因此,加强MPA残留的监控和进出口相关产品的检验势在必行。本研究通过制备抗MPA的单克隆抗体,建立了MPA残留检测的间接竞争ELISA方法,具体结果如下:1.根据MPA的分子结构,利用肟化反应和酰化反应构建一个含有羧基4个碳原子的分子间隔臂,将MPA与盐酸羟胺、琥珀酸酐依次反应获得含有羧基的MPA衍生物;再分别通过碳二亚胺法、混合酸酐法将含有羧基的MPA衍生物偶联到载体蛋白BSA和OVA上合成人工抗原,Balb/c小鼠免疫试验和ELISA检测筛选表明人工抗原具有良好的免疫原性和反应原性,成功合成了MPA的一种免疫抗原（MPA-BSA）与一种包被抗原（MPA-OVA）,SDS-PAGE和紫外扫描鉴定表明,合成人工抗原MPA-BSA与MPA-OVA中MPA与载体蛋白的偶联比分别为12∶1和8∶1,为下一步MPA单克隆抗体的制备提供了理想材料。2.以MPA-OVA作为包被检测抗原,以三免后抗体阳性小鼠血清、生理盐水组小鼠血清分别为阳性对照和阴性对照,通过对包被条件、封闭条件、终止条件、二抗浓度和各步的反应时间的选择,确立了用于抗MPA抗体检测和单克隆抗体阳性筛选的ELISA和间接竞争抑制ELISA操作体系。用MPA-BSA按免疫程序,进行Balb/c小鼠第四次免疫,经间接ELISA检测,选择免疫效果最好的小鼠10 d后加强免疫,按照实验室常规单克隆抗体（McAb）制备与鉴定方法,进行细胞融合、阳性筛选、克隆亚克隆、腹水制备以及McAb特性鉴定,获得了一株生长稳定、分泌抗体效价高的抗MPA McAb杂交瘤细胞株M68F9。经检测制备的抗MPA McAb特异性强、敏感性高、亲和力高,属于IgG1亚类,细胞培养上清中抗MPA McAb间接ELISA效价不低于1∶1 500,腹水中McAb的间接ELISA效价不低于1∶1×107;抗MPA McAb与甲地孕酮交叉反应率为25%,与其他常见残留兽药莱克多巴胺、克伦特罗、己烯雌酚的交叉反应率均小于0.01%,其MPA的半数抑制浓度（IC50）为2～4 ng/mL,为进一步开展MPA免疫学分析技术的研究奠定了基础。3.利用亲和层析法-Protein G Sepharose 4 Fast Flow对抗MPA McAb进行了纯化,经SDS-PAGE鉴定与间接ELISA抗体活性检测,获得了具有良好的纯度与活性的纯化抗MPA McAb。在抗MPA McAb阳性筛选ELISA反应条件的基础上,以MPA-BSA为包被原,以纯化的抗MPA McAb为检测抗体,通过对包被溶液、封闭液和抗体稀释液、酶标二抗稀释度、竞争反应体系和显色时间等条件的优化,确立了用于MPA检测的间接竞争ELISA方法。并对建立的间接竞争ELISA方法进行了灵敏度、特异性、精密度和保存期等指标的测定,同时与国外进口的MPA检测试剂盒（5131MPA1p[3]08.05）进行了比较和初步应用试验。结果表明,所建立的间接竞争ELISA最低检测限在0.1～0.5 ng/mL,IC50为3.3914 ng/mL,线性检测范围在1～80 ng/mL（R2=0.9925）;除与甲地孕酮交叉反应率为25%外,与其他结构的兽药没有交叉反应;检测方法具有良好的可重复性,批内变异系数为3.70%,批间的变异系数为4.00%;在2～8℃条件下抗原包被板保存期不低于6个月。所建立的方法与进口试剂盒的相关参数相近,初步应用试验的检测结果两种方法完全相符,表明所建立的ELISA方法可以满足MPA残留分析的需求。本研究通过对MPA的人工抗原合成与其McAb制备的研究,首次以MPA单克隆抗体为基础,成功地建立了可用于MPA检测的ELISA方法,为MPA残留免疫学检测技术研究提供了良好的技术平台,同时也为我国自主知识产权的MPA检测EIA试剂盒的组装生产奠定了基础。
二、薄层色谱法同时鉴别复方己烯雌酚栓的四种成分（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、薄层色谱法同时鉴别复方己烯雌酚栓的四种成分（论文提纲范文）
（1）四制香附和蒸陈皮的质量评价研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 四制香附炮制前后UPLC指纹图谱比较 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第二部分 UPLC测定四制香附炮制前后指标成分含量 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第三部分 基于颜色-成分分析比较香附四制前后差异 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第四部分 四制香附炮制前后多糖含量比较 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第五部分 四制香附炮制前后其他检测项目比较 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第六部分 蒸陈皮炮制前后UPLC指纹图谱比较 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第七部分 UPLC测定蒸陈皮中指标成分含量 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第八部分 基于颜色-成分分析比较陈皮蒸制前后差异 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 总结 |
| 第九部分 四制香附和蒸陈皮的质量标准及起草说明 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果 |
| 个人简历 |
（2）肤康凝胶的药学及药效学研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 论文一 肤康凝胶制备工艺研究 |
| 1 实验仪器与材料 |
| 2 实验方法与结果 |
| 3 小量试制生产数据 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文二 肤康凝胶的质量标准研究 |
| 第一节 肤康凝胶的鉴别研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 实验结论 |
| 第二节 肤康凝胶的含量测定研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法与结果 |
| 3 实验结论 |
| 第三节 肤康凝胶性状及检查 |
| 1 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结论 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文三 肤康凝胶初步稳定性实验研究 |
| 1 实验器材 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结论 |
| 论文四 肤康凝胶药效学试验研究 |
| 第一节 细菌菌落总数测定 |
| 1 实验器材 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 实验结论 |
| 第二节 抑菌效果稳定性试验研究 |
| 1 实验器材 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 实验结论 |
| 第三节 溶出性抑菌产品抑菌性能研究 |
| 1 实验器材 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 实验结论 |
| 第四节 皮肤刺激性实验研究 |
| 1 实验器材 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 实验结论 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 本实验的创新性自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 凝胶剂的研究进展及临床应用 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（3）畜禽肉中雄激素及同化激素检测方法的研究与应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略表 |
| 第1章 雄激素及同化激素研究进展 |
| 1.1. 雄激素及同化激素概况 |
| 1.1.1. 雄激素及同化激素的分类与理化性质 |
| 1.1.2. 雄激素及同化激素的生理及药理作用及其养殖业中的应用 |
| 1.1.3. 雄激素及同化激素进入食品的途径 |
| 1.1.4. 雄激素及同化激素的残留危害 |
| 1.1.5. 雄激素及同化激素的监控 |
| 1.2. 雄激素及同化激素的检测方法 |
| 1.2.1. 免疫分析法 |
| 1.2.2. 色谱分析法 |
| 1.2.3. 样品前处理方法 |
| 1.3. 研究的背景、目的及意义 |
| 1.3.1. 研究背景 |
| 1.3.2. 研究目的 |
| 1.3.3. 研究意义 |
| 1.4. 研究方法及研究内容 |
| 1.4.1. 研究方法 |
| 1.4.2. 研究内容 |
| 第2章 畜禽肉中雄激素及同化激素检测方法的研究 |
| 2.1. 材料与方法 |
| 2.1.1. 仪器与试剂 |
| 2.1.2. 质谱及色谱条件 |
| 2.1.3. 前处理方法 |
| 2.2. 结果与分析 |
| 2.2.1. 质谱条件的优化 |
| 2.2.2. 色谱条件的优化 |
| 2.2.3. 前处理方法的确定 |
| 2.2.4. 线性关系 |
| 2.2.5. 检出限和定量限 |
| 2.2.6. 精密度和回收率 |
| 2.3. 讨论 |
| 2.3.1. 毛细管电压及碰撞能量的选择 |
| 2.3.2. 流动相的选择 |
| 2.3.3. 提取剂的选择 |
| 2.3.4. 净化剂的选择 |
| 2.3.5. QuEChERS技术的优势 |
| 2.3.6. 基质效应的消除 |
| 2.4. 小结 |
| 第3章 畜禽肉中雄激素及同化激素含量的检测应用 |
| 3.1. 材料与方法 |
| 3.1.1. 样品、仪器及试剂 |
| 3.1.2. 色谱、质谱条件 |
| 3.1.3. 前处理方法 |
| 3.1.4. 标准曲线与加标回收率 |
| 3.2. 结果与分析 |
| 3.2.1. 检测方法灵敏度、准确度与精密度 |
| 3.2.2. 检测结果 |
| 3.3. 讨论 |
| 3.3.1. 样品出现阳性结果的原因 |
| 3.3.2. 本方法的优势 |
| 3.4. 小结 |
| 第4章 全文总结 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
（4）动物源性食品中性激素残留的危害及检测方法（论文提纲范文）
| 1 性激素在畜牧业中的应用 |
| 2 动物源性食品中性激素残留的危害 |
| 3 动物性食品中性激素残留检测方法 |
| 3. 1 免疫分析法 |
| 3. 2 色谱分析法 |
| 3. 3 其他方法 |
| 4 结果 |
（5）己烯雌酚残留免疫学快速检测研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 研究进展 |
| 1 己烯雌酚的理化性质 |
| 2 己烯雌酚的药理作用 |
| 3 己烯雌酚的临床应用 |
| 3.1 DES在医学临床上的应用 |
| 3.2 DES在兽医临床上的应用 |
| 4 己烯雌酚的危害 |
| 4.1 DES对生殖系统的危害 |
| 4.1.1 DES对雄性生殖系统的危害 |
| 4.1.2 DES对雌性生殖系统的危害 |
| 4.2 DES对环境的危害 |
| 5 己烯雌酚在畜牧养殖业的应用规定 |
| 6 己烯雌酚的检测方法 |
| 6.1 理化检测法 |
| 6.1.1 气相色谱法(gas phase chromatography,GC) |
| 6.1.2 液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC) |
| 6.1.3 薄层色谱法(Thin-Layer Chromatography,TLC) |
| 6.1.4 联用技术 |
| 6.1.5 毛细管电泳法(Capillary Electrophoresis,CE) |
| 6.1.6 化学发光(CL)分析法 |
| 6.2 免疫检测法 |
| 6.2.1 ELISA(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA) |
| 6.2.2 胶体金免疫层析技术 |
| 7 本研究的背景、目的及意义 |
| 8 本研究的主要内容和技术路线 |
| 8.1 研究的主要内容 |
| 8.2 技术路线 |
| 第二章 己烯雌酚人工抗原的合成及抗血清的制备 |
| 1 材料 |
| 1.1 试剂和溶液 |
| 1.2 主要仪器设备 |
| 1.3 试验动物 |
| 2 方法 |
| 2.1 DES人工抗原的合成 |
| 2.1.1 己烯雌酚-单羧基丙基醚(DES-MCPE)的合成 |
| 2.1.2 DES-BSA免疫原、DES-OVA包被原的制备 |
| 2.2 DES人工抗原的鉴定 |
| 2.2.1 UV鉴定DES人工抗原 |
| 2.2.2 SDS-PAGE凝胶电泳鉴定DES人工抗原 |
| 2.3 DES抗血清(pAb)的制备 |
| 2.4 DES pAb的鉴定 |
| 2.4.1 DES pAb效价测定 |
| 2.4.2 DES pAb敏感性鉴定 |
| 2.4.3 DES pAb特异性测定 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 DES人工抗原的鉴定 |
| 3.1.1 UV鉴定结果 |
| 3.1.2 SDS-PAGE鉴定结果 |
| 3.2 DES pAb的鉴定结果 |
| 3.2.1 DES pAb间接ELISA检测结果 |
| 3.2.2 DES pAb敏感性鉴定结果 |
| 3.2.3 DES pAb特异性鉴定结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 DES-MCPE的合成 |
| 4.2 选择适宜的载体蛋白 |
| 4.3 半抗原的偶联比 |
| 4.4 免疫动物和免疫途径的选取 |
| 4.5 DES完全抗原的鉴定 |
| 5 小结 |
| 第三章 己烯雌酚单克隆抗体的制备及其免疫学特性的鉴定 |
| 1 材料 |
| 1.1 试剂与溶液 |
| 1.1.1 主要试剂 |
| 1.1.2 主要实验试剂的配制 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 试验动物 |
| 2 方法 |
| 2.1 杂交瘤细胞株的建立 |
| 2.1.1 选择细胞融合备用鼠 |
| 2.1.2 SP2/0骨髓瘤细胞(SP2/0 Myeloma cells)的准备 |
| 2.1.3 饲养细胞的制备 |
| 2.1.4 脾细胞的制备 |
| 2.1.5 细胞融合 |
| 2.1.6 杂交瘤细胞(Hybridoma cells)的筛选 |
| 2.1.7 克隆阳性杂交瘤细胞 |
| 2.1.8 Hybridoma cells的扩大培养 |
| 2.1.9 Hybridoma cells的冻存 |
| 2.2 DES McAb的制备 |
| 2.3 DES单克隆抗体(McAb)的鉴定 |
| 2.3.1 DES McAb效价的测定 |
| 2.3.2 DE SMcAb敏感性鉴定 |
| 2.3.3 DES McAb亲和力鉴定 |
| 2.3.4 间接ELISA鉴定DES McAb的亚型 |
| 2.3.5 DES McAb特异性鉴定 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 融合细胞的显微镜检查 |
| 3.2 杂交瘤细胞株的筛选 |
| 3.3 效价测定结果 |
| 3.4 敏感性鉴定结果 |
| 3.5 亲和力鉴定结果 |
| 3.6 亚型分析结果 |
| 3.7 特异性鉴定结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 影响细胞融合的因素 |
| 4.1.1 Myeloma cells系的选择 |
| 4.1.2 脾细胞的敏感性 |
| 4.1.3 饲养细胞的量 |
| 4.1.4 融合剂聚乙二醇的使用 |
| 4.2 杂交瘤细胞株的建立 |
| 4.3 DES pAb和DES McAb的对比 |
| 4.4 关于DES McAb的大量生产 |
| 4.4.1 体外细胞培养法 |
| 4.4.2 动物体内诱生法 |
| 4.5 DES McAb的鉴定 |
| 5 小结 |
| 第四章 己烯雌酚间接竞争ELISA试剂盒的研制 |
| 1 材料 |
| 1.1 试剂与溶液 |
| 1.2 仪器 |
| 1.3 杂交瘤细胞、DES McAb |
| 2 方法 |
| 2.1 DES检测ci-ELISA实验条件的优化 |
| 2.1.1 DES-OVA的包被浓度、DESMcAb的工作浓度的选取(方阵滴定实验) |
| 2.1.2 GaMIgG-HRP稀释浓度的选取 |
| 2.1.3 DES-OVA包被时间的选取 |
| 2.1.4 封闭液、封闭时间的选取 |
| 2.1.5 TMB显色液显色时间的选取 |
| 2.1.6 ci-ELISA方法的建立 |
| 2.1.7 绘制标准曲线 |
| 2.2 DES-Kit的配置、操作步骤和结果判定 |
| 2.2.1 DES-Kit的配置 |
| 2.2.2 测定样品的前处理 |
| 2.2.3 DES-kit的操作步骤 |
| 2.2.4 结果判定 |
| 2.3 DES-Kit的性能测定 |
| 2.3.1 准确度 |
| 2.3.2 精密度 |
| 2.3.3 特异性 |
| 2.3.4 灵敏度(检测限) |
| 2.3.5 稳定性 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 DES检测ci-ELISA反应条件的优化 |
| 3.1.1 DES-OVA包被浓度和DEESMcAb工作浓度的选取 |
| 3.1.2 GaMIgG-HRP稀释浓度的选取 |
| 3.1.3 DES-OVA包被时间的选取 |
| 3.1.4 封闭液、封闭时间的选取 |
| 3.1.5 TMB显色液显色时间的选取 |
| 3.1.6 标准曲线的绘制与曲线拟合 |
| 3.2 DES检测ci-ELISA反应体系的建立 |
| 3.3 DES-Kit的性能测定 |
| 3.3.1 准确度检测结果 |
| 3.3.2 精密度检测结果 |
| 3.3.3 特异性检测结果 |
| 3.3.4 灵敏度检测结果 |
| 3.3.5 稳定性检测结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 小分子半抗原的ELISA检测技术的反应模式 |
| 4.2 ELISA的各个关键技术环节 |
| 4.2.1 包被结果 |
| 4.2.2 封闭效果 |
| 4.2.3 GaMIgG-HRP的稀释浓度 |
| 4.3 DES-Kit的质量特性 |
| 4.4 测定样品的添加回收率 |
| 4.5 样品的提取及纯化 |
| 5 小结 |
| 第五章 己烯雌酚残留快速检测免疫金标试纸的制备、性能测定 |
| 1 材料 |
| 1.1 试剂 |
| 1.2 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 DES McAb的制备与纯化 |
| 2.2 胶体金的制备、质量鉴定 |
| 2.2.1 胶体金的制备 |
| 2.2.2 胶体金的质量鉴定 |
| 2.3 胶体金标记抗体 |
| 2.3.1 胶体金溶液和将要标记的DES McAb的前处理 |
| 2.3.2 DES McAb最优胶体金标记浓度的选取 |
| 2.3.3 胶体金标记DES McAb |
| 2.4 检测试纸的制备 |
| 2.4.1 金标抗体(Au-McAb)玻璃纤维棉的处理 |
| 2.4.2 NC膜印迹的制备 |
| 2.4.3 检测试纸的组装 |
| 2.5 试纸检测方法的建立 |
| 2.5.1 目测半定量测定法的建立 |
| 2.5.2 机读定量测定法的建立 |
| 2.6 测定样品的前处理 |
| 2.7 DES-strip的性能测定 |
| 2.7.1 重复性检测 |
| 2.7.2 敏感性检测 |
| 2.7.3 有效期检测 |
| 2.7.4 特异性检测 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 胶体金的质量鉴定 |
| 3.1.1 紫外可见扫描 |
| 3.1.2 投射电镜扫描 |
| 3.2 DES McAb最优胶体金标记浓度的选取 |
| 3.3 DES-Strip的组装 |
| 3.4 DES-Strip检测方法的建立 |
| 3.4.1 定量机读测定法的建立 |
| 3.4.2 半定量目测测定法、检出限 |
| 3.5 DES-strip的性能测定 |
| 3.5.1 重复性检测 |
| 3.5.2 敏感性检测 |
| 3.5.3 有效期检测 |
| 3.5.4 特异性检测 |
| 4 讨论 |
| 4.1 胶体金的制备 |
| 4.1.1 胶体金的还原技术 |
| 4.1.2 胶体金颗粒直径的选取 |
| 4.1.3 胶体金的质量评定 |
| 4.2 胶体金标记DES McAb |
| 4.2.1 胶体金标记DES McAb时的pH值的选取 |
| 4.2.2 胶体金标记DES McAb最优浓度的选取 |
| 4.3 硝酸纤维素膜的选取 |
| 4.4 DES-strip的检测原理 |
| 4.5 DES-strip的质量特性 |
| 5 小结 |
| 第六章 DES-KIT、DES-STRIP和GC-MS、HPLC确证方法的对比 |
| 1 材料 |
| 1.1 主要试剂 |
| 1.2 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 实验动物的饲喂 |
| 2.2 DES-Kit、DES-Strip法标准品配制及测定 |
| 2.3 GC-MS法标准品配制及检测 |
| 2.3.1 标准品配制 |
| 2.3.2 固相萃取 |
| 2.3.3 衍生化处理 |
| 2.3.4 确定GC-MS检测条件 |
| 2.3.5 绘制标准曲线、得出回收率 |
| 2.4 HPLC法标准品的配制及检测 |
| 2.4.1 标准品配制 |
| 2.4.2 检测波长的选择 |
| 2.4.3 流动相的筛选 |
| 2.4.4 色谱条件的确定 |
| 2.4.5 绘制标准曲线、得出回收率 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 DES-Kit、DES-Strip和GC-MS、HPLC技术参数的对比 |
| 3.2 DES-Kit、DES-Strip与HPLC的对比 |
| 3.3 DES-Kit、DES-Strip与GC-MS的对比 |
| 3.4 DES-Kit、DES-Strip和GC-MS检测猪尿液中DES含量的结果对比 |
| 4 讨论 |
| 4.1 测定DES含量方法的标准 |
| 4.2 DES不同测定技术灵敏性的对比 |
| 4.3 DES残留不同检测技术所需时间和费用的对比 |
| 5 小结 |
| 研究结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 博士期间的研究成果 |
（6）荧光定量免疫层析法在己烯雌酚检测中的应用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.2 雌酚类药物概述 |
| 1.3 己烯雌酚概述 |
| 1.3.1 己烯雌酚的理化性质 |
| 1.3.2 己烯雌酚药理分析和应用情况 |
| 1.3.3 己烯雌酚的代谢 |
| 1.3.4 己烯雌酚的危害 |
| 1.3.5 己烯雌酚残留现状 |
| 1.4 己烯雌酚国内外研究现状 |
| 1.4.1 己烯雌酚的检测技术 |
| 1.4.2 己烯雌酚检测方法的标准 |
| 1.5 荧光定量免疫层析技术简介 |
| 1.5.1 基本原理 |
| 1.5.2 荧光定量免疫层析方法现状及展望 |
| 1.6 研究的目的、意义和内容 |
| 1.6.1 研究的目的及意义 |
| 1.6.2 研究的内容 |
| 1.6.3 技术路线 |
| 第二章 己烯雌酚完全抗原的合成与鉴定 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 材料与试剂 |
| 2.2.2 实验仪器设备 |
| 2.2.3 溶液系统 |
| 2.2.4 试剂和材料的前处理 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 己烯雌酚半抗原的合成与鉴定 |
| 2.3.2 己烯雌酚完全抗原的合成与鉴定 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 己烯雌酚半抗原的鉴定 |
| 2.4.2 己烯雌酚完全抗原的鉴定 |
| 2.5 讨论 |
| 2.5.1 关于完全抗原的合成 |
| 2.5.2 关于人工抗原的鉴定 |
| 2.6 本章小结 |
| 第三章 荧光定量免疫层析平台的建立及条件优化 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与仪器 |
| 3.2.1 实验材料与试剂 |
| 3.2.2 实验仪器设备 |
| 3.2.3 主要溶液 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 荧光胶乳标记抗体的制备和电镜分析 |
| 3.3.2 荧光定量免疫层析试纸条的制备 |
| 3.3.3 ELISA平台抗原抗体配对 |
| 3.3.4 荧光定量免疫层析平台抗原抗体配对 |
| 3.3.5 荧光定量免疫层析试纸条工艺条件优化 |
| 3.4 实验结果与分析 |
| 3.4.1 荧光胶乳和荧光胶乳标记抗体扫描电镜图 |
| 3.4.2 ELISA平台抗原抗体配对结果 |
| 3.4.3 荧光定量免疫层析平台抗原抗体配对结果 |
| 3.4.4 荧光定量免疫层析试纸条工艺条件优化结果 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 己烯雌酚残留荧光定量免疫层析检测试剂盒 |
| 4.1 实验材料与仪器 |
| 4.1.1 实验材料与试剂 |
| 4.1.2 实验仪器设备 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 试纸条性能测试 |
| 4.3 实验结果与分析 |
| 4.3.1 试纸条性能测试结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.4.1 DES残留检测荧光定量免疫层析试剂盒组成 |
| 4.4.2 试剂盒的质量标准 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 己烯雌酚残留样本前处理方法研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料与仪器 |
| 5.2.1 实验材料与试剂 |
| 5.2.2 实验仪器设备 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 样品前处理 |
| 5.3.2 样品测定 |
| 5.3.3 检测方法回收率的测定 |
| 5.4 实验结果 |
| 5.4.1 猪肉中己烯雌酚含量的测定结果 |
| 5.4.2 鱼肉中己烯雌酚含量的测定结果 |
| 5.4.3 饲料中己烯雌酚含量的测定结果 |
| 5.4.4 牛奶中己烯雌酚含量的测定结果 |
| 5.5 本章小结 |
| 结论与展望 |
| 一、结论 |
| 二、本论文的主要创新点 |
| 三、展望 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 附表 |
（7）新疆孕马结合雌激素产业化进程中关键技术研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 新疆孕马尿品质评价研究 |
| 实验一 新疆孕马尿中主要结合雌激素的TLC定性鉴别研究 |
| 1. 研究内容与方法 |
| 1.1 仪器、试剂与材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 实验二 新疆孕马尿中主要结合雌激素定量分析方法 |
| 1. 高效液相色谱法(HPLC) |
| 1.1 仪器、试剂与材料 |
| 1.2 实验方法与结果 |
| 1.3 讨论 |
| 2. 超高效液相色谱法(UPLC) |
| 2.1 仪器、试剂及材料 |
| 2.2 实验方法与结果 |
| 2.3 讨论 |
| 3. 液相色谱-质谱联用法(LC-MS) |
| 3.1 仪器、试剂及材料 |
| 3.2 实验方法与结果 |
| 4. 统计分析 |
| 5. 小结 |
| 第二部分 新疆孕马结合雌激素原料药质量评价方法研究 |
| 实验一 新疆孕马结合雌激素原料药HPLC-UV指纹图谱评价方法研究 |
| 1. 仪器、试剂与材料 |
| 2. 实验方法与结果 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 实验二 新疆孕马结合雌激素原料药与Premarin的LC-MS药学等效性评价研究 |
| 1. 仪器、试剂与材料 |
| 2. 实验方法与结果 |
| 2.1 溶液配制 |
| 2.2 色谱条件 |
| 2.3 质谱参数 |
| 2.4 测定方法 |
| 2.5 测定结果 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 实验三 新疆孕马结合雌激素原料药GC-MS药学等效性评价研究 |
| 1. 研究内容与方法 |
| 1.1 仪器、试剂与材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 第三部分 新疆孕马结合雌激素原料药未知成分分析研究 |
| 实验一 新疆孕马CE原料药与Premarin差异成分化学结构鉴定 |
| 1. 仪器、试剂与材料 |
| 2. 方法与结果 |
| 2.1 新疆孕马CE原料药与Premarin GC-MS指纹图谱的比较 |
| 2.2 Peak~# 28成分的质谱分析 |
| 2.3 Peak~# 37成分的质谱分析 |
| 2.4 Peak~# 31成分的质谱分析 |
| 2.5 Peak~# 34成分的质谱分析 |
| 2.6 Peak~# 28成分与对照品验证实验 |
| 2.7 4种成分在孕马结合雌激素原料药中结构分析 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 实验二新疆孕马CE原料药与Premarin共有成分的质谱解析 |
| 1. 仪器、试剂与材料 |
| 2. 方法与结果 |
| 2.1 标准图谱检索 |
| 2.2 质谱库检索无结果的其余10种成分的结构分析 |
| 2.3 结合雌激素原料药中成分分析结果 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 结论 |
| 创新 |
| 不足 |
| 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 天然雌激素色谱-质谱检测方法研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 |
| 个人简历 |
| 导师评阅表 |
（8）核糖体展示天然鼠源scFv文库筛选己烯雌酚抗体（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第一章 前言 |
| 1 典型环境内分泌干扰物:己烯雌酚的概况 |
| 1.1 己烯雌酚的物理性质 |
| 1.2 己烯雌酚的应用 |
| 1.3 己烯雌酚的毒副作用 |
| 1.4 己烯雌酚残留检测 |
| 1.4.1 气相色谱法 |
| 1.4.2 高效液相色谱法 |
| 1.4.3 薄层色谱法 |
| 1.4.4 化学发光法 |
| 1.4.5 放射免疫分析 |
| 1.4.6 荧光免疫分析 |
| 1.4.7 酶免疫分析技术 |
| 2 核糖体展示技术的研究进展 |
| 2.1 核糖体展示技术的原理 |
| 2.2 核糖体展示技术的优点 |
| 2.3 核糖体展示技术已经用于多种大分子的抗体筛选 |
| 2.4 体外分子进化 |
| 2.5 利用展示技术从非天然抗体库中筛选小分子污染物的抗体 |
| 2.6 利用展示技术从天然抗体库中筛选小分子污染物的抗体 |
| 3 研究目的及意义 |
| 第二章 单链抗体文库的构建 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 主要仪器 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 Trizol法提取鼠脾总RNA |
| 1.2.2 cDNA的合成 |
| 1.2.3 鼠源天然单链抗体文库的构建 |
| 1.2.3.1 VH基因片段的扩增 |
| 1.2.3.2 VL基因片段的扩增 |
| 1.2.3.3 linker连接片段的扩增 |
| 1.2.3.4 linker连接片段的序列正确性鉴定 |
| 1.2.3.5 scFv文库的构建 |
| 1.2.3.6 单链抗体文库的多样性鉴定 |
| 1.2.4 核糖体展示元件的扩增 |
| 1.2.4.1 T片段的扩增及序列鉴定 |
| 1.2.4.2 P片段的扩增及序列鉴定 |
| 1.2.5 单链抗体核糖体展示文库构建 |
| 1.2.5.1 T片段与单链抗体文库的连接 |
| 1.2.5.2 P片段与T+S的连接 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 小鼠脾脏总RNA的提取 |
| 2.2 VH,VL以及linker的扩增 |
| 2.3 Linker序列的鉴定 |
| 2.4 scFv文库的合成 |
| 2.5 scFv文库的序列鉴定 |
| 2.6 T片段和P片段的扩增及序列鉴定 |
| 2.7 核糖体展示文库的合成 |
| 3 讨论 |
| 3.1 小鼠脾脏总RNA的提取 |
| 3.2 单链抗体文库的构建 |
| 3.3 核糖体展示元件的扩增及文库的连接 |
| 第三章 单链抗体核糖体展示文库的质量鉴定 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 主要试剂 |
| 1.1.2 主要仪器 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 核糖体展示文库的可扩增性鉴定 |
| 1.2.2 核糖体展示文库的完整性与多样性鉴定 |
| 1.2.2.1 制备E.coli DH5α感受态细胞 |
| 1.2.2.2 核糖体展示文库的序列测定 |
| 1.2.3 核糖体展示文库的转录活性与反转录活性鉴定 |
| 1.2.3.1 核糖体展示文库的转录活性鉴定 |
| 1.2.3.2 核糖体展示文库的反转录活性鉴定 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 核糖体展示文库的可扩增性鉴定 |
| 2.2 核糖体展示文库的序列完整性及多样性鉴定 |
| 2.3 核糖体展示文库转录活性鉴定 |
| 2.4 核糖体展示文库反转录活性鉴定 |
| 3 讨论 |
| 第四章 利用核糖体展示技术筛选anti-DES单链抗体 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 主要试剂 |
| 1.1.2 主要仪器 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 羧基化的DES与氨基化磁珠的偶联及鉴定 |
| 1.2.1.1 羧基化的DES与氨基化磁珠的偶联 |
| 1.2.1.2 偶联后磁珠的鉴定 |
| 1.2.2 核糖体展示单链抗体文库体外转录与翻译 |
| 1.2.3 固相亲和筛选 |
| 1.2.4 液相亲和筛选 |
| 1.2.5 分离纯化mRNA |
| 1.2.6 纯化后mRNA的RT-PCR |
| 1.2.7 重新构建下一轮的RD模板 |
| 1.2.8 筛选后单链抗体文库的鉴定 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 体外筛选 |
| 2.2 第四轮,第五轮和第七轮筛选后的RT-PCR产物的序列测定 |
| 3 讨论 |
| 3.1 体外表达 |
| 3.2 亲和筛选及筛选效率的评价 |
| 3.3 RT-PCR扩增 |
| 3.4 筛选后序列分析 |
| 第五章 筛选后单链抗体基因的表达质粒的构建、蛋白表达 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 质粒与菌株 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.1.3 主要仪器 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 筛选后单链抗体基因的扩增 |
| 1.2.2 重组scFv原核表达质粒构建 |
| 1.2.3 制备E.coli BL21(DE3)感受态细胞 |
| 1.2.4 表达质粒pTIG-TRX-scFv的构建和鉴定 |
| 1.2.5 筛选后单链抗体蛋白的表达 |
| 1.2.6 scFv表达蛋白Western Blot的检测 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 pTIG-TRX-scFv阳性克隆子验证 |
| 2.2 pTIG-TRX-scFv的诱导表达 |
| 2.3 Western Blot鉴定表达的单链抗体 |
| 3 讨论 |
| 第六章 单链抗体的性质鉴定 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 主要试剂 |
| 1.1.2 主要仪器 |
| 1.1.3 主要试剂的配制 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 ELISA法测定单链抗体与抗原结合活性 |
| 1.2.2 间接竞争ELISA鉴定单链抗体与半抗原DES的特异结合活性 |
| 1.2.3 筛选有竞争活性的单链抗体序列比对 |
| 1.2.4 用SPR测定筛选后单链抗体的亲和力 |
| 1.2.4.1 抗原的固定 |
| 1.2.4.2 动力学常数的测定 |
| 1.2.5 可溶性scFv的纯化 |
| 1.2.5.1 Ni柱再生 |
| 1.2.5.2 Ni柱纯化 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 单链抗体结合活性的检测 |
| 2.2 筛选后单链抗体的竞争活性的检测 |
| 2.3 有竞争活性的单链抗体序列比对 |
| 2.4 SPR分析单链抗体的亲和力 |
| 2.5 单链抗体的纯化 |
| 3 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（9）医药中苯系物和丙烯酰胺的色谱分析方法研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 综述 色谱在医药分析中的应用 |
| 1.1 医药色谱分析样品前处理方法 |
| 1.2 气相色谱在医药分析中的应用 |
| 1.3 高效液相色谱在医药分析中的应用 |
| 1.4 医药中苯、丙烯酰胺和糖的分析研究 |
| 第2章 顶空单液滴微萃取-气相色谱法测定马来酸氯苯那敏及水中苯系物残留量 |
| 2.1 实验部分 |
| 2.2 结果与讨论 |
| 2.3 马来酸氯苯那敏中苯系物的测定 |
| 2.4 污水中苯系物的测定 |
| 2.5 结论 |
| 第3章 离子排斥色谱法测定焦麦芽中的丙烯酰胺 |
| 3.1 实验部分 |
| 3.2 讨论 |
| 第4章 柱前衍生化高效液相色谱法测定炮制中草药中的单糖组成 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验部分 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 硕士学位期间已发表的学术论文 |
| 致谢 |
（10）醋酸甲羟孕酮的单克隆抗体及ELISA检测技术研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 文献综述 |
| 第一章 兽药残留及其研究进展 |
| 1.1 兽药残留的概念与种类 |
| 1.1.1 兽药残留的概念 |
| 1.1.2 引起兽药残留的常见兽药 |
| 1.2 兽药残留的危害 |
| 1.2.1 毒性作用 |
| 1.2.2 过敏和变态反应 |
| 1.2.3 致癌、致畸、致突变作用 |
| 1.2.4 破坏胃肠道菌群平衡 |
| 1.2.5 细菌耐药菌株的产生 |
| 1.2.6 对临床用药的影响 |
| 1.2.7 兽药残留对生态环境的影响 |
| 1.3 兽药残留的监控 |
| 1.3.1 欧盟食品中兽药残留物监控法规制定和发展 |
| 1.3.2 管理机构 |
| 1.4 兽药残留检测方法 |
| 1.4.1 兽药残留检测方法定义 |
| 1.4.2 兽药残留检测方法分类 |
| 1.5 我国兽药残留现状与兽药残留监控 |
| 1.6 兽药残留产生原因分析 |
| 1.6.1 非法使用违禁或淘汰药物 |
| 1.6.2 不遵守休药期规定 |
| 1.6.3 滥用药物 |
| 1.6.4 违背有关标签的规定 |
| 1.6.5 屠宰前用药和贮藏用药 |
| 1.7 小结与展望 |
| 第二章 醋酸甲羟孕酮与小分子物质免疫学分析 |
| 2.1 欧盟激素甲羟孕酮污染事件 |
| 2.1.1 MPA 事件起因 |
| 2.1.2 MPA 污染产品调查 |
| 2.1.3 欧盟的对策 |
| 2.1.4 MPA 事件的启示 |
| 2.2 醋酸甲羟孕酮（MPA）的研究进展 |
| 2.2.1 孕激素与MPA |
| 2.2.2 MPA 的临床应用与研究 |
| 2.2.3 MPA 在畜牧业应用与研究 |
| 2.2.4 MPA 残留的危害性 |
| 2.2.5 MPA 的检测方法 |
| 2.3 小分子物质的免疫学分析技术 |
| 2.3.1 免疫半抗原的衍生 |
| 2.3.2 人工抗原的合成鉴定 |
| 2.3.3 抗体制备 |
| 2.3.4 免疫学分析方法 |
| 2.4 本研究的背景、路线和目的意义 |
| 试验研究 |
| 第三章 醋酸甲羟孕酮人工抗原的研究 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 试剂 |
| 3.1.2 仪器 |
| 3.1.3 试验动物 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 人工抗原的合成 |
| 3.2.2 人工抗原的鉴定 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 人工抗原合成结果 |
| 3.3.2 人工抗原反应原性检测结果 |
| 3.3.3 人工抗原免疫原性检测结果 |
| 3.3.4 人工抗原免疫原性检测结果 |
| 3.3.5 人工抗原SDS-PAGE 鉴定 |
| 3.3.6 MPA 人工抗原的紫外线扫描鉴定结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 抗原与半抗原 |
| 3.4.2 人工抗原的合成 |
| 3.4.3 人工抗原的鉴定 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 MPA 单克隆抗体的制备与鉴定 |
| 4.1 试验材料 |
| 4.1.1 主要试剂 |
| 4.1.2 主要仪器 |
| 4.1.3 器械和器皿 |
| 4.1.4 实验动物和细胞 |
| 4.2 试验方法 |
| 4.2.1 动物免疫 |
| 4.2.2 抗体检测 |
| 4.2.3 单克隆抗体的制备 |
| 4.2.4 单克隆抗体特性鉴定 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 间接ELISA 方法的优化结果 |
| 4.3.2 免疫效果检测 |
| 4.3.3 单克隆抗体细胞株的建立 |
| 4.3.4 单克隆抗体特性的鉴定 |
| 4.4 讨论 |
| 4.4.1 半抗原与单克隆抗体 |
| 4.4.2 动物免疫对单克隆抗体制备的影响 |
| 4.4.3 阳性杂交瘤细胞的筛选 |
| 4.4.4 单克隆抗体的特性鉴定 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 MPA 检测间接竞争ELISA 方法的研究 |
| 5.1 材料 |
| 5.1.1 试剂 |
| 5.1.2 仪器 |
| 5.2 方法 |
| 5.2.1 单克隆抗体的纯化 |
| 5.2.2 抗原包被检测MPA 间接竞争ELISA 方法的建立 |
| 5.2.3 保存期试验 |
| 5.2.4 间接竞争ELISA 的初步检测应用 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 MPA 单克隆抗体的纯化鉴定 |
| 5.3.2 抗原包被检测MPA 间接竞争ELISA 方法的建立 |
| 5.3.3 保存期试验 |
| 5.3.4 间接竞争ELISA 的初步检测应用 |
| 5.4 讨论 |
| 5.4.1 单克隆抗体的纯化 |
| 5.4.2 抗原包被MPA 检测ELISA 方法 |
| 5.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 中英文对照 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
四、薄层色谱法同时鉴别复方己烯雌酚栓的四种成分（论文参考文献）
- [1]四制香附和蒸陈皮的质量评价研究[D]. 刘聪. 山西医科大学, 2021(01)
- [2]肤康凝胶的药学及药效学研究[D]. 周艺璇. 辽宁中医药大学, 2019(02)
- [3]畜禽肉中雄激素及同化激素检测方法的研究与应用[D]. 高旭东. 西北民族大学, 2016(03)
- [4]动物源性食品中性激素残留的危害及检测方法[J]. 高旭东,黄鑫,郝宝成,陈士恩,梁剑平. 黑龙江畜牧兽医, 2015(21)
- [5]己烯雌酚残留免疫学快速检测研究[D]. 杨兴东. 四川农业大学, 2015(12)
- [6]荧光定量免疫层析法在己烯雌酚检测中的应用[D]. 李静宇. 华南理工大学, 2016(02)
- [7]新疆孕马结合雌激素产业化进程中关键技术研究[D]. 姚军. 新疆医科大学, 2012(05)
- [8]核糖体展示天然鼠源scFv文库筛选己烯雌酚抗体[D]. 孙亚楠. 华中农业大学, 2011(08)
- [9]医药中苯系物和丙烯酰胺的色谱分析方法研究[D]. 韩康. 河北大学, 2008(S1)
- [10]醋酸甲羟孕酮的单克隆抗体及ELISA检测技术研究[D]. 杨泽晓. 西北农林科技大学, 2008(12)